电穿孔法转化大肠杆菌的影响因素

质粒ＤＮＡ转化大肠杆菌是分子生物学中最为常用的技术方法。经典的氯化钙法１μｇＤＮＡ可获得１０５～１０６个转化子，但不能满足转化效率要求极高的实验需要（如构建质粒文库等）。近年发展的高效化学法转化甚至可将转化效率提高１０００倍［１，２］。但是，制备这类...

杨树活体枝桠材穿孔法染色效果研究

【目的】探索杨树枝桠材的染色加工技术,以使杨木可以作为装饰材使用,满足人们对装饰材色彩多样性的需求,提高木材的使用价值和使用率。【方法】采用立木染色中的穿孔法,以活性染料质量分数(0.2%,0.3%,0.4%)、pH值(4,5,6)、染色时间(4,6,8d)和渗透剂质量分数(0.03%,0.05%,0.07%)为染色因素,进行了杨树枝桠材染色正交试验,以上染率和色差为评定标准,选择染色最优条件。【结果】上染率在染料质量分数为0.3%时达到最大值61.41%,色差在染料质量分数为0.4%时达到最大值16.29。上染率和色差在pH值为4时分别达到最大值69.33%,16.71,在pH值为6时有最小值44.19%,14.48;在染色时间为8d时分别达到最大值63.80%,15.53;在渗透剂质量分数为0.07%时分别达到最大值60.57%,15.51,在渗透剂质量分数为0.03%时有最小值57.74%,15.31。染色的最优条件为:染料质量分数0.4%,pH值4,染色时间8d,渗透剂质量分数0.07%。【结论】上染率和色差随着染色时间的增加或渗透剂质量分数的增大而增大,随着pH值的增大而减小,随着染料质量分数的增大色差增大,而上染率先增大后减小。

方波脉冲电穿孔法提高酵母菌细胞通透性的条件优化

为了采用电穿孔法提高酵母菌细胞的通透性,将通过离心得到的酵母菌制成1×108CFU/mL的菌悬液,采用不同的方波电脉冲条件对其进行处理。结果表明:在0.6mol/L的蔗糖等渗电脉冲介质中,当酵母菌细胞的处理条件为电场强度7kV/cm,脉冲宽度50μs,脉冲数14,间隔时间2s时,细胞的存活率平均为81.16%,电穿孔率平均为65.14%。这表明电穿孔法可以有效增强酵母菌细胞的通透性。

脂质体及电穿孔法对大鼠雪旺细胞转染效率的比较与分析

目的对比脂质体与电穿孔法及不同载体对大鼠雪旺细胞的转染效率,为进一步研究神经胶质细胞奠定实验基础。方法以大鼠雪旺细胞为研究对象,采用脂质体法和电穿孔法分别转染绿色荧光蛋白(GFP)载体和羧基荧光素(FAM)标记的miRNA mimics,比较和分析两者的转染效率。结果脂质体转染法成功转染GFP质粒大鼠雪旺细胞的效率为(15.6±2.3)%,转染miRNA mimics的效率为(36.8±3.5)%;采用电穿孔法转染GFP质粒的效率高达(40.6±3.3)%,而该法转染miRNA mimics的效率则非常低。结论大鼠雪旺细胞的转染效率可能与转染方式、被转染物的大小和形式有关。

电穿孔法介导质粒DNA转化大肠杆菌XL1-Blue MRF′菌株的实验研究

目的探讨电穿孔法介导质粒DNA转化大肠杆菌XL1-Blue MRF′的最佳条件,提高其转化效率。方法将pCMV-Scrip质粒转化大肠杆菌XL1-Blue MRF′菌株,观察不同的电转化条件对转化效率的影响。结果电场强度、脉冲时间、电击缓冲液的离子强度、细菌生长状态、感受态细胞保存时间、质粒DNA浓度对转化效率均有不同程度的影响;在电压2.0kV,电阻200Ω,电容25μF,脉冲时间4.3ms和低离子强度电击缓冲液的条件下转化,能获得较高的转化率。结论优化电穿孔条件能提高转化效率。

电穿孔法在细菌质粒转化中的应用

许多细菌,包括工业上和医学上重要的细菌,由于没有合适的遗传转化系统,无法进行质粒转化工作,电穿孔法(电转化法)为解决这个难题提供了一条有效的新途径。电穿孔法的基本原理是,当细胞放在电场中,细胞膜起着电容器的作用,电流不能通过(离子通道除外),随着电压升高,细胞膜组分被极化。

电脉冲穿孔法将几丁质酶基因导入巨大芽胞杆菌

为了探索适宜于巨大芽胞杆菌电脉冲转化条件,将带有沙雷氏菌几丁质酶编码基因的穿梭质粒转化到植病生防菌—巨大芽胞杆菌B1301中。以芽胞杆菌B1301对数期细胞为感受态细胞,采用不同的电击转化条件进行转化,通过转化率和几丁质酶活性表达认为巨大芽胞杆菌的最佳电击转化条件为电压1000 V/mm,电容25μF,电阻400Ω,转化率为9.6×104/μg质粒,几丁质酶活性表达的菌株几率为41.67%。

电穿孔法转染原代培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的条件优化

目的:通过电穿孔法将增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,探讨影响外源基因电转染效率的参数,如电压、脉冲长度、DNA剂量以及转染后时间长度等。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP—N1质粒,选择不同的电压梯度、脉冲长度及DNA剂量,采用电转仪将pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,用荧光显微镜观察转染后不同时间pEGFP-N1瞬时表达情况及细胞存活情况,流式细胞仪检测其转染效率。结果:在电压为250v、脉冲数1、脉冲长度150μs、DNA质粒6μg时,电穿孔法将pEGFP-N1质粒导入瘢痕疙瘩成纤维细胞转染率最高,细胞存活率最高,转染后24h明显表达,48h后表达最强。结论:在适当的电压、脉冲长度下,选择适当的DNA用量,在转染后一定的时间范围内,电穿孔法转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞可使目的基因获得较高的转染率,且细胞死亡最少。电穿孔法是研究原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为较为理想的转染方法。

甲醛释放量穿孔法和抽吸法测定值的相关性

分别采用穿孔法和抽吸法测定了中密度纤维板的甲醛释放量值,测试结果表明,用穿孔法和抽吸法测得的甲醛释放量,两者所得数据之间有很好的相关性,存在着一定的换算关系。同时,测试结果显示:一张板材内不同位置甲醛释放量值存在较大的差异。

活体电穿孔法基因导入技术

活体电穿孔法 (invivoelectroporation)可将外源基因有效导入靶组织或器官 ,导入效率较高 ,并且可在多种组织器官上应用。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多 ,在基因治疗方面的优势也日趋显著 。

穿孔法等离子弧立焊焊缝成形机理初探

通过对立焊穿孔熔池的受力状态的分析,初步揭示了穿孔法等离子弧立焊焊缝成形机理,从而发现焊接工艺参数对焊缝成形影响的规律,为进一步研究穿孔法等离子弧立焊焊缝成形机理奠定了基础理论分析和试验结果均表明,穿孔能否连续稳定存在是焊缝成形的前提,而穿孔熔池液面金属的受力及流动则对焊缝正反面的成形起着重要作用在此基础上指出,焊接电流和离子气流量过大时会因穿孔熔池下半部的收缩能力小于上半部的扩张速度而形成切割,反之。

等离子弧穿孔法立焊焊缝成形规律的研究

研究了铝合金等离子弧穿孔法立焊的焊接工艺规范及焊接参数对焊缝成形的影响．结果表明：采用立焊方法，其焊接规范区间增宽，工艺再现性好；控制喷嘴到工件的距离可实现对焊缝正反面增高量及宽度的控制；填充焊丝及装配间隙对焊缝成形及穿孔熔池的稳定性有一定的影响．

蜜蜂活体电穿孔法导入DNA的新技术

蜜蜂是一种重要的经济昆虫。同时，蜜蜂也是研究真社会昆虫个体特征分化最典型的模式体系，蜜蜂已成为系统论、行为生态学、神经学和老年化研究的模型。蜜蜂具有世代周期短、繁殖率高、后代个体数多、能大量饲养、易获得大量性状一致、发育同步的群体等优点，是理想的实验动物研究模型。

电穿孔法提高hTERT转染原代培养乳鼠心肌细胞效率的研究

目的探讨提高人端粒酶逆转录酶基因（hTERT）转染原代培养乳鼠心肌细胞效率的有效方法。方法通过测量悬浮心肌细胞的半径,估计电击穿时临界电压的范围。以钙黄素为报告分子,确定最佳可逆性电击穿时电压范围。进而用pAdtrack-GFP-hTERT对乳鼠心肌细胞进行转染,并通过绿色荧光蛋白（GFP）的表达比较电穿孔、Lipofectamine 2000和Top Easy 3种转染方法对hTERT的转染效率。结果电压170-200 V,波宽2 ms左右,间隔125 ms,脉冲4-6个时,pAdTrack-GFP-hTERT可有效转染乳鼠心肌细胞,转染率高达7.5%,而Lipo-fectamine 2000法和Top Easy法转染率均为0（P〈0.01）。结论利用电穿孔技术可将hTERT长cDNA片段导入原代培养的乳鼠心肌细胞。

四切口微穿孔法放射状角膜切开术治疗近视

四切口微穿孔法放射状角膜切开术治疗近视王林农，王匀，陈力迅，赵太宏，肖磊南京市第一医院眼科２１０００６放射状角膜切开术（ｒａｄｉａｌｋｅｒａｔｏｔｏｍｙ．ＲＫ）是治疗近视的一项可靠技术．１９９２年以来，我们在ＲＫ术中运用四切口微穿孔（ｍｉｃｒｏｐｅｒ...

电穿孔法转染水牛脂肪干细胞与成纤维细胞的研究

本研究以不同培养代数(P)水牛脂肪干细胞(buffalo adipose-derived stem cells,BASC)和成纤维细胞(buffalo fetal fibroblasts,BFFs)为研究对象,采用电穿孔法对其进行转染,比较转染后细胞的相对存活率和转染效率,为生产高效转基因供体细胞奠定基础。以绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,电转染48 h后观察荧光表达,收集细胞采用血细胞计数法和流式细胞仪分析细胞相对存活率和转染效率。结果表明:电转后的BASC和BFF表达EGFP,BASC相对存活率低于BFF,P10之前BFF存活率更稳定;BASC和BFF转染效率随培养代数增加出现不同程度的降低,P10之前BFF转染效率更稳定。电转技术可用于转染BASC和BFF,并获得较高的转染效率;使用体外培养早期代数的BASC(P8之前)和BFF(P10之前)可以获得更稳定转染效率的转基因细胞。

鼠胚大脑皮层子宫内电穿孔法基因转移体系的建立

体内电穿孔法转基因技术作为一种新型有效的转基因方法,被广泛应用于发育生物学的研究,特别是中枢神经系统发育。本研究旨在通过子宫内电穿孔法,建立鼠胚大脑皮层体内基因转移体系:将带有GFP的表达载体pCAGGS-IRES-EGFP显微注入胚胎期14.5d的鼠胚侧脑室中,电极沿与脑中缝平行的方向夹持鼠脑,在电压30V,脉冲时间50ms,脉冲数5的条件下方波电击,将外源基因转移到室管膜层细胞。胚胎被重新放回母体内,继续发育3d。分离被转染的鼠胚脑组织,沿冠状面冰冻切片,在荧光显微镜下观察到外源蛋白GFP在鼠胚大脑皮层中的瞬时表达。鼠胚大脑皮层子宫内电穿孔法基因转移体系的建立将为进一步研究皮层发育、神经元迁移、轴突导向等以及神经发生过程中相关基因功能奠定基础。