芹菜夜蛾核型多角体病毒的空斑纯化及克隆株的生物测定

利用空斑技术从芹菜夜蛾核型多角体病毒分离筛选了一毒力较强的SfaMNPV D克隆株。SfaMNPV D克隆株感染 5B1细胞 ,72h胞外病毒达最大滴度 ,组织培养半感染剂量为 3 .89×1 0 8TCID50 /ml,多角体产量达 4.0× 1 0 7PIBs/ml;生物测定结果表明 ,SfaMNPV D克隆株感染 3龄棉铃虫幼虫的LC50 为 7.1 4× 1 0 5PIBs/ml,原毒株的LC50 为 4.81× 1 0 6PIBs/ml。SfaMNPV D病毒DNA经几种限制性内切酶消化 ,各片段积加测得基因组DNA分子量为 1 1 3 .78kb .

轮状病毒重组株的空斑纯化和基因组分析

通过对一株人轮状病毒FH4232株与猴轮状病毒SA11株的混合感染物的体外培养和空斑纯化,发现在子代克隆中有2株是FH4232和SA11株生成的重组子代。重组子代病毒株的第5、11条电泳带来自亲代FH4232株,其余多条则来自亲代SA11株。体外轮状病毒重组子代的发现对研究其基因重组和变异乃至进化均有重要意义,而且为人轮状病毒疫苗的制备和应用提供有效的参考途径。

轮状病毒培养纯化及重组子代分析

人轮状病毒Wa和Hu7株细胞培养条件中,胰蛋白酶处理和旋转培养,在病毒增殖和细胞病变生成过程中起关键作用。通过对一株人轮状病毒FH4232株与猴轮状病毒SA11株的混合感染株的体外培养和空斑纯化,发现子代克隆中有2株FH4232与SA11株生成的重组子代。重组子代病毒株的第5、11条泳带来自亲代FH42321株,其余多条则来自亲代SA11株。体外轮状病毒重组子代的发现对研究其基因重组变异有重要意义,而且为疫苗制备和应用提供有效途径。

家蚕核型多角体病毒广东株bro基因家族分析

对BmNPV广东株进行了空斑纯化,并对该基因组的bro基因家族进行克隆,获得4个bro基因序列(bro-a、bc、、d),与GenBank数据库中BmNPVbro基因序列及本实验室测定的重庆株的bro基因序列进行比较分析,结果表明广东株BmNPVbro基因存在插入及缺失,其氨基酸的改变主要发生在对应蛋白的N端部分;同时进行的bro基因的系统发生分析表明,广东株bro基因分别位于3个亚组中,广东株bro-d与日本T3、重庆CQ1株bro-d以及法国SC7株bro-Ⅲ属于亚组A,广东株bro-a、c与T3、CQ1株bro-a、c以及SC7株bro-Ⅱ属于亚组B,广东株bro-b与T3、CQ1株bro-b、e以及SC7株bro-Ⅰ属于亚组C,bro基因进化与地理位置的相关性不明显。根据bro基因在四个不同株系基因组中的位置特征,进一步支持了Kang等的观点:bro-d是BmNPV生存所必需的,bro-a和bro-c相互间功能互补。同时推测:SC7株的3个bro基因可能是BmNPVbro家族出现的最简约形式。

云南辛德毕斯病毒的生物学性状研究

本文对云南首次分离到的Sindbis病毒进行了滤过试验、耐酸耐醚试验、致细胞病变、动物敏感性试验、血凝特性、空斑和毒力等试验研究 ,结果符合披膜病毒科的病毒特性。交叉血抑试验和免疫荧光试验 ,以及空斑减少中和试验进一步证实为甲病毒属的Sindbis病毒。其空斑纯化株的生物学特性也与原株相符 ,纯化株的制备为该株病毒分子生物学研究的准确性和一致性提供了条件。云南Sindbis病毒的首次分离具有重要的流行病学意义 ,其生物学特性研究结果对我省该病的诊断和防治具有重要的指导意义。

重组昆虫杆状病毒构建和筛选技术进展

昆虫杆状病毒作为高效的真核表达载体 ,现已广泛应用于各种外源目的基因的表达。但由于重组病毒产生的比例很低(通常只有 0 1 %～ 1 % ) ,成为制约该系统应用的技术瓶颈。本文概括了近年来发展的重组病毒的构建和筛选方法 。

狂犬病病毒CTN-181减毒株在豚鼠颌下腺的繁殖动态及其低毒力克隆株的筛选研究

目的了解狂犬病病毒减毒株CTN-181在豚鼠颌下腺的繁殖动态并获得毒力更低的病毒纯化克隆株。方法将CTN-181经刚离乳豚鼠颈部皮下注射,分别于1、2、3和4d取颌下腺分离狂犬病病毒,测定各天次颌下腺内的病毒滴度。用滴度高的病毒液进行下一次豚鼠颌下腺传代,连续传3代。将第3代颌下腺传代的病毒液在BHK21细胞上进行空斑试验,挑选单个病毒克隆,以3周龄小鼠脑内接种测病毒毒力。筛选对小鼠不致病的克隆株进一步测定其对乳鼠的脑内毒力,并以乳鼠脑内传代和豚鼠颌下腺传代检测其遗传稳定性。结果 CTN-181在豚鼠颌下腺能短暂轻度繁殖,通过颌下腺传代后病毒毒力明显有回升。获得19个病毒克隆,不同克隆病毒的毒力不同,为0～3.16lg LD50;3株脑内无致病力的克隆株对乳鼠的毒力亦有减弱;乳鼠脑内和颌下腺回传后毒力无回升返祖,即传代后的病毒对小鼠均无致病力。结论CTN-181母株对3周龄小鼠仍存在低水平毒力,经豚鼠颌下腺传代后毒力十分不稳定。筛选到的3株克隆病毒较其母株的毒力更低,遗传稳定性更高,更适合作为狂犬病兽用口服疫苗候选株。