曲霉及穗霉侵染对银杏种子采后生理的影响

研究了常温贮藏过程中 ,曲霉 (Aspergillusspp .)及穗霉 (Spicariasp .)侵染对银杏 (GinkgobilobaL .)种子采后生理的影响 .结果表明 :在 2 5℃ ,RH85 %的条件下 ,接种侵染的银杏种子的病害症状各不相同 .接种第 18d ,与CK组比较 ,各接种组的呼吸强度 (RI)增加了 198.4～ 5 6 4.7mg/ (kg·h) ,相对电导率 (REC)增加了 8.91%～ 18.5 5 % ,失水率增加 32 .0～ 2 12 .6g/kg ,达到极显著差异水平 (P <0 .0 1) .Spicariasp .组的RI、膜透性和失水率均大于Aspergillusspp .组 .上述 3项生理指标上升的快慢是不同步的 ,因不同病原菌而异 .接种 12或 15d时 ,接种组淀粉和蛋白质相对含量均高于CK组 ,并达到显著差异水平 (P <0 .0 5 ) .

寄生线虫真菌黑葡萄穗霉的分离与鉴定

利用水琼脂平板撒土——腐生线虫诱导法从根结线虫危害的作物根际土壤分离到一株线虫寄生真菌。PDA平板上形态观察显示,菌落黑色凸起,气生菌丝较多,分生孢子梗伞状,产孢结构为瓶状小梗,分生孢子椭圆或近圆形,未成熟孢子光滑,深棕色到黑色,成熟时黑色有棘。经分子鉴定,该菌为黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)。该菌在水琼脂平板上可生长,菌丝稀疏,可侵染并寄生腐生线虫Panagrellus redivius.

黑色葡萄状穗霉纤维素酶的纯化和性质

将筛选所得的黑色葡萄状穗霉 (Stachybotrys atra) S6 0 7发酵培养 96 h,发酵液离心去除菌体 ,上清液经超滤、Sephadex- G10 0柱层析、DEAE- Sepharose fast flow弱阴离子交换层析、CM-Sepharose fast flow阳离子交换层析、Q- Sepharose fast flow强阴离子交换层析及置换层析等步骤 ,得到了 4种电泳纯的酶组分 ,即内切纤维素酶 EG 、EG 、EG 和 β葡萄糖苷酶 (β Gase)。利用 SDS- PAGE测得 4种酶组分的分子量分别是 78.3、5 8.1、72 .4和 5 5 .6 k Da。 3种内切酶组分的最适温度都是 5 0℃ ,β-葡萄糖苷酶为 5 5℃ ,它们的最适 p H值分别是 6 .0、7.0、6 .5和 6 .0。底物专一性的实验表明 ,内切酶 、 、 都可作用于木聚糖。

黑色葡萄状穗霉S607耐碱性纤维素酶发酵条件的研究

研究了耐碱性纤维素酶生产菌株黑色葡萄状穗霉S6 0 7(StachybotrysatraS6 0 7)的产酶条件。结果表明 ,S6 0 7的最适生长和产酶 pH为 7.0 ,最适产酶温度为 2 8℃ ,摇床最适转速为 180r/min。在以 2 .0 %纤维素粉和 2 .5 %的麸皮作为碳源时产酶最高 ,添加含 (NH4 ) 2 SO4 、尿素和蛋白胨的复合氮源对生长和产酶有明显的促进作用。在最适培养条件下 ,发酵周期为 4～ 5d ,发酵液中CMC酶活为 2 .12IU /mL ,FP酶活为 1.0 3IU /mL ,β 葡萄糖苷酶活为 0 .86IU /mL。

葡萄穗霉木聚糖酶XYA6205在黑曲霉中的表达及酶学特性分析

木聚糖酶是涉及半纤维素水解的主要酶,具有重要的应用价值。将葡萄穗霉上可能为木聚糖酶的基因xya6205(含信号肽)克隆到载体pGm上,进而通过原生质体-PEG转化到黑曲霉G1上。得到的目的转化子经过摇瓶培养发酵,SDS-PAGE分析表明,产生了大小为20 kD左右的蛋白条带。DNS法测定1 L发酵液5 d酶活,比活达392 U/mg,其最适温度为50℃,最适pH为5.8,在不同pH缓冲液中处理18 h后,最高仍有83%残余酶活。

葡萄穗霉属真菌次级代谢产物及生物活性研究

葡萄穗霉(Stachybotrys)属真菌分布广泛,包括了以黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)为代表的Stachybotrys complementi,Stachybotrys kampalensi,Stachybotrys atra等多个种.葡萄穗霉能产生多种毒素,严重影响人类的健康和生活,因而受到了科学界广泛关注.综述了葡萄穗霉属真菌所产生的次级代谢产物以及生物活性.

黑葡萄穗霉的研究进展

黑葡萄穗霉是一种腐生菌,能够产生多种毒素,给人类生活和健康带来严重影响。本文就黑葡萄穗霉的形态特征、生长特性、抗原组分及基因、所产毒素及其它生物活性产物、毒理学实验和检测方法等进行综述。

穗霉属26-13-4菌株产植酸酶的酶学性质研究

从黑龙江大豆根部土壤中分离一株穗霉属菌株,对其诱变菌株26-13-4所产植酸酶进行研究。该植酸酶对植酸钠的适宜水解温度为45℃、适宜pH为5.0,在4、25和45℃下热稳定性好,在pH4.0～7.0时植酸酶比较稳定;低浓度的Fe2+、Mn2+、Ca2+对酶活性有促进作用,而Cu2+、Mg2+、Zn2+、Al3+以及高浓度Mn2+、Ca2+、Fe3+对酶活性有抑制作用;K+、低浓度的Fe3+对酶活没有任何影响。结果表明,该植酸酶以植酸钠为底物时的米氏常数Km为4.4×10-5mol·L-1。

葡萄穗霉中β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析

以黑曲霉(Aspergillus niger)G1为宿主菌表达葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)β-葡萄糖苷酶。对葡萄穗霉进行全基因组分析得到编码β-葡萄糖苷酶的基因,设计引物,通过PCR扩增得到g10158,将其克隆到载体pGm上,并转化到黑曲霉G1中,经amdS二次平板筛选,PCR方法验证,获得高效表达该基因的生物工程菌株G1-pGm-g10158-13。SDS-PAGE检测结果显示,表达蛋白的分子大小为87.9 kD,阴性对照中无此条带。粗酶液酶学性质表明,该β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为50℃,最适pH为4.8。在最适pH和最适温度下,粗酶液活性达1 856.48 U/mL。葡萄穗霉β-葡萄糖苷酶在黑曲霉G1中可表达,并具有较高的活性。

纸葡萄穗霉降解β-胡萝卜素的产香研究

从采自云南昆明的22份不同陈化时间的烟草样品中筛选到6株可降解β-胡萝卜素的真菌。菌株YNCA9037可降解β-胡萝卜素,获得具甜木香味的发酵产物,经菌落形态、显微形态及转录间隔区(ITS)序列分析进行菌株分类鉴定,菌株YNCA9037初步鉴定为纸葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)。对菌株YNCA9037降解β-胡萝卜素的产香条件进行初步研究,其较佳产香的条件为:pH 6.5,发酵温度28℃,发酵时间72 h,β-胡萝卜素添加量0.2%。菌株YNCA9037降解β-胡萝卜素的发酵产物经气质联用(GC-MS)法分析,检测到致香物质β-环柠檬醛和β-紫罗兰酮。

中国东部地区黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)菌多样性分析及其生态位研究

黑葡萄穗霉能产生多种毒素,严重影响人类健康和生活,因而受到了科学界广泛关注。从中国东部地区不同生境中,采集261份样品,分离获得丝孢菌13属33种,其中黑葡萄穗霉1142株,对其菌株资源多样性和生态位进行研究,目的是为我国防控黑葡萄穗霉病提供理论指导和资源支持。结果表明:黑葡萄穗霉在纸片、墙壁、石棉板和石膏板中分布较广,其优势度分别为91%、90%、91%和89%;不同生境中其分布数量和丰富度各不相同,物种丰富度最大的是土壤,最小的为石膏板和空气;生态位宽度为4.5138,属于广生态位种;不同生境中其群落相似性系数也各不相同,石膏板和墙壁相似性系数最大为0.7964;与G7黑乌刺霉菌生态位重叠指数最大为0.8989,与其他种类生态位重叠指数较低。黑葡萄穗霉菌在我国东部地区广泛存在,其生态分布、发生规律与生境中纤维素、钙质和湿度有密切关系。

葡萄穗霉属真菌Stachybotrys sp.CPCC 401591中phenylspirodrimane类化合物抗肿瘤活性研究

本论文以葡萄穗霉属真菌Stachybotrys sp.CPCC 401591为研究对象,对其phenylspirodrimane(PSM)类化合物进行化学分离并评价单体化合物抗肿瘤活性。采用OSMAC(one strain many compounds)技术对菌株CPCC 401591发酵培养基优化,并结合LC-MS/MS质谱分子网络分析、正相硅胶柱、反相硅胶柱以及半制备高效液相色谱等分离技术,对目标菌株CPCC 401591发酵产物的乙酸乙酯提取相,进行化合物分离纯化。结合质谱、核磁波谱数据、钼试剂诱导圆二色谱(CD)以及文献检索比对,共分离获得8个PSM类单体化合物。同时,采用CCK-8比色法对化合物1~8的抗肿瘤活性进行评价。结果表明:化合物1~8均为聚酮来源杂萜分子,分别为chartarlactam H(1)、chartarlactam F(2)、stachybotrin(3)、chartarlactam K(4)、stachybotrylactam(5)、F1839-A(6)、Mer-VGF724B(7)、3α-hydroxyl-N-isopropyl carboxyl-phenylspirodrimane(8)。化合物对人肝癌细胞株HepG2、人宫颈癌细胞株HeLa和人结肠癌细胞株HCT116具有较好的抑瘤活性。本研究丰富了该菌次级代谢产物的结构多样性,也为从葡萄穗霉属类真菌中发现更多的抗肿瘤活性分子提供科学依据。

蛛生真菌中一枝穗霉属新种

本文报道了采自于贵州省贵阳市黔灵山公园的一种寄生蜘蛛的枝穗霉属新种,蛛生枝穗霉Clonostachys aranearum。此新种具有两型产孢结构,A-型产孢结构:轮枝菌型,瓶梗散生,通常2–5个形成轮生体,圆柱形,至顶端略微变细,17.3–27×1.1–1.6μm。B-型产孢结构:帚状,5.4–16.2×1.1–2.2μm,窄楔形,渐细。大量产孢时,分生孢子叠瓦状排列。分生孢子表面光滑,透明,3.2–5.4×1.1–2.1μm,椭圆形,常弯曲。模式标本GZAC QLS0625保存在贵州大学菌种保藏中心。

葡萄穗霉属真菌Stachybotrys sp.CPCC 401591的抗肿瘤活性次级代谢产物

以葡萄穗霉属真菌Stachybotrys sp.CPCC 401591为研究对象,对其次级代谢产物进行化学分离并评价单体化合物抗肿瘤活性。采用溶剂萃取、正相硅胶柱、反相硅胶柱以及半制备高效液相色谱等分离技术,对目标菌株CPCC401591发酵产物的乙酸乙酯提取相进行以抗肿瘤活性为导向的化合物分离纯化。根据理化性质、波谱数据分析以及文献检索比对,共分离鉴定了6个单体化合物,分别为satratoxin G(1)、mytoxin A(2)、12′-hydroxyroridin E(3)、roridin E(4)、4-acetoxy-12,13-epoxy-9-trichothecene(5)和arthproliferin A(6)。其中,化合物1–5为单端霉烯类化合物,化合物6为聚酮类杂萜化合物。采用CCK-8比色法对化合物1-6的抗肿瘤活性进行测试。测试结果显示,化合物1-6对人宫颈癌细胞HeLa和人乳腺癌细胞MCF-7具有非常显著的抑制活性,化合物4-5对人肺癌细胞A549具有较好的抑制作用。该研究为从葡萄穗霉属类真菌发现更多的抗肿瘤活性分子提供了依据和思考。

葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表达及酶学性质

【目的】以黑曲霉(Aspergillus niger)为宿主菌来表达葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)中的β-甘露聚糖酶(β-mannanase)基因。【方法】通过对葡萄穗霉全基因组进行比对分析,获得编码β-甘露聚糖酶基因s16942和s331的序列信息,通过设计引物,PCR扩增得到基因s16942和s331,连接到载体pGm上,并转化到黑曲霉中,获得的转化子经过amdS二筛平板复筛,测序验证,得到高效表达此基因的工程菌株G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331。【结果】SDS-PAGE检测结果显示,G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331表达的蛋白分子量大小分别约为48 kDa和60 kDa,且阴性对照中没有此条带。粗酶液的酶学性质表明,G1-p Gm-s16942表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为60°C,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达521 U/mL;G1-p Gm-s331表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为50°C,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达84 U/mL。【结论】本研究首次将葡萄穗霉的β-甘露聚糖酶基因转化到黑曲霉中并成功表达,并且具有较高的活性。

河南山坡土壤中三种葡萄穗霉科真菌鉴定

葡萄穗霉属(Stachybotrys)及其近似属隶属于葡萄穗霉(Stachybotryaceae)o此类真菌多为腐生,在土壤中普遍存在,潮湿的室内环境中也较为常见。有报道此类真菌为室内污染菌,可引发人类的多种疾病,也是多种植物的致病菌。然而,该属的一些真菌也可产生有益的次生代谢物质,具有很大的开发价值。本研究我们对河南省平顶山市鲁山县的32份土样进行分离纯化,获得了2株无色穗抱M(Achroiostachys)1株葡萄穗霉属(Stachybotrys)M菌°通过对所分离到的葡萄穗霉科物种展开5个基因(Internal Transcribed Spacer region,beta-tubulin,Translation elongation factor 1-alpha,Calmodulin,RNA polymerase U largest subunit 2)测序、比对,构建了分子系统树并对葡萄穗霉属及其近似属进行系统发育分析。在形态上,Achroiostachys属也以其透明、光滑的分生抱子梗和分生抱子与Stachybotrys属区分。在系统发育树上Achroiostachys与Stachybotrys两属也明显的分为了两大分枝。结合形态描述和系统发育数据确定这三株真菌的分类地位,分别为:光亮无色穗抱(A chroiostachys levigaia),桦树无色穗抱(Achroiostachys betulicola)和纸葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)。无色穗抱属(Achroiostachys)真菌在我国是首次报道。

拮抗烟草疫霉的枝穗霉菌株筛选

【背景】烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)引起的烟草黑胫病(tobacco black shank)是烤烟生产上重要的土传根茎病害之一,生产上防治困难。【目的】筛选对病原菌具有强拮抗能力的有益微生物菌株是开展生物防治的基础。【方法】采用平板对峙法筛选对烟草疫霉具有拮抗作用的枝穗霉菌株。根据枝穗霉在烟草疫霉菌落上的覆盖程度和产孢量,以及对烟草疫霉菌丝、孢囊梗和孢子囊的缠绕情况,将枝穗霉的拮抗能力划分为强、中等、弱和无4个等级。【结果】供试8种65株枝穗霉中,6株具有强拮抗能力、27株具有中等拮抗能力、22株具有弱拮抗能力、10株无拮抗能力;不同枝穗霉菌株对烟草疫霉的抑制率大小为20.0%-86.7%。【结论】粉红枝穗霉(Clonostachys rosea)菌株7901、11361和亚麻生枝穗霉(C.byssicola)5072、6729、7507及条孢枝穗霉(C.grammicospora)6730对烟草疫霉具有强拮抗能力,这为后续盆栽试验及作用机理研究等提供了种质资源。

黑葡萄穗霉高环境适应性

为探究纤维素降解菌黑葡萄穗霉的环境适应机制,分别将该属菌株S05培养于不同pH、不同碳源培养基中,检测其生长及胞外糖苷水解酶表达情况,并利用糖苷水解酶活性电泳展示各主要酶组分的多样性及其催化性质.结果显示,黑葡萄穗霉S05生长pH范围较宽,在pH 4.5-9.5范围内均能生长,且更适于中性偏碱性环境;胞外主要糖苷水解酶组分最适pH多为pH 6.5-8.5,pH稳定性较强;该菌株具有精细的表达调控体系,能及时根据环境条件的变化调整酶组分的组成.综上表明黑葡萄穗霉S05的高环境适应性与其胞外糖苷水解酶组分的性质密切相关,对其酶组分的深入研究可为寻找工业所需中性及偏碱性纤维素酶的来源提供可能.

黑葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)单端孢霉烯族毒素菌株的分子检测方法

加强真菌毒素的监测和系统性研究已成为国内外学者关注的热点,建立简便、高效、低成本的现场快速筛选检测方法是食品安全领域的一项急迫而重要的研究内容。以47株黑葡萄穗霉菌株和曲霉、链格孢、弯孢、青霉4株真菌菌株为研究对象,利用Tri5基因PCR扩增技术和高效液相色谱HPLC技术,对黑葡萄穗霉产毒菌株进行了分子检测,确认和验证了其产毒特性,为葡萄穗霉属毒素检测领域提供了理论指导和技术支持。试验结果表明,47株黑葡萄穗霉菌株中除15号菌株外,其电泳均出现约454 bp的特征型条带,而其他菌株没有。回收其扩增产物并测定基因序列,验证该基因序列与S. charturum和S. chlorohalonata同源性分别达99%和100%。除此之外,又采用高效液相色谱HPLC技术对lyu20110019号菌株发酵液样品的产毒特性进行了测定,结果表明,lyu20110019号菌株可产生NIV毒素。由此可知,利用Tri5基因设计的特异引物可以用来检测黑葡萄穗霉产毒菌株。