白细胞介素1β对破骨细胞空泡型质子泵活性与胞内酸化的影响

目的:通过体外实验研究白细胞介素1β(IL-1β)对破骨细胞空泡型质子泵与细胞内pH值的影响,以探讨IL-1β促进破骨细胞骨吸收的机制。方法:骨髓单核巨噬细胞经过诱导成为破骨细胞后,予以0.1、0.3和0.5μg/L的IL-1β干预48 h,检测破骨细胞空泡型质子泵mRNA和蛋白的表达以及IL-1β对破骨细胞胞内酸化的影响,观察空泡型质子泵活性的改变与破骨细胞骨吸收功能的变化。结果:研究结果提示破骨细胞经IL-1β干预48 h后,空泡型质子泵的表达与活性均显著增加,并且细胞内pH值下降。破骨细胞与含有IL-1β的细胞培养液共同孵育后,其骨吸收能力增强,培养液中IL-1β的浓度越高,该作用越趋明显。结论:IL-1β可能是通过上调空泡型质子泵的表达与酶的活性,促进氢离子的产生和(或)转运,引发破骨细胞骨吸收活动增加,最终导致骨质破坏,由此参与骨关节炎症性疾病的发生。

破骨细胞骨吸收中肿瘤坏死因子α可提高空泡型质子泵表达与活性

背景:空泡型的ATP酶(V-ATPase)在破骨细胞的骨吸收功能中起重要作用,肿瘤坏死因子α对破骨细胞中的V-ATPase表达与活性的影响尚不明确。目的:通过V-ATPase的表达与酶的活性变化,探讨肿瘤坏死因子α促进破骨细胞骨吸收功能的机制。方法:体外诱导培养破骨细胞,分别给予不同质量浓度的肿瘤坏死因子α干预(5,10,30μg/L)。采用荧光定量PCR及Western Blot检测肿瘤坏死因子α对破骨细胞V-ATPase表达的影响;根据吸光度值计算出V-ATPase的相对活性;倒置显微镜下观察骨吸收陷窝形成情况,采用Image J软件分析骨吸收面积。结果与结论:破骨细胞经过48 h的肿瘤坏死因子α干预以后,V-ATPase的表达与活性均有显著的增加,并且提高肿瘤坏死因子α的干预浓度均可增强此效应。破骨细胞经肿瘤坏死因子α干预后,培养板的骨吸收面积明显增加,这种作用随着肿瘤坏死因子α干预浓度的增加而增强。由此推测肿瘤坏死因子α作为一个重要的炎症递质参与病理性骨质吸收的过程,除促进破骨细胞形成以外,其可能的机制是肿瘤坏死因子α通过增加V-ATPase的表达,并提高V-ATPase活性,从而增强破骨细胞的骨质吸收活动。

破骨细胞空泡型质子泵及其抑制剂的研究进展

破骨细胞泌酸在骨质疏松症的骨吸收过程中发挥着重要作用,阻止破骨细胞空泡型质子泵(V ATPase)的功能可以抑制骨吸收,破骨细胞V ATPase已成为治疗骨质疏松症的新靶标。破骨细胞性V ATPase的结构分为胞质部分(水解ATP,为H+转移供能)和跨膜部分(转运H+),这两部分又由多种亚基组成。经过多年研究,人们对V ATPase及其亚基的作用机制已有一些了解。目前已知多种V ATPase抑制剂,它们的抑制作用和组织选择性各不相同。本文就此研究进展做一综述。

空泡型质子泵与转化生长因子-β1在胃癌中表达及意义

目的:探讨空泡型质子泵(V-ATPases)与转化生长因子-β1(TGF-β1)在胃癌组织中的表达,并探讨其临床意义。方法:运用免疫组化方法检测胃癌组织及癌旁组织中V-ATPases与TGF-β1的表达水平,并分析两者相关性及与胃癌临床病理参数之间的关系。结果:免疫组化结果显示,(1)V-ATPases表达胃癌组织45例中阳性34例(75.5%),癌旁组织阳性13例(28.8%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)TGF-β1表达胃癌组织阳性35例(77.8%),癌旁组织阳性15例(33.3%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)相关性分析结果:V-ATPases的表达与TGF-β1的表达呈正相关(P<0.05);V-ATPases与TGF-β1的表达与病理分级、淋巴结转移、TNM分期、脉管浸润呈正相关(P<0.05),与临床病理特征如性别、年龄、肿瘤大小无相关性。结论:在胃癌组织中高表达的V-ATPases与TGF-β1可能胃癌发生浸润转移的重要生物学标志,检测V-ATPases与TGF-β1对判断胃癌浸润转移具有重要意义。

质子泵抑制剂抑制糖酵解和谷氨酰胺代谢影响胃癌细胞增殖、凋亡机制的研究

背景:已有研究发现质子泵抑制剂(PPI)可抑制空泡型质子泵(V-ATPases)表达、影响胃癌细胞糖酵解水平。V-ATPases对肿瘤恶性生物学行为具有重要意义。目的:探讨PPI通过抑制糖酵解和谷氨酰胺代谢作用于胃癌的机制。方法:在细胞实验部分,对胃癌细胞株进行PPI加药处理并沉默相关分子,以CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,定量PCR和蛋白质印迹法分别检测mRNA和蛋白表达。在动物实验部分,将裸鼠分为空白对照组、0.9%NaCl溶液灌胃组、泮托拉唑钠溶液灌胃组、PKM2干扰组,观察小鼠体质量、摄食行为、肿瘤大小以及肿瘤组织内相关通路分子表达情况。结果:PPI可抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;PPI可抑制胃癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢相关分子表达;干扰PKM2或PI3K均可抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;沉默V-ATPases可抑制胃癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢相关分子表达。PPI灌胃治疗荷瘤小鼠可延缓肿瘤生长、缓解小鼠恶病质情况。结论:PPI可抑制V-ATPases和PI3K信号通路表达,进而影响胃癌细胞糖酵解和谷氨酰胺代谢水平,影响胃癌细胞增殖和凋亡水平,从而发挥抗肿瘤作用。

空泡型质子泵蛋白表达和胃癌临床病理特征及预后的相关性研究

研究表明，空泡型质子泵V．ATPase（VacuolarH’一ATPase）在肺癌、结肠癌、肝癌中表达升高”…。然而，在胃癌中V—ATPases的研究报道较少，V．ATPase的表达对胃癌预后的影响仍然不清楚。本研究运用免疫组织化学法检测100例胃癌组织及正常组织中V—ATPase蛋白表达水平，并运用单因素和多因素分析其表达与胃癌临床病理特征及预后的关系。

唑来膦酸对成骨细胞单核巨噬细胞共培养体系中Atp6v0d2基因表达及破骨细胞生成的抑制作用

目的:研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞(OC)生成的影响,探讨Atp6v0d2基因在其中发挥的作用。方法:应用小鼠颅骨成骨细胞(OB)与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7建立共培养体系。细胞分为对照组和ZOL处理组(ZOL处理24 h)。在不同时间点收获细胞,检测Atp6v0d2基因表达、OC生成和骨吸收情况。结果:ZOL组TRAP染色阳性多核OC和骨吸收陷窝显著少于对照组(P<0.01);Atp6v0d2基因表达在ZOL组显著下降(P<0.01)。结论:ZOL可显著抑制OB与RAW264.7共培养体系中OC生成和骨吸收功能,下调Atp6v0d2基因表达。

PPIs抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路逆转胃癌细胞的化疗多药耐药

背景:前期实验显示质子泵抑制剂(PPIs)可抑制空泡型质子泵(V-H+-ATPases)和多药耐药蛋白P-gp、MRP1表达,增强胃癌细胞的化疗敏感性。目的:探讨PPIs抑制空泡型质子泵逆转胃癌细胞化疗多药耐药与PI3K/Akt/mTOR信号通路的关系。方法:应用不同浓度埃索美拉唑或泮托拉唑预处理人胃腺癌细胞敏感株SGC7901和多药耐药株SGC7901/MDR,或以V-H+-ATPases siRNA干扰SGC7901/MDR细胞内的V-H+-ATPases表达,或以雷帕霉素阻断mTOR表达,以蛋白质印迹法检测经不同方式处理的细胞内V-H+-ATPases、P-gp、MRP1蛋白表达以及PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路及其信号旁路TSC1/2-Rheb中的相关蛋白表达;以免疫荧光法检测经埃索美拉唑预处理的SGC7901/MDR细胞内的V-H+-ATPases、P-gp蛋白表达和定位。结果:PPIs可呈浓度依赖性地抑制SGC7901/MDR细胞内的V-H+-ATPases、PI3K、Akt、mTOR、HIF-1α、TSC1、TSC2、Rheb、P-gp、MRP1表达以及Akt底物和TSC2磷酸化,改变V-H+-ATPases、P-gp的胞内定位,对SGC7901细胞则无上述影响。以V-H+-ATPases siRNA抑制SGC7901/MDR细胞内的V-H+-ATPases表达,作用与PPIs预处理相似。以雷帕霉素阻断mTOR可呈浓度依赖性地抑制SGC7901/MDR细胞内的HIF-1α、P-gp表达。结论:PPIs抑制空泡型质子泵逆转胃癌细胞化疗多药耐药的机制与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

质子泵抑制剂提高人胃腺癌细胞化学治疗敏感性研究

目的探讨质子泵抑制剂（PPI）泮托拉唑（PPZ）是否通过抑制空泡型质子泵来逆转细胞内外pH梯度，从而增加肿瘤细胞化学治疗敏感性，并探讨PPZ最佳预处理时间、剂量及机制。方法免疫印迹及免疫荧光法比较PPZ处理前、后人胃低分化腺癌细胞株SGC7901空泡型质子泵的表达及胞内分布变化。用BCECF-AM荧光探针检测不同浓度PPZ作用不同时间对细胞内pH值的影响。用四甲基偶氮唑盐比色法和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶试剂盒检测化学治疗药物联合PPZ的细胞毒性和细胞凋亡变化。用阿霉素检测PPZ对细胞内药物蓄积和潴留量的影响。结果10和100μg／m[PPZ作用24h后，空泡型质子泵表达的相对吸光度值（1．19±0．03和0．70±0．03）明显低于空白对照组（1．53±0．05），而1μg／ml PPZ可促进其表达（2．29±0．06）。在10μg／mlPPZ作用第6和12小时，可见其对空泡型质子泵表达的抑制作用（相对吸光度值分别为0．32±0．02和0．13±0．02），在作用24h后可改变空泡型质子泵的细胞内分布。10和100μg／ml PPZ作用24h可使细胞内pH值（7．44±0．09和7．31±0．06）明显低于空白对照组（7．51±0．05），10μg／ml及以上浓度的PPZ可逆转细胞内外pH梯度。PPZ预处理24h后予化学药物治疗的细胞存活率（58．71％±1．18％）低于单用化学治疗药物（74．33％±1．77％，P〈0．05），其总凋亡率（80．81％±1．16％）和早期凋亡率（77．52％±1．13％）显著高于单用化学治疗药物（26．42％±1．19％和23．18％±0．92％，P值均〈0．01）。20、50和100μg／ml PPZ作用24h后的阿霉素释放指数（0．164±0．013、0．162±0．015、0．152±0．012）低于空白对照组（0．277±0．011，P值均〈0．01）。结论PPZ预处理可提高人胃腺癌细胞的化学治疗敏感性。

咪唑诱导的人子宫内膜癌细胞HEC-1B空泡化现象研究

咪唑作为一种弱碱性物质,处理动物子宫内膜细胞后,可诱导其产生空泡化现象,进而影响其生殖生理功能。本研究使用人子宫内膜癌细胞HEC-1B作为模型,使用咪唑处理导致细胞空泡化后探讨空泡化产生的生理机制。通过基因芯片分析、荧光定量PCR检测、激光共聚焦显微镜观察等方法进行研究。结果表明:咪唑处理人子宫内膜癌细胞HEC-1B后,空泡型质子泵(V-ATPase)亚基V0D2基因表达量上调。使用荧光定量PCR验证芯片结果,V-ATPase亚基V0D2 mRNA表达量有所上调。对V-ATPase另外一个亚基V1E1基因进行荧光定量PCR,其mRNA表达量也有所上调。使用V-ATPase抑制剂巴弗洛霉素A1和咪唑共同处理人子宫内膜癌细胞HEC-1B后,通过吖啶橙染色,激光共聚焦显微镜观察,咪唑诱导的空泡被显著抑制。上述结果证明了V-ATPase在咪唑诱导的细胞空泡化中的重要作用。