空肠弯曲菌28KD^31KD外膜蛋白的初步提取及鉴定

目的:探讨空肠弯曲菌28KD^31KD外膜蛋白的提取方法及其鉴定。方法:采用改良布氏肉汤培养基培养空ν淝?Campylobacterjejuni,CJ),用0 2mol/L、pH2 2甘氨酸-HCl缓冲液提取CJ外膜蛋白,SephadexG-75分子筛层析法纯化28KD^31KD分子,SDS-PAGE分子量鉴定,Westernblotting印迹法鉴定CJ甘氨酸提取物中外膜蛋白及纯化的28KD^31KD分子抗原性。结果:以甘氨酸提取CJ的外膜蛋白,SephadexG-75层析纯化能够提取出CJ28KD^31KD外膜蛋白,该蛋白分子能够与CJ兔抗血清发生特异性反应。结论:采用甘氨酸提取、SephadexG-75纯化CJ28KD^31KD外膜蛋白系一种稳定可靠的分离层析方法,提取的CJ28KD^31KD外膜蛋白具有良好的抗原性,为特异性的CJ28KD^31KD外膜蛋白的多克隆抗体制备、CJ感染的血清学特异性诊断、CJ亚单位疫苗的研制打下基础。

空肠弯曲菌口服全菌佐剂疫苗的初步研究

目的 本研究采用明胶为空肠弯曲菌菌苗的佐剂 ,灌胃免疫小鼠 ,评价佐剂全菌苗的免疫原性。方法 采用明胶为佐剂的全菌疫苗灌胃免疫Balb/c小鼠。加明胶为佐剂全菌疫苗灌胃免疫Balb/c小鼠为实验组 ,全菌疫苗肌注和全菌疫苗灌胃免疫为实验对照组 ,PBS灌胃免疫为正常对照组 ,未作任何处理的Balb/c小鼠为阴性对照组 ;接种 3次 ,间隔 7d ,末次接种 1wk后收集小鼠血清和小肠粘液。采用ELISA间接法检测血清抗体IgG、IgA、IgM和肠道粘液抗体SIgA水平。 结果 各组血清抗体IgG、IgA、IgM和肠道粘液抗体SIgA水平 ,加佐剂组明显高于未加佐剂组 ,有统计学差异 (P <0 .0 5 ) ,肌注组与加佐剂组间没有统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 本研究显示佐剂疫苗口服有良好的免疫原性 ,明胶可作为口服疫苗的候选佐剂。

空肠弯曲菌制备自身免疫综合征动物模型的研究近况

以空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)制备全身性自身免疫病动物模型,始于上世纪八十年代,兴于九十年代.由我国学者[1]首次制备成SLE样自身免疫综合征表现的小鼠动物模型,因其模型稳定可靠[2],涉及多脏器组织的免疫病理损害,自身免疫病拟似性强,经济易行,试验周期短,已成为研究自身免疫病机理及中药免疫作用研究的重要试验支撑条件.本文就空肠弯曲菌制备自身免疫病模型动物的机理和试验研究作一概述.

空肠弯曲菌与格林－巴利综合征

空肠弯曲菌与格林－巴利综合征孔祥瑞，袁锦楣，王晓萍空肠弯曲菌（ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｊｅｊｕｎｉ，ＣＪ）属螺旋科弯曲菌属胎儿种，为革兰氏染色阴性弧菌，具有内毒素特征、是近年来引起人腹泻的常见原因［１，２］．１９９２年Ｒｈｏｄｅｓ等［３］首先报告１...

空肠弯曲菌的神经节苷脂模拟结构诱导日本大耳兔发生周围神经传导阻滞

目的：探索空肠弯曲菌（CJ） 外膜上神经节苷脂样结构是否为诱导周围神经传导阻滞的关键抗原结构,为CJ诱发吉兰-巴雷综合征（Guillain-Barré,syndrome,GBS）的分子模拟理论提供证据.方法：利用CJ亲代株（含神经节苷脂样结构）及waaF变异株（缺失神经节苷脂样结构）作为抗原,进行对照研究.将26只日本大耳兔随机分为CJ亲代株组（10只）、waaF变异株组（10只）及对照组（6只）,分别用亲代株CJ、waaF变异株及免疫佐剂,对三组动物进行全身免疫.于免疫前及免疫后第4、8周进行神经电生理检查,观察坐骨神经复合肌肉动作电位（CMAP）、坐骨神经运动传导速度（MCV）、F波出现率的变化.结果：神经电生理检查显示：免疫后第4周,亲代株组动物坐骨神经CMAP波幅较免疫前明显降低,差异显著 （P〈 0.05）;第8周时CMAP波幅较第4周进一步下降;变异株组动物坐骨神经CMAP波幅在第4周及第8周时与免疫前比较无明显差异;三组动物坐骨神经MCV在免疫前、免疫后第4及第8周比较差异均无显著意义（P〉 0.05）;免疫后亲代株组动物坐骨神经F波出现率减少,而变异株组无明显改变.结论： CJ外膜上神经节苷脂结构可诱导动物轴索型周围神经传导阻滞,支持CJ感染相关轴索型GBS的分子模拟发病理论.

空肠弯曲菌cj0069蛋白的克隆表达及抗原性分析

目的构建空肠弯曲菌cj0069基因原核表达系统,克隆表达cj0069蛋白,根据cj0069的氨基酸序列进行抗原性结构预测分析,并验证其抗原性特征。方法利用在线软件对cj0069蛋白进行抗原性结构预测分析;用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的基因组DNA中扩增cj0069基因,连接入pMD18-T载体,将重组质粒pMD18-T/cj0069和表达载体pGEX-4T-1双酶切,回收cj0069和pGEX-4T-1酶切产物后连接,连接产物转化入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),对重组质粒pGEX-4T-1/cj0069进行测序及酶切鉴定,IPTG诱导其表达,表达产物进行SDS-PAGE分析及飞行质谱鉴定;利用空肠弯曲菌兔免疫血清,采用Western blot分析cj0069蛋白的抗原反应性。结果 PCR扩增、DNA测序及酶切鉴定证实重组质粒pGEX-4T-1/cj0069构建成功,重组表达蛋白rGST-cj0069经飞行质谱鉴定为保守空肠弯曲菌蛋白。结构预测获得cj0069蛋白的抗原性肽段及线性表位等抗原性结构特征。Western blot检测显示该蛋白不能被空肠弯曲菌免疫兔血清识别。结论成功构建cj0069基因重组表达载体pGEX-4T-1/cj0069,并在大肠埃希菌中高效表达,获得的空肠弯曲菌cj0069蛋白具有抗原性结构特征,但针对免疫血清不具有抗原反应性。

空肠弯曲菌诱导系统性红斑狼疮样小鼠模型的优化

目的优化空肠弯曲菌(CJS131)诱导系统性红斑狼疮(SLE)样小鼠模型的方法。方法小鼠随机分为5组,即正常对照组、卡介苗(BCG)对照组、结核分枝杆菌H37Ra对照组、CJS131+BCG模型组和CJS131+H37Ra模型组。在第0天免疫,在第14、21、42天加强免疫,在第36、54、61天分批称其体质量后处死。检测小鼠免疫器官指数、血清抗核抗体水平、血清总Ig G水平和肾组织病理损伤程度。结果不论采用含BCG还是H37Ra的弗氏完全佐剂(FCA),给予CJS131免疫的小鼠均有SLE样综合征的表现:血清抗核抗体及总Ig G水平升高,肾组织损伤。在动态检测中病变基本维持。结论 CJS131在对模型组小鼠的免疫诱导中起主要作用,以BCG或H37Ra作为FCA中采用的菌株都可引起病变,通过加强免疫可维持小鼠长期病变,优化后的模型可用于SLE治疗性药物的筛选。