空肠弯曲杆菌快速检测方法研究进展

空肠弯曲杆菌是一种常见的人畜共患病原菌,快速精准检测是有效控制其传播和感染的关键。本文主要介绍了近年来发表的快速检测空肠弯曲杆菌的相关方法,包括免疫学方法(酶联免疫吸附试验、免疫层析技术)、核酸检测方法(聚合酶链式反应及其衍生技术、多种等温扩增技术等),以及其他新型检测方法(表面等离子共振技术、生物传感器、CRISPR-Cas12b检测系统)。此外,本文还讨论了这些方法的优缺点以及在实际应用中的考虑因素,以期为行业研究者提供相对全面的空肠弯曲杆菌检测方法参考和科学依据。

空肠弯曲杆菌血流感染报道1例

本文报道了空肠弯曲杆菌血流感染1例,并研究了其生物学特性与可能存在的耐药基因,为临床有效治疗相关疾病提供科学的实验室依据。采用常规方法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析、测序分析和聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)等技术,对从1位老年女性血液中分离出的1株致病菌进行菌种鉴定、药物敏感试验、耐药基因检测等。结果显示,此分离菌株为空肠弯曲杆菌,其对环丙沙星、四环素耐药,对红霉素敏感。采用PCR检测出空肠弯曲杆菌的3种耐药基因gyrA、gyrB、tex(O),可能与其药敏试验结果相关。

空肠弯曲杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)是一种人兽共患病病原菌,给养殖业带来了较大经济损失。为实现对空肠弯曲杆菌的快速检测,针对其MapA基因序列设计特异性引物,优化反应条件和反应体系,建立了空肠弯曲杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估。结果显示:建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性,仅能特异性扩增出空肠弯曲杆菌,对胎儿空肠杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌无交叉反应;敏感性较强,最低检测限为6.42 copies/μL;以5个稀释度的重组质粒为模板分别进行组内和组间重复性试验,发现组内和组间Ct值变异系数(CV)均小于2.50%,说明该方法具有良好的可重复性。结果表明,本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR具有良好的特异性、敏感性及重复性,可用于空肠弯曲杆菌的快速诊断和流行病学调查。

鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌的污染分析及PFGE分型研究

目的了解鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌的分布和传播情况。方法参考GB/T4789.9-2008、SN0175-2010、ISO10272-1:2006、FDA/BAM:2001、USDA/FSIS:1998等方法组合出分离鸡源疑似空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)的方法,采用16SrDNA和hipO基因的二重PCR方法对其准确鉴定;采用SmaⅠ对83株空肠弯曲杆菌进行PFGE分型。结果从鸡肉生产链中采集样品519份,分离鉴定出空肠弯曲杆菌180株,分离率为34.87%。其中养鸡场和屠宰场鸡粪样空肠弯曲杆菌分离率分别为74.29%和66.38%,屠宰场和市场的鸡肉样中空肠弯曲杆菌的分离率分别为17.33%和13.66%。83株空肠弯曲杆菌通过PFGE分型结果产生了45种不同的谱型。结论四川省部分地区鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌的污染较严重,空肠弯曲杆菌在鸡肉生产链中可能存在水平传播现象。

鸡肉生产链空肠弯曲杆菌的耐药性研究

目的了解鸡肉生产链(养殖场-屠宰场-市场)中空肠弯曲杆菌分离株的耐药情况。方法针对成都市及雅安市养鸡场、屠宰场和市场中分离的180株空肠弯曲杆菌,采用微量肉汤稀释法,检测鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌对8种抗菌药物的耐药情况;采用错配扩增突变分析PCR(MAMA PCR)技术,检测137株耐环丙沙星的空肠弯曲杆菌的gyrA基因第257位突变情况,对gyrA基因突变进行分析。结果药敏试验表明,空肠弯曲杆菌分离株对环丙沙星、左氟沙星、四环素和克林霉素的耐药率较高,分别为94.44%、93.89%、91.67%和78.33%;对红霉素(20.00%)、链霉素(20.56%)、庆大霉素(17.78%)、氟苯尼考(12.22%)呈现不同的耐药率。从养殖场到市场,鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌对上述8种抗菌药物的耐药率呈持平或上升趋势。MAMA PCR结果表明,95.62%(131/137)的环丙沙星耐药空肠弯曲杆菌在gyrA基因第257位发生点突变,10株环丙沙星敏感菌株均没有检测出gyrA基因的突变;gyrA基因耐药决定区的测序结果表明,环丙沙星耐药菌株MJF31和MJF53都在第257位碱基发生了ACA→ATA(苏氨酸到异亮氨酸)的突变,而对环丙沙星敏感的菌株JF9和JF136均未发生该类突变。结论鸡肉生产链中空肠弯曲杆菌耐药性比较普遍,对喹诺酮类药物耐药率较高,多重耐药菌株较突出,应加强对养殖场和食品源空肠弯曲杆菌耐药性的监测。

江苏省禽源空肠弯曲杆菌的分离鉴定及耐药性研究

目的了解江苏省禽源空肠弯曲杆菌的流行情况及耐药特征。方法从江苏徐州、淮安和扬州等7市采集禽肉产品和泄殖腔棉拭子样品共753份,分离细菌,PCR方法鉴定空肠弯曲杆菌后,根据WHO推荐的K-B法测定9大类27种抗生素的敏感性。结果 753份样品共分离出空肠弯曲杆菌207株,分离率为27.5%。药敏结果显示,所有菌株除了对美罗培南、庆大霉素、卡那霉素、氟苯尼考和磷霉素保持高度敏感性,对其它抗生素产生不同程度耐药,对磺胺类、喹诺酮类、β-内酰胺类和四环素类抗生素耐药率最高,其中对甲氧苄氨嘧啶、诺氟沙星、头孢曲松和四环素耐药率分别高达100%、84.02%、80.9%和79.4%,一株分离自徐州的菌株对92.6%的抗生素产生耐受性。测试菌株出现多重耐药现象,优势耐药谱为LIN/CTX/CRO/NOR/CIP/T/TE,菌株耐药类型在40%~60%数量最多,各市菌株耐药类型不一。结论江苏省禽源空肠弯曲杆菌耐药性比较普遍,多重耐药菌株较突出,应严格监管养殖场抗生素的使用及流通阶段食品源空肠弯曲杆菌的监测。

利用PCR技术检测鸡肉产品中的空肠弯曲杆菌

根据空肠弯曲杆菌旋转酶基因(gyrA gene)的保守序列,设计1对引物,建立了快速检测鸡肉中空肠弯曲杆菌的PCR方法。采用该方法和生化试验对送检的100份鸡肉样品进行检测,结果表明:PCR方法能特异性地扩增出空肠弯曲杆菌192 bp核苷酸片段,其它结肠弯曲杆菌、肠炎沙门氏菌、大肠杆菌、副溶血性弧菌、产气荚膜梭菌、绿脓假单胞菌等均不能获得阳性扩增结果。检测限度为8 cfu/mL。鸡肉肉水、增菌液和纯培养菌落的PCR鉴定结果,阳性率分别为16%、24%和20%,生化鉴定检出率为20%。

基于TaqMan探针的Real-timePCR定量检测空肠弯曲杆菌

空肠弯曲杆菌 (Campylobacterjejuni ,C .jijuni)被认为是人类主要食源性病原菌之一。由于空肠弯曲杆菌特殊的生长条件和容易进入不可培养但存活的状态 (Viablebutnonculturable ,VNC) ,所以传统的生化鉴定结果并不一定可靠 ,并且是一项费时而繁琐的工作。核酸检测方法的出现为空肠弯曲杆菌的检测带来了方便。在本文基于LightCycler为平台 ,建立一种基于TaqMan探针的Real_timePCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。用该方法检测时 ,发现所有空肠弯曲杆菌 (11株 )都呈阳性 ,所有其它弯曲菌 (3株 )和其它菌株 (5株 )都是阴性。整个检测过程 6 0min内可以完成 ,检测限度为5CFU ,标准曲线的相关系数为 0 .988。结果表明荧光定量PCR方法既为空肠弯曲杆菌提供了一种特异、敏感、快速和简洁的定量检测方法 ,又为研究空肠弯曲杆菌致病机理提供了一种重要方法。

乳酸菌生物学特性与其拮抗空肠弯曲杆菌在小鼠肠道定植能力的分析

采用3周龄C57BL/6小鼠建立了空肠弯曲杆菌感染模型,评价了8株在体外具有抑制空肠弯曲杆菌生长能力的乳酸菌在体内拮抗空肠弯曲杆菌定植的能力,同时对该8株菌生长速率、产酸能力、生物膜形成能力、黏附能力等生物学特性进行了测定,通过主成分分析对8株乳酸菌生物学特性的评价以及皮尔森相关性系数对乳酸菌生物学特性及其在体内拮抗空肠弯曲杆菌定植能力相关性的分析,发现8株乳酸菌种间生物学特性差异明显大于种内生物学特性差异,且乳酸菌在小鼠体内拮抗空肠弯曲杆菌定植的能力与其细胞黏附能力呈正相关。具有最高黏附指数的植物乳杆菌N8、N9可有效清除模型小鼠肠道内的空肠弯曲杆菌,对保护人体免受空肠弯曲杆菌感染具有潜在的应用价值,同时也为具有拮抗致病菌能力的益生菌的筛选提供了理论依据。

六味地黄汤对空肠弯曲杆菌所致自身免疫模型小鼠免疫功能的影响

目的 :研究六味地黄汤 (LW )防治自身免疫病的作用和可能的作用途径。方法 :运用空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni,CJ)致敏小鼠的方法制备小鼠自身免疫模型 ,用酶联免疫吸附 (ELISA)、溶血空斑形成和 3H TdR掺入等方法观察了LW对其免疫功能的调节作用。结果 :CJ致敏小鼠的肝脏组织发生了慢性炎症反应 ,血清自身抗体如抗核抗体和抗双链DNA抗体的水平明显升高 ;LW (5和 10 g·kg-1·d-1,ig ,给药 15d)可减轻其自身免疫性炎症损伤 ,使血清抗核抗体和抗双链DNA抗体水平降低。此外 ,LW对CJ致敏小鼠增高的抗体生成反应和脾细胞增殖反应也具有明显的调节作用。结论 :LW对CJ致敏小鼠自身免疫性病理变化具有改善作用 ,其作用机制与纠正机体免疫功能平衡失调具有密切关系。

PCR法和培养法调查食品和水中空肠弯曲杆菌的比较研究

目的 PCR方法和培养法调查食品和水中空肠弯曲杆菌的比较研究。方法 用空肠弯曲杆菌VS1基因的序列为模板设计一对引物 ,建立一种快速从食品和水中检测空肠弯曲杆菌的PCR方法 ;同时对南京地区的屠宰场、超市和牛奶场等地采取 10 0份鸡肉、10 0份生牛奶及 10 0份井水及自来水进行空肠弯曲杆菌PCR法和培养法双向检查。结果 研究表明该PCR方法只对空肠弯曲杆菌能特异的扩增出 35 8bp片段 ,而其它结肠弯曲杆菌、胎儿弯曲杆菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、沙门氏菌、大肠杆菌等均不能扩增出 ,检测灵敏度达 8CFU/ml,特异性与常规生化检查是一致的 ,发现 30 % (30 / 10 0 )的鸡肉为阳性、30 % (30 / 10 0 )的生牛奶为阳性、14 % (14 / 10 0 )的水为阳性。结论 调查结果表明在市场上销售的鸡肉、牛奶、牛奶制品及井水存在不同程度空肠弯曲杆菌污染 ,如果加工不当或饮食习惯不卫生 ,会对消费者的健康构成潜在威胁。

空肠弯曲杆菌PCR-ELISA检测方法的建立

针对空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)旋转酶基因(gyrA gene)设计特异性引物和探针,将生物素和地高辛分别标记上游引物5′端和核酸探针3′端,并对反应条件进行优化,建立空肠弯曲杆菌PCR-ELISA检测方法。结果表明:该方法能特异的检测空肠弯曲杆菌基因组DNA,检测阈值为2 fg,敏感性是常规PCR的10倍。对模拟泄殖腔样本进行检测,检测限为50 cfu/mL。对100份临床样品进行检测,PCR和PCR-ELISA方法阳性检出率分别为60%和69%。

应用SYBR GreenI的Real-time PCR方法定量检测空肠弯曲杆菌

空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)被认为是人类主要食源性病原菌之一。由于空肠弯曲杆菌特殊的生长条件和容易进入不可培养但存活的状态(Viablebutnonculturable,VNC),所以传统的生化鉴定结果不一定可靠,并且是一项费时而繁琐的工作。核酸检测方法的出现为空肠弯曲杆菌的检测带来了方便。本文基于LightCycler为平台,利用SYBRGreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立一种Real-timePCR方法来定量检测空肠弯曲杆菌。用该方法检测时,发现所有空肠弯曲杆菌(11株)都呈阳性,所有其它弯曲菌(3株)和其它菌株(5株)都是阴性。整个检测过程60min内可以完成,检测限度为5CFU,标准曲线的相关系数为1。结果表明基于SYBRGreenI的定量PCR方法既为空肠弯曲杆菌提供了一种特异、敏感、快速和简洁的定量检测方法,又为研究空肠弯曲杆菌致病机理提供了一种重要方法。

禽源空肠弯曲杆菌的分离鉴定及其致病性的初步研究

本研究对广东部分地区不同品种家禽空肠弯曲杆菌的流行状况进行了调查。通过菌落和菌体形态、生化特征、培养特性等生物学特性和多重PCR方法对所分离菌株进行鉴定,结果表明广东地区鸡、鸭和鹅空肠弯曲杆菌的带菌率分别为7.93%、2.46%和4.16%。从分离株中选取10株进行了致病性试验,结果表明禽源空肠弯曲杆菌对雏鸡的主要病理变化是腹泻便血,肝脏出现白色坏死灶,盲肠充血、膨大充满气泡和红色内容物。

空肠弯曲杆菌生物学特性及分型技术研究新进展

空肠弯曲杆菌是引起人类弯曲杆菌病的主要致病菌,也是主要食源性致病菌之一。该菌主要引起人类腹泻,还可造成心内膜炎、关节炎、菌血症等全身性疾病,最严重的并发症是引发格林—巴利综合征。空肠弯曲杆菌在发达国家的感染率甚至有超过沙门氏菌而居首位的趋势。有报道将空肠弯曲杆菌称为"下一个沙门氏菌",使得世界各国对该菌高度重视。对空肠弯曲杆菌进行生物学特性分析和分型研究,不仅对其鉴定、监测和制定防控措施起到重要作用,且可帮助了解其致病和耐药机制。作者对空肠弯曲杆菌的生物学特性、血清学分型和基因分型3个方面的最新进展进行了综述和分析。

鸡肉空肠弯曲杆菌的分离鉴定及耐药性分析

目的分离和收集食源性空肠弯曲杆菌的优势流行株,了解市场上鸡肉中空肠弯曲杆菌的污染和药物敏感性情况。方法根据GB/T4789.9-2003、SN0175-2010、ISO10272-1∶2006、FDA/BAM∶2001、USDA/FSIS∶1998等方法优化组合出一套对动物性食品源空肠弯曲杆菌有效的分离鉴定方法,从市场上鸡肉中分离疑似空肠弯曲杆菌,并进一步用生化试验及PCR方法进行准确鉴定。采用微量肉汤稀释法测定了所分离的空肠弯曲杆菌对22种常见抗菌药物(组合)的最低抑菌浓度值(MIC)。结果与结论根据培养特征、形态特征、生化试验和PCR结果准确鉴定出21株空肠弯曲杆菌,其污染率为11.5%。86%生化试验阳性的菌株经PCR鉴定为阳性。将空肠弯曲杆菌标准菌株和随机选出的分离株的16SrDNA扩增序列进行比对,二者同源率为100%。药敏试验表明,14.3%的分离菌株对氨苄西林具有耐药性;大多数菌株对头孢类抗生素MIC值相对较高;42.9%的菌株对萘啶酸具有耐药性;所有分离株对环丙沙星、四环素、红霉素、氯霉素、庆大霉素、链霉素不耐药。

空肠弯曲杆菌LAMP检测方法的建立及初步应用

目的建立一种灵敏的环介导等温扩增方法(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)用于空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)的快速检测。方法根据已公布的空肠弯曲杆菌旋转酶基因(gyrA)设计引物,建立并优化LAMP反应体系,对检测方法的特异性和灵敏度进行验证,并运用该方法对我国不同地方鸡种空肠弯曲杆菌的携带率进行调查。结果该方法能扩增出典型的梯形条带,且扩增产物的酶切鉴定结果与理论值相符;对单增李斯特菌等8株实验菌株进行检测,仅空肠弯曲杆菌的LAMP结果为阳性;该方法检测空肠弯曲杆菌纯培养物的灵敏度为20cfu/mL,高于常规PCR;不同地方鸡种空肠弯曲杆菌携带率介于6%～90%之间,差异显著。结论本试验建立的空肠弯曲杆菌LAMP检测方法特异性强、灵敏度高,有望在临床样品检测中发挥作用。

动物性食品源空肠弯曲杆菌二重PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni，cj）的16SrDNA及hip O（编码马尿酸酶基因）序列设计两对特异引物，建立检测动物性食品源cj的二重PCR方法，并应用于样品检测。结果显示只对Cj能特异的扩增出699bp和366bp两个基因片段，而大肠杆菌、沙门氏菌等其他11种细菌均未扩增出条带；Cj标准株ATCC33560的16SrDNA及hip O序列与GenBank其他Cj的相应序列具高度相似性（分别为99．7％～99．9％，98．1％～99．7％）；该方法可在27h内完成，其灵敏度为2．4～16CFU／mL；四川省雅安市鸡肉、猪肉、牛肉和牛奶样品中的Ci阳性率分别为38．0％（19／50）、28．3％（15／53）、17．1％（6／35）和8．6％（4／46）。

空肠弯曲杆菌感染流行病学研究进展

空肠弯曲杆菌是一种人畜共患病原菌 ,可以引起人和动物发生各种疾病 ,并且是一种食物源性病原菌 ,被认为是引起全世界人类细菌性腹泻的主要原因。本文就空肠弯曲杆菌病原学、传染源、传播途径、感染范围。

胶东半岛地区鸡源空肠弯曲杆菌毒力基因携带状况调查

为了了解胶东半岛地区鸡源空肠弯曲杆菌的毒力基因携带和流行情况,对胶东半岛不同来源的样品进行本菌的分离鉴定,用PCR法对分离菌株的14种毒力基因进行了检测。结果:胶东半岛地区鸡源空肠弯曲杆菌的平均分离率为45%。14种检测的毒力因子cia B、rac R、dna K、pld A、cdt A、cdt B、cdt C、neu B1、che W、grp E、che Y、fla A、peb1A cad F的检出率分别为96.26%、97.2%、100%、100%、76.64%、99.07%、99.07%、4.67%、99.07%、71.96%、98.13%、100%、99.07%和99.07%。结果表明,胶东半岛地区鸡源空肠弯曲杆菌毒力基因携带率高,不同毒力基因携带率差异大。所以,加强空肠弯曲杆菌毒力基因的监测,对公共卫生安全意义重大。