稻胚凝集素基因的克隆、序列分析及表达

以水稻基因组ＤＮＡ为模板，以特异引物经聚合酶链式反应方法扩增出稻胚凝集素基因并克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）的ＳｍａⅠ位点。序列分析表明，克隆到的基因片段大小为７８１ｂｐ，没有内含子，编码１条长２２７个氨基酸、分子量约２３ｋＤ的肽链，其中Ｎ－端２８个氨基酸是信号肽。与报道的稻胚凝集素ｃＤＮＡ序列进行顺序同源性比较，发现它们之间有很高的同源性（９９．７４％），其编码区第１６７和５６３位各有１个碱基突变，但两者均为同义突变，并未造成氨基酸序列的变化。回收插入片段克隆到表达载体ｐＲＳＥＴ－Ｃ中，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中得到表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱扫描结果表明，融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的５％。鉴于凝集素可能具有抗病虫害的能力，稻胚凝集素基因的克隆及其在原核系统中的成功表达有助于我们进一步揭示稻胚凝集素在植物防御以及其他生理活动中的功能。

甲壳素亲和层析分离纯化稻胚凝集素

稻胚凝集素 ( RGL)能与 N-乙酰氨基葡萄糖 ( Glc NAc)或其聚合物专一性结合。作者利用 RGL与 Glc NAc的天然多聚物——甲壳素有亲和作用的特性 ,以甲壳素为亲和层析固相物 ,从稻胚中分离出一种分子量、糖结合专一性、等电点等与文献报告的 RGL性质一致的凝集素。

水稻根际高效解磷菌菌株的筛选

以选择性培养基从水稻根际分离出81株解磷细菌,再利用FITC标记的稻胚凝集素从中筛选出21株能够和稻胚凝集素发生特异性作用的解磷菌株。将这些菌株在培养液中振荡培养7d,分别取10ml培养液进行消煮,测定其含磷量;选择解磷能力强的7个菌株在平板上进行水稻栽培试验,结果表明有2株解磷菌株对水稻生长有明显的促生效果,鲜重增产幅度超过45%,可作为研制微生物肥料的出发菌株。