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噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒检测中的应用
被引量:
4
1
作者
刘崇海
皮光环
+3 位作者
王莉佳
赵晓东
蒋利萍
杨锡强
《川北医学院学报》
CAS
2010年第6期509-512,共4页
目的:探讨噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒滴度检测中的应用。方法:用噻唑蓝(MTT)代替常规的中性红作为染色剂进行空斑形成实验MDCK和Hep-2细胞在12孔板上形成单层后,分别感染流感病毒和呼吸道合胞病毒,加入单层琼脂糖代替传统双层琼...
目的:探讨噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒滴度检测中的应用。方法:用噻唑蓝(MTT)代替常规的中性红作为染色剂进行空斑形成实验MDCK和Hep-2细胞在12孔板上形成单层后,分别感染流感病毒和呼吸道合胞病毒,加入单层琼脂糖代替传统双层琼脂糖培养3-4天,用噻唑蓝(MTT)代替常规的中性红作为染色剂计数空斑。结果:⑴MTT法空斑形成实验检测流感病毒和RSV病毒滴度操作简单,时间短;⑵与常规中性红法空斑形成实验比较检测病毒滴度没有差异;⑶MTT法可以避免假空斑形成。结论:MTT法空斑形成实验可替代中性红法空斑形成实验,且更快速、准确。
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关键词
空斑形成实验
噻唑蓝(MTT)
流感病毒
呼吸道合胞病毒
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职称材料
呼吸道合胞病毒空斑形成实验的条件优化
被引量:
3
2
作者
于莉
吴璇
+1 位作者
汪旻旻
黄升海
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2016年第4期595-598,共4页
采用空斑形成实验方法测定呼吸道合胞病毒(RSV)的滴度,加入覆盖层倒置培养27、30、34、40h后经固定染色、剔除覆盖层后,可见清晰透明空斑,边缘清晰、形态均为圆形或类圆形,空斑直径分别为1、1.5、3、5mm左右。加入覆盖层后培养病毒的...
采用空斑形成实验方法测定呼吸道合胞病毒(RSV)的滴度,加入覆盖层倒置培养27、30、34、40h后经固定染色、剔除覆盖层后,可见清晰透明空斑,边缘清晰、形态均为圆形或类圆形,空斑直径分别为1、1.5、3、5mm左右。加入覆盖层后培养病毒的时间可以影响RSV最终所形成的空斑大小,并且随着时间的延长空斑逐渐增大,在30~34h所形成的空斑大小最佳,易于计数。病毒的稀释度也会影响空斑最终形成的数量,且随着稀释度的增加,空斑数量逐渐减少。
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关键词
呼吸道合胞病毒
空斑形成实验
甲醛-结晶紫
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职称材料
绿色荧光标记重组人偏肺病毒空斑形成滴度测定方法的建立
被引量:
2
3
作者
余春梅
陈昕
+3 位作者
张金辉
王永
步志高
赵晓东
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期771-774,共4页
目的 建立用于绿色荧光标记的重组人偏肺病毒(GFP-rhMPV)空斑形成滴度测定方法.方法 基因组中插入绿色荧光蛋白基因的hMPV全序列cDNA质粒和主要蛋白质表达质粒转入细胞293T后获得感染性重组hMPV.GFP-rhMPV在Vero-E6细胞中连续传代提...
目的 建立用于绿色荧光标记的重组人偏肺病毒(GFP-rhMPV)空斑形成滴度测定方法.方法 基因组中插入绿色荧光蛋白基因的hMPV全序列cDNA质粒和主要蛋白质表达质粒转入细胞293T后获得感染性重组hMPV.GFP-rhMPV在Vero-E6细胞中连续传代提升病毒滴度并保存.将等倍稀释的重组病毒液接种常规制备的Vero-E6细胞单层,用含或不含胰酶的低熔点琼脂精凝胶覆盖细胞,孵育一定时间后,采用荧光显微镜下计数荧光空斑数和抗原抗体蓝斑形成法计算病毒滴度.结果 感染后3 d,荧光显微镜下GFP-rhMPV可在低熔点琼脂糖凝胶覆盖层下形成分界较为清晰的绿色荧光集落,接种后3 d荧光空斑相对独立,便于计数.蓝斑形成法在感染后第5天蓝斑较大,易观察.此前拯救获得的GFP-rhMPV在宿主细胞Vero-E6中的复制滴度可达1×10^6 PFU以上.结论 成功建立了GFP-rhMPV的空斑形成实验滴度定量检测方法,为hMPV的致病机制、防治手段研究奠定了基础.
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关键词
人偏肺病毒
空斑形成实验
滴度测定
原文传递
表面蛋白烯醇化酶Enolase在S.suis 2感染中的角色
被引量:
2
4
作者
孙雯
潘秀珍
《井冈山大学学报(自然科学版)》
2010年第3期45-48,共4页
目的通过克隆表达,在获得具有酶活性的猪链球菌2型(S.suis2)05ZYH33重组烯醇化酶Enolase蛋白的基础上,旨在继续探索其在细菌粘附和引发免疫下调作用中的角色。方法流式细胞术(FCM)、Hep2细胞粘附竞争试验、免疫空斑试验。结果流式细胞术...
目的通过克隆表达,在获得具有酶活性的猪链球菌2型(S.suis2)05ZYH33重组烯醇化酶Enolase蛋白的基础上,旨在继续探索其在细菌粘附和引发免疫下调作用中的角色。方法流式细胞术(FCM)、Hep2细胞粘附竞争试验、免疫空斑试验。结果流式细胞术FCM的细胞定位显示Enolase可以部分存在S.suis205ZYH33细菌的表面;Hep2细胞粘附竞争试验表明猪链球菌表面Enolase参与细菌对宿主细胞的黏附作用;免疫空斑实验的结果揭示Enolase在抑制宿主特异性免疫应答中发挥作用。结论 Enolase作为一个表面蛋白,确实在S.suis2感染中扮演一定的角色。
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关键词
猪链球菌2型
烯醇化酶Enolase
流式细胞术
黏附
溶血
空斑形成实验
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职称材料
鼠衣原体毒力基因的筛选和基因差异型菌株的建立
被引量:
3
5
作者
周洲
吴移谋
+3 位作者
谭钢
陈丽丽
李忠玉
钟光明
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期1561-1568,共8页
【目的】探讨鼠衣原体(Chlamydia muridarum,Cm)标准株与减毒株全基因组序列中存在的差异,筛选毒力基因并建立不同基因型的单克隆菌株,为后续致病机制的研究奠定基础。【方法】将Cm标准株G0和减毒株G28以高通量测序法进行全基因组测序,...
【目的】探讨鼠衣原体(Chlamydia muridarum,Cm)标准株与减毒株全基因组序列中存在的差异,筛选毒力基因并建立不同基因型的单克隆菌株,为后续致病机制的研究奠定基础。【方法】将Cm标准株G0和减毒株G28以高通量测序法进行全基因组测序,通过全基因组序列比对分析并筛选潜在的毒力相关基因;经空斑形成实验(Plaque assay)在混合菌G0和G28中大量挑取空斑,以毒力靶基因的PCR测序鉴定从G0和G28中筛选含有不同毒力基因型的单克隆菌株。【结果】全基因测序结果显示Cm G0与G28的TC0412、TC0237和TC0668基因明显不同。通过挑取空斑初步筛选了111个空斑样品,通过3个毒力基因的PCR测序鉴定最终获得了G0和G28来源的56个单克隆菌株,并根据TC0412蛋白型分成B3、D1和E1三组,每组中含有TC0237和TC0668基因差异性菌株。【结论】Cm的致病能力可能与TC0412、TC0237和TC0668基因有关,筛选获得的单克隆菌株通过分组匹配后可用于后续的毒力基因功能研究。
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关键词
鼠衣原体
毒力基因
筛选
空斑形成实验
原文传递
题名
噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒检测中的应用
被引量:
4
1
作者
刘崇海
皮光环
王莉佳
赵晓东
蒋利萍
杨锡强
机构
川北医学院附属医院儿科
重庆医科大学附属儿童医院免疫室
出处
《川北医学院学报》
CAS
2010年第6期509-512,共4页
文摘
目的:探讨噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒滴度检测中的应用。方法:用噻唑蓝(MTT)代替常规的中性红作为染色剂进行空斑形成实验MDCK和Hep-2细胞在12孔板上形成单层后,分别感染流感病毒和呼吸道合胞病毒,加入单层琼脂糖代替传统双层琼脂糖培养3-4天,用噻唑蓝(MTT)代替常规的中性红作为染色剂计数空斑。结果:⑴MTT法空斑形成实验检测流感病毒和RSV病毒滴度操作简单,时间短;⑵与常规中性红法空斑形成实验比较检测病毒滴度没有差异;⑶MTT法可以避免假空斑形成。结论:MTT法空斑形成实验可替代中性红法空斑形成实验,且更快速、准确。
关键词
空斑形成实验
噻唑蓝(MTT)
流感病毒
呼吸道合胞病毒
Keywords
Plaque forming assay
Thiazolyl blue(MTT)
Influenza virus
RSV
分类号
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
呼吸道合胞病毒空斑形成实验的条件优化
被引量:
3
2
作者
于莉
吴璇
汪旻旻
黄升海
机构
安徽医科大学基础医学院微生物学教研室
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2016年第4期595-598,共4页
基金
国家自然科学基金(编号:81371797)
安徽高校省级自然科学研究重点项目(编号:KJ2012A152)
文摘
采用空斑形成实验方法测定呼吸道合胞病毒(RSV)的滴度,加入覆盖层倒置培养27、30、34、40h后经固定染色、剔除覆盖层后,可见清晰透明空斑,边缘清晰、形态均为圆形或类圆形,空斑直径分别为1、1.5、3、5mm左右。加入覆盖层后培养病毒的时间可以影响RSV最终所形成的空斑大小,并且随着时间的延长空斑逐渐增大,在30~34h所形成的空斑大小最佳,易于计数。病毒的稀释度也会影响空斑最终形成的数量,且随着稀释度的增加,空斑数量逐渐减少。
关键词
呼吸道合胞病毒
空斑形成实验
甲醛-结晶紫
Keywords
respiratory syncytial viruses
plaque forming assay
formaldehyde-crystal violet
分类号
R373.14 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
绿色荧光标记重组人偏肺病毒空斑形成滴度测定方法的建立
被引量:
2
3
作者
余春梅
陈昕
张金辉
王永
步志高
赵晓东
机构
重庆医科大学附属儿童医院儿研所P
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所人兽共患病实验室
重庆医科大学附属儿童医院肾脏免疫科
出处
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第8期771-774,共4页
基金
国家自然科学基金(30730098)
重庆市杰出青年基金(2008BA5040)
文摘
目的 建立用于绿色荧光标记的重组人偏肺病毒(GFP-rhMPV)空斑形成滴度测定方法.方法 基因组中插入绿色荧光蛋白基因的hMPV全序列cDNA质粒和主要蛋白质表达质粒转入细胞293T后获得感染性重组hMPV.GFP-rhMPV在Vero-E6细胞中连续传代提升病毒滴度并保存.将等倍稀释的重组病毒液接种常规制备的Vero-E6细胞单层,用含或不含胰酶的低熔点琼脂精凝胶覆盖细胞,孵育一定时间后,采用荧光显微镜下计数荧光空斑数和抗原抗体蓝斑形成法计算病毒滴度.结果 感染后3 d,荧光显微镜下GFP-rhMPV可在低熔点琼脂糖凝胶覆盖层下形成分界较为清晰的绿色荧光集落,接种后3 d荧光空斑相对独立,便于计数.蓝斑形成法在感染后第5天蓝斑较大,易观察.此前拯救获得的GFP-rhMPV在宿主细胞Vero-E6中的复制滴度可达1×10^6 PFU以上.结论 成功建立了GFP-rhMPV的空斑形成实验滴度定量检测方法,为hMPV的致病机制、防治手段研究奠定了基础.
关键词
人偏肺病毒
空斑形成实验
滴度测定
Keywords
Human metapneumovirus Plaque assay Titration
分类号
R5 [医药卫生—内科学]
原文传递
题名
表面蛋白烯醇化酶Enolase在S.suis 2感染中的角色
被引量:
2
4
作者
孙雯
潘秀珍
机构
扬州环境资源职业技术学院
南京军区军事医学研究所
出处
《井冈山大学学报(自然科学版)》
2010年第3期45-48,共4页
基金
国家自然科学基金项目(30670105
30600533)
国家"863"计划项目(2006AA0Z455)
文摘
目的通过克隆表达,在获得具有酶活性的猪链球菌2型(S.suis2)05ZYH33重组烯醇化酶Enolase蛋白的基础上,旨在继续探索其在细菌粘附和引发免疫下调作用中的角色。方法流式细胞术(FCM)、Hep2细胞粘附竞争试验、免疫空斑试验。结果流式细胞术FCM的细胞定位显示Enolase可以部分存在S.suis205ZYH33细菌的表面;Hep2细胞粘附竞争试验表明猪链球菌表面Enolase参与细菌对宿主细胞的黏附作用;免疫空斑实验的结果揭示Enolase在抑制宿主特异性免疫应答中发挥作用。结论 Enolase作为一个表面蛋白,确实在S.suis2感染中扮演一定的角色。
关键词
猪链球菌2型
烯醇化酶Enolase
流式细胞术
黏附
溶血
空斑形成实验
Keywords
Streptococcus suis serotype 2(S. suis 2)
enolase
flow cytometry(FCM)
adherence
hemolytic antibody plaques formation test
分类号
O557.9 [理学—热学与物质分子运动论]
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职称材料
题名
鼠衣原体毒力基因的筛选和基因差异型菌株的建立
被引量:
3
5
作者
周洲
吴移谋
谭钢
陈丽丽
李忠玉
钟光明
机构
南华大学医学院病原生物学研究所
南华大学附属第一医院眼科
Department of Microbiology and Immunology
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期1561-1568,共8页
基金
国家自然科学基金项目(No.81100648)
湖南省自然科学基金项目(No.13JJ4072)
+2 种基金
湖南省教育厅优秀青年基金项目(No.12B109
13B099)
分子靶标新药研究协同创新中心项目[No.湘教通(2014)405号]
文摘
【目的】探讨鼠衣原体(Chlamydia muridarum,Cm)标准株与减毒株全基因组序列中存在的差异,筛选毒力基因并建立不同基因型的单克隆菌株,为后续致病机制的研究奠定基础。【方法】将Cm标准株G0和减毒株G28以高通量测序法进行全基因组测序,通过全基因组序列比对分析并筛选潜在的毒力相关基因;经空斑形成实验(Plaque assay)在混合菌G0和G28中大量挑取空斑,以毒力靶基因的PCR测序鉴定从G0和G28中筛选含有不同毒力基因型的单克隆菌株。【结果】全基因测序结果显示Cm G0与G28的TC0412、TC0237和TC0668基因明显不同。通过挑取空斑初步筛选了111个空斑样品,通过3个毒力基因的PCR测序鉴定最终获得了G0和G28来源的56个单克隆菌株,并根据TC0412蛋白型分成B3、D1和E1三组,每组中含有TC0237和TC0668基因差异性菌株。【结论】Cm的致病能力可能与TC0412、TC0237和TC0668基因有关,筛选获得的单克隆菌株通过分组匹配后可用于后续的毒力基因功能研究。
关键词
鼠衣原体
毒力基因
筛选
空斑形成实验
Keywords
Chlamydia muridarum
Virulence gene
Selection
Plaque-forming assay
分类号
R374 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
噻唑蓝(MTT)法空斑形成实验在病毒检测中的应用
刘崇海
皮光环
王莉佳
赵晓东
蒋利萍
杨锡强
《川北医学院学报》
CAS
2010
4
下载PDF
职称材料
2
呼吸道合胞病毒空斑形成实验的条件优化
于莉
吴璇
汪旻旻
黄升海
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2016
3
下载PDF
职称材料
3
绿色荧光标记重组人偏肺病毒空斑形成滴度测定方法的建立
余春梅
陈昕
张金辉
王永
步志高
赵晓东
《中华微生物学和免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
原文传递
4
表面蛋白烯醇化酶Enolase在S.suis 2感染中的角色
孙雯
潘秀珍
《井冈山大学学报(自然科学版)》
2010
2
下载PDF
职称材料
5
鼠衣原体毒力基因的筛选和基因差异型菌株的建立
周洲
吴移谋
谭钢
陈丽丽
李忠玉
钟光明
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
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