幽门螺杆菌空泡形成细胞毒素A亚单位的克隆表达和P37抗体的制备

背景:空泡形成细胞毒素A(VacA)是幽门螺杆菌(H.pylori)的重要致病因子,研究VacA的致病机制有助于进一步明确H.pylori的致病机制。目的:原核表达H.pyloriVacA亚单位P37和P58,制备P37多克隆抗体并分析其活性。方法:以聚合酶链反应(PCR)扩增H.pylorivacA基因的p37和p58片段,克隆入原核表达载体pQE31,构建重组质粒pQE31-p37和pQE31-p58,转化大肠杆菌(E.coli)M15,诱导蛋白表达。以镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化融合蛋白,以纯化P37蛋白免疫家兔,获取抗P37血清,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体效价。以蛋白质印迹法(Westernblot)分析P37抗体与VacA的结合能力,观察P37抗体对VacA致胃癌细胞空泡化的抑制作用。结果:十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,E.coliM15经诱导后表达相对分子质量分别为37kDa(1Da=0.9921u)和58kDa的P37和P58融合蛋白,经纯化后为单一蛋白。纯化P37蛋白免疫家兔后获得的抗P37血清抗体效价为1×106。P37抗体能中和VacA阳性H.pylori分泌的VacA,抑制VacA对胃癌细胞的空泡化作用。结论:本实验成功构建了原核表达载体pQE31-p37和pQE31-p58,获得了高纯度单一蛋白和高效价P37抗体,该抗体具有中和VacA毒性的作用。

幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因及其表达产物与胃十二指肠疾病的关系

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)感染是慢性胃炎(chronic gastritis，CG)和消化性溃疡(peptic ulcer，PU)的病因之一。也是胃癌(gastric cancer，GC)的危险因素。Hp的空泡形成毒素基因(vacuolating toxin gene，vacA)型和细胞毒素相关基因(cytotoxin-associated gene，cagA)

幽门螺杆菌cagA基因和血清CagA抗体与VacA表达关系的研究

目的：探讨幽门螺杆菌cagA基因和血清CagA抗体与VacA表达的关系。方法：用聚合酶镇反应法（PCR）测定由62例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者胃窦粘膜分离获得Hp菌株；用酶免疫技术测定患者血清HpCagA抗体；用Hela细胞培养法测定Hp菌株VacA活性。结果：cagA基因阳性和阴性Hp菌株表达VacA阳性率分别为40．00％和33．33％（P＞0.05）；血清CagA抗体阳性和阴性患者感染Hp菌株体外产生VacA阳性率分别为33．33％和42．11％（P＞0.05）。结论：HpcagA基因和血清CagA抗体与VacA表达之间无相互依赖关系，vacA基因是一个独立的标志物。