氢溴酸槟榔碱对幽门螺杆菌生长和空泡毒素A表达和活性的影响

目的评价氢溴酸槟榔碱对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)的抑制作用及其对H.pylori空泡毒素A表达水平和活性的影响。方法使用平皿稀释固体法和脑心浸液液体法测定中药活性成分氢溴酸槟榔碱对H.pylori的最低抑菌浓度(MIC),以反映药物对H.pylori的抑制作用。通过中性红摄入法评价药物干预后H.pylori培养上清中空泡毒素A对胃癌细胞BGC-823的毒性作用,并通过RT-PCR方法和Western blot方法检测经药物处理后H.pylori菌体及分泌上清中空泡毒素A mRNA和蛋白的表达水平,以反映药物对H.pylori空泡毒素A活性和表达的影响。结果高浓度氢溴酸槟榔碱对H.pylori具有抑制作用,MIC为:固体法和液体法均为1.25 g·L-1。低浓度氢溴酸槟榔碱可不同程度抑制H.pylori空泡毒素A的活性(P<0.01);抑制H.pylori菌体和分泌上清中空泡毒素A mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达。结论氢溴酸槟榔碱在较高浓度(1.25 g·L-1)时具有抑制H.pylori生长作用,而在较低浓度(0.15 g·L-1)时,即可抑制H.pylori空泡毒素A的表达和活性。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A及细胞空泡毒素A与胃及十二指肠疾病的关系

自1983年Warren和Mashall发现幽门螺杆菌(HP)以来,普遍认为HP与慢性胃炎及消化性溃疡密切相关,近来更认为HP是致胃癌的强危险因子。在人群中约有一半的人受到HP感染,不少人发展为慢性胃炎。然消化性溃疡及胃癌的发生毕竟为少数,这除了与人类的个体差异等因素有关外,还与HP感染的类型有关,即某些菌株可产生细胞毒素。在HP诸多的致病因素中,细胞毒素相关蛋白A(CagA)及细胞空泡毒素A(VacA)备受关注。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A、细胞毒素相关蛋白E、细胞空泡毒素A基因型与上消化道疾病的关系

目的分析幽门螺杆菌(Hp)的细胞毒素相关蛋白A(cagA)、细胞毒素相关蛋白E(cagE)、细胞空泡毒素A(vacA)基因型与上消化道疾病的关系。方法选取112例上消化道疾病患者,对其胃黏膜组织中Hp菌株的cagA、cagE、vacA基因型进行检测和分析。结果所有患者胃黏膜样本中的Hp菌株均为cagA基因和cagE基因阳性表达,阳性率均为100%。患者的vacAs1/m^2表型的阳性率最高,分别为54.1%和60.5%,其次为vacAs1/mlb表型和vacAs1/m^-表型,阳性率分别为13.2%~21.1%。消化性溃疡患者和慢性胃炎患者的Hp基因各表型的阳性率的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论上消化道疾病患者胃黏膜组织中的Hp菌株呈现cagA、cagE、vacAs1/m^2等基因亚型的优势表达,说明这些毒力因子表型在Hp引发和促进上消化道疾病的过程中具有重要的作用,但与上消化道疾病类型缺乏相关性。

幽门螺杆菌及其毒力因子空泡细胞毒素A对人胃腺癌细胞DNA同源重组修复和细胞周期的影响

目的研究幽门螺杆菌(Hp)标准株Hp P12和其毒力因子空泡细胞毒素A(VacA)对人胃腺癌细胞DNA损伤、同源重组修复和细胞周期的影响。方法取对数生长期的人胃腺癌AGS细胞,应用Hp标准株(Hp P12)和其VacA基因敲除株(Hp P12ΔVacA)以感染复数(multiplicity of infection,MOI)100分别感染AGS细胞,使用Western Blot方法检测DNA损伤标记蛋白γH2AX、HR修复关键蛋白(Rad51、CtIP、pCtIP)、细胞周期检测点激酶2(pCHK2)的表达水平,进一步用流式细胞术检测细胞周期,验证Hp P12及其毒力因子VacA对HR修复和细胞周期的影响。结果DNA损伤标记蛋白γH2AX的表达,在Hp P12感染组较未感染组上调(6 h:t=4.870,P=0.001;12 h:t=4.118,P=0.003),在Hp P12ΔVacA感染组较Hp P12感染组下调(6 h:t=4.669,P=0.002;12 h:t=3.117,P=0.013)。Rad51、CtIP、pCtIP和pCHK2的表达在Hp P12感染12 h组较未感染组下调(Rad51:t=22.740,P<0.001;CtIP:t=31.970,P<0.001;pCtIP:t=3.777,P=0.020;pCHK2:t=10.740,P<0.001),而Rad51、pCHK2的表达在Hp P12ΔVacA感染12 h组均较Hp P12感染12 h组上调(Rad51:t=5.637,P=0.005;pCHK2:t=3.726,P=0.006)CtIP的表达在Hp P12ΔVacA感染6 h组较Hp P12感染6 h组上调(t=4.580,P=0.002)。进一步采用流式细胞术检测细胞周期发现Hp P12感染组G 1期细胞数较未感染组下调(t=11.530,P<0.001),S期细胞数上调(t=8.583,P=0.001)。而Hp P12ΔVacA感染组G 1期细胞数较Hp P12感染组上调(t=5.781,P=0.004),S期细胞数下调(t=5.481,P=0.005)。结论Hp P12标准株感染人胃腺癌细胞后引起DNA损伤,抑制了细胞HR修复,并引起细胞周期阻滞,其中VacA毒力因子起到了重要作用。

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白、空泡毒素基因与儿童胃十二指肠疾病的关系

目的 探讨幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白 (cagA)、空泡毒素 (vacA)与儿童胃十二指肠疾病类型及胃黏膜炎症程度的关系。方法 采用免疫印迹法测定 88例Hp相关性慢性胃炎 (CG)、4 6例Hp相关性消化性溃疡 (PU)患儿血清cagA、vacA抗体 ,并观察胃黏膜病理变化。 结果 1.CagA、vacA抗体总检出率分别为 85 .0 7%、91.0 4 % ,cagA抗体在CG与PU中检出率分别为 84 .0 9%与 86 .96 % ,两组相比无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;vacA抗体在CG与PU中检出率分别为 89.77%与 93.4 8% ,两组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 2 .134例Hp感染患儿cagA、vacA抗体均阳性 (Ⅰ型菌 ) 113例 ,cagA、vacA抗体均阴性 (Ⅱ型菌 ) 11例 ,cagA、vacA抗体仅一项阳性 (中间型 ) 10例 ,各型菌株在CG、PU中的检出率无明显差异 (P均 >0 .0 5 )。 3.113例Hp Ⅰ型菌株感染引起胃黏膜中重度炎症占 88.5 0 % ,而Ⅱ型菌株、中间型菌株感染引起胃黏膜中重度炎症分别为 4 5 .4 5 %及 5 0 .0 0 % ,两组有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 CagA、vacA与CG、PU发病均有关 ,不能作为区分Hp感染致不同胃十二指肠疾病的特异性指标。本地区儿童感染的Hp主要为cagA和vacA阳性的Ⅰ型菌株 。

和厚朴酚对幽门螺杆菌生长和空泡毒素A表达及活性的影响

【目的】幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是胃炎和消化性溃疡的病原体,但其具有潜在的正常菌群的特性。本研究通过评价临床常用中药厚朴的活性成分和厚朴酚对H.pylori的抑制作用及对其空泡毒素A表达和活性的影响,以反映其对H.pylori具有的潜在去除毒性的作用。【方法】使用平皿稀释固体法和脑心浸液液体法测定和厚朴酚对H.pylori的最低抑菌浓度,进一步通过中性红摄入法评价经无抑菌效果的低浓度和厚朴酚干预后,H.pylori培养上清中空泡毒素A(Vacuolating cytotoxin A,VacA)的毒性作用;并通过RT-PCR和Western blot方法检测经低浓度和厚朴酚处理后,H.pylori菌体及分泌上清中VacA mRNA和蛋白的表达水平。【结果】发现高浓度(0.75 g/L)和厚朴酚对H.pylori具有抑制作用;而在远低于最低抑菌浓度时,和厚朴酚可有效抑制H.pylori VacA的形成和分泌。【结论】和厚朴酚具有下调H.pylori毒性的潜在作用,这为基于"致病性H.pylori的非致病性转变"这一机理的干预性治疗提供了有希望的研究前景。

幽门螺杆菌细胞空泡毒素基因毒性片段的克隆与表达

目的 :通过基因于程技术获得具有良好抗原性的重组细胞空泡毒素毒性亚单位蛋白。方法 :利用PCR从幽门螺杆菌 (Hp)空泡毒素基因中扩增毒性片段V ,克隆及序列分析后在大肠杆菌中高效表达 ,用免疫印迹法 (Westernblotting)检测其抗原性。结果 :序列分析所得片段完整 ,与标准株AF36 170 0比较有 1.5 %的bp及一个氨基酸发生变异。与文献报道的中国菌株相比有高度的同源性。SDS -PAGE显示表达产物相对分子量为 2 70 0 0 ,表达量为 30 %以上 ,Westernblotting显示该蛋白可被HP全菌抗血清所识别。结论 :基因重组Hp细胞空泡毒素毒性蛋白具有良好的抗原性 ,可用于制备Hp感染的诊断试剂与疫苗。

黄芪含药血清对幽门螺杆菌空泡毒素活性的影响

目的:观察黄芪含药血清能否有效抑制体外幽门螺杆菌(hel i cobact er pyl ori,Hp)空泡毒素(VacA)的活性,从而探讨其抗菌机制。方法:将HP菌株培养上清液制成粗制VacA蛋白,经倍比稀释后(1∶32～1∶1),选择1∶2滴度与不同浓度黄芪含药血清共同作用于胃癌SGC-7901细胞,观察胃癌细胞形态变化,采用中性红摄入法(NRU)评价空泡活性。结果:黄芪含药血清对VacA活性有显著抑制作用,含药血清小剂量组NRU检测其空泡活性A550=0.228±0.029,显微镜下计数空泡形成率为78.75%±8.539%,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05),随血清含药浓度的增加A550和空泡形成率逐渐降低;含药血清大剂量组A550=0.127±0.047,空泡形成率为32.25%±10.21%,与阴性对照组比较差异有极显著性(P<0.01),与阳性对照奥美拉唑组比较差异无显著性(P>0.05);含药血清大剂量组与中剂量组A550比较,差异无显著性(P>0.05),与小剂量组比较差异有显著性(P<0.05),可见黄芪含药血清对空泡毒素的抑制作用具有浓度依赖性。结论:黄芪对HP VacA活性具有明显的抑制作用,且该抑制作用具有一定的浓度依赖性。

硒对幽门螺杆菌空泡毒素及其重组影响

目的研究硒(Se)对幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素(VacA)及重组VacA的影响。方法采用盐析、透析、柱层析、浓缩、抽滤等方法提纯幽门螺杆菌分泌的空泡毒素。通过琼脂糖凝胶电泳、基因序列分析鉴定重组载体,重组VacA产物经Ni-TEDTM蛋白纯化系统纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、及免疫印迹(Western blot)鉴定,间接酶联免疫吸附(ELISA)法检测其抗原特异性。进行细胞培养、细胞爬片;采用分光光度计、倒置显微镜、透射电镜及流式细胞仪等方法检测硒对幽门螺杆菌分泌的VacA及重组毒素蛋白功能的影响。结果12 mmol/L硒即可使幽门螺杆菌形态发生球形变,鞭毛及菌毛出现脱落,溶血作用减弱,硒对VacA空泡毒作用无直接影响(P>0.05);硒通过抑制Hp生长减少VacA产生量从而使空泡毒作用减弱;通过抑制表达VacA的大肠埃希菌生长,减少重组VacA表达量;能增强重组VacA对人胃上皮癌细胞株(SGC-7901)生长抑制作用,使细胞分裂指数、集落形成率、S期细胞数量降低,G1期细胞总数增加;使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素,并随硒浓度增加颜色加深。结论硒能抑制Hp生长,改变Hp的形态及结构;可使重组VacA表达量减少;能增强重组VacA对SGC-7901细胞的生长抑制及诱导细胞凋亡作用;可使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素;不能直接抑制VacA的空泡毒作用。

奥美拉唑对胃癌上皮细胞株、幽门螺杆菌及空泡毒素作用的体外试验

目的 :通过奥美拉唑对胃癌上皮细胞、幽门螺杆菌 (Hp)菌株生长及空泡毒素 (VacA)毒性的影响 ,探讨其临床应用价值。方法 :应用不同浓度奥美拉唑和细胞、细菌及VacA共孵育方法观察细胞、细菌的生长状况及空泡毒性的变化。结果 :(1)当奥美拉唑浓度 >10 0mg·L- 1时 ,细胞 10 0 %死亡 ;低于4 0mg·L- 1时 ,光镜下未见上皮细胞的形态学改变。(2 )当奥美拉唑≥ 10 0mg·L- 1时 ,细菌生长完全被抑制 ;低于 30mg·L- 1,细菌的生长不受影响。 (3)低浓度奥美拉唑 (10～ 4 0mg·L- 1)能部分抑制Va cA毒素对SGC 790 1的空泡作用 ,但不抑制毒素对HeLa细胞的空泡毒性作用。结论 :抑制Hp生长所需的奥美拉唑浓度对胃上皮细胞也有损伤作用 ,对空泡毒素无显著的抑制作用 ,临床上只能应用低剂量奥美拉唑 ,通过抑制胃酸分泌治疗酸相关疾病 。

幽门螺杆菌空泡毒素活性的体外观察

目的研究幽门螺杆菌(Hp)液体浓缩上清液对胃上皮细胞的空泡毒性作用,为进一步开展空泡变性细胞毒素(VacA)的纯化及探讨VacA的致病机制奠定基础。方法将Hp菌株液体培养上清液制成粗制VacA蛋白,粗制VacA经倍比稀释(1∶160～1∶2)后与胃癌SGC7901细胞共同孵育后观察胃癌细胞形态变化,同时观察1∶2及1∶5滴度组于0、2、4、8、16和24h时的空泡活性。采用中性红摄入法(NRU)评价空泡活性。结果1∶2及1∶5滴度组胃癌细胞于24h时空泡形成细胞达100%,空泡细胞比例随毒素滴度递减。孵育24h时粗制VacA产生空泡活性的最小剂量约为6μg,超过120μg可导致细胞死亡。当毒素滴度为1∶2时,孵育4h即产生明显空泡[550nm光吸收值(A550)=0.43±0.06],至16h达最高吸收值(A550=0.71±0.03),至24h时因细胞大量死亡,A550反而下降至0.06±0.04,与空白对照组的差异无显著性(P>0.05)。1∶5毒素滴度的时间曲线较1∶2滴度更恰当反映出空泡活性随孵育时间变化的特性。结论Hp液体培养上清浓缩液对胃癌细胞具有明显的空泡毒性作用,VacA导致的空泡毒性具有明显的浓度及时间依赖性,且易受多种因素的影响,适当的浓度及孵育时间是VacA致病机制研究过程中的关键因素。

幽门螺杆菌空泡毒素对人牙周膜成纤维细胞的增殖和凋亡的影响

目的:观察幽门螺杆菌空泡毒素(HP Vac A)对人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)增殖和凋亡的影响。方法:人牙周膜成纤维细胞株(h PDLFs100),分别与不同浓度的HP Vac A(0.1、0.2、0.3 mg/m L)共培养,CCK-8方法检测细胞的增殖情况;倒置显微镜观察细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果:随着HP Vac A浓度的增大和培养时间的延长,h PDLFs的增殖明显受到抑制;贴壁的PDLFs数量递减,细胞由长梭形逐渐变为圆形,折光性不断减弱,悬浮细胞和凋亡细胞增多;胞浆内大量空泡形成,细胞染色体聚集于核膜,呈块状、浓集和边缘化,表现出典型的凋亡特征。结论:HP Vac A对PDLFs有明显的细胞毒作用,能抑制细胞增殖,并引起细胞凋亡。

幽门螺杆菌空泡细胞毒素与细胞毒素相关蛋白

研究证明幽门螺杆菌(Hp)是人类慢性B型胃炎的主要致病因素,与消化性溃疡密切相关,近年的研究提示Hp与胃癌的发生也有密切关系。关于Hp的致病机理还不是很清楚,现有的资料表明Hp分泌的毒素与其致病性有较密切的关系。本文就这一方面的研究作一简要综述。 1988年。

幽门螺杆菌空泡毒素及其单克隆抗体的研究进展

人幽门螺杆菌（H.pylori）是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因，并与胃癌的发生密切相关。幽门螺杆菌的致病机理与其致病性和宿主免疫应答有关，尤以幽门螺杆菌的毒性占主导地位。最新研究表明，约60%的幽门螺杆菌分离株具有分泌空泡毒素（VacA）的能力，并且血清中其相应抗体的出现与消化性溃疡的发生高度平行。综述了VacA的制备和纯化，理化特性，蛋白质结构，编码基因，致病机理及其单克隆抗体等方面的研究进展。

幽门螺杆菌空泡毒素活性检测方法的比较

目的 分别采用细胞计数法及中性红摄入法 (NRU)检测幽门螺杆菌 (Hp)空泡毒素活性 ,探讨NRU检测空泡毒素活性的应用价值。方法 采用Hp液体培养上清浓缩液作为粗制VacA毒素 ,经倍比稀释(1∶16 0～ 1∶2 )后与胃癌SGC 790 1细胞共同孵育 2 4h。用细胞计数法及NRU同时评价VacA的空泡毒素活性 ,比较两种方法检测VacA空泡毒素活性的差异。结果 经中性红染色后 ,胃癌细胞吸收大量染料 ,空泡更加明显。NRU对空泡毒素活性的判断结果与细胞计数法基本符合 ,细胞计数法显示 1∶2 0～ 1∶2滴度样本均呈阳性结果 ,NRU于 1∶2 0～ 1∶5滴度亦得到阳性结果 ,1∶2滴度组因细胞大量死亡得到“假阴性”结果 (A550 =0 .0 6±0 .0 4 )。 1∶4 0滴度组细胞计数法判断为阴性 ,但NRU检测阳性 (A550 =0 .12± 0 .0 4 ,P <0 .0 5 )。结论 NRU检测空泡毒素活性具有简便、快速的特点 ,有助于对空泡毒素活性的定量评价 ,敏感性高于细胞计数法 。

幽门螺杆菌空泡毒素相关蛋白基因、空泡毒素基因与上消化道疾病的关系

采用 PCR法对 77例胃、十二指肠疾病患者胃粘膜 Hp cag A基因和 vac A基因的扩增以探讨cag A基因和 vac A基因型 Hp与上消化道疾病的关系 .77例 Hp感染患者中 ,60例检测出 cag A基因 ,阳性率为 77.9% ,消化性溃疡和慢性胃炎的阳性率分别为 87.8% (43/49)和 60 .7% (1 7/2 8) ,其差别有显著意义 (p<0 .0 1 ) .vac A的 2种亚型 vac A1 和 vac A2 各占 79.2 % (61 /77)和 2 0 .8% (1 6/77) .每种胃粘膜只能扩增出 vac A1 或 vac A2 的一种产物 ,其中 vac A1 在消化性溃疡和慢性胃炎中的检出率为 87.8% (43/49)和 64.3% (1 8/2 8) ,两者差别有显著性 (p<0 .0 2 ) .这些结果提示 cag A基因和 vac A1 基因型 Hp与消化性溃疡关系密切 ,这对

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A、空泡毒素基因A抗体与胃十二指肠疾病的关系

目的研究不同幽门螺杆菌(Hp)菌株感染与胃十二指肠疾病发生的关系。方法采用蛋白芯片技术测定血清中Hp细胞毒素相关基因A(CagA)、空泡毒素基因A(VacA)抗体。结果消化性溃疡组和胃癌组CagA和VacA抗体阳性者显著高于慢性胃炎组(P<0.01),而CagA和VacA抗体阴性在慢性胃炎组显著高于溃疡组和胃癌组(P<0.01),溃疡组和胃癌组之间CagA和VacA抗体阳性和阴性率比较,差异无显著性(P>0.05)。结论含CagA基因和VacA基因的I型Hp可能是致病力强的高毒力株。

幽门螺杆菌细胞空泡毒素s1m2型研究进展

幽门螺杆菌（Hp）感染呈全球性分布,在发达国家人群中感染率为30%~40%,在发展中国家可高达60%-70%。Hp感染者发生非萎缩性胃炎较为普遍,仅有少数感染者会出现严重的临床结局,如消化性溃疡、萎缩性胃炎和胃癌等,这种状况与环境因素、宿主特性及Hp毒力因子密切相关。Hp不同分离株间存在巨大的遗传变异,这些遗传学的差别影响着Hp毒力因子的功能和抗原性,