CD_(4)^(+)T淋巴细胞穿孔素基因启动子低甲基化水平在戒烟大鼠肺气肿进展中的作用及S-腺苷甲硫氨酸的干预效果

目的探讨CD_(4)^(+)T淋巴细胞穿孔素基因启动子甲基化水平与戒烟后大鼠肺气肿持续进展的关系及S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的干预效果。方法将20只SD大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、戒烟4周组、戒烟后SAM干预4周组,各5只,后3组香烟烟雾暴露法建立大鼠肺气肿模型并采取相应措施。各组取右下肺组织行苏木精-伊红(HE)染色观察病理学改变,测量平均内衬间隔(MLI)和平均肺泡数(MAN)。用免疫磁珠法从各组大鼠的脾脏中分选出CD_(4)^(+)T淋巴细胞,提取其DNA,检测CD_(4)^(+)T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域的甲基化水平。结果模型组、戒烟4周组、戒烟后SAM干预4周组MLI均较正常对照组增加(均P<0.05),其中戒烟4周组较模型组、戒烟后SAM干预4周组增加(均P<0.05)。模型组、戒烟4周组、戒烟后SAM干预4周组MAN均较正常对照组减小(均P<0.05),其中戒烟4周组较模型组减小(P<0.05)。模型组和戒烟4周组CD_(4)^(+)T淋巴细胞穿孔素基因启动子甲基化水平均低于正常对照组和戒烟后SAM干预4周组[(93.9±3.1)%、(93.1±1.8)%比(97.1±1.1)%、(96.4±1.5)%](均P<0.05)。结论CD_(4)^(+)T淋巴细胞穿孔素基因启动子低甲基化水平在大鼠戒烟后仍持续存在,可能是戒烟后大鼠肺气肿不断恶化的原因之一;而给予SAM干预后,戒烟大鼠的肺气肿恶化可好转。

直流脉冲场作用下穿孔悬液细胞跨膜电压计算模型

细胞膜穿孔期间,膜电导率大幅度提高,正常生理条件下的悬液细胞跨膜电压(Transmembranevoltage,TMV)计算模型不再适用。我们建立了高强度直流脉冲电场作用下,均匀悬液中穿孔细胞跨膜电压的计算模型。首先将膜电导率不均匀分布的穿孔悬液细胞等效为一小球,然后根据有效介质理论求出细胞悬液的平均场,用其代替难于精确求解的实际场,最后利用穿孔单细胞膜电压计算公式,建立悬液中穿孔细胞膜电压的计算模型。模型表明在穿孔期间,细胞膜跨膜电压和外加电场大小,细胞膜穿孔临界角,细胞半径,细胞质、细胞膜和膜外溶液的电导率、细胞排列以及细胞浓度等参量有关。

人体血液体外电击致血细胞穿孔的扫描电镜观察

目的探讨血细胞体外电击时细胞膜的结构变化。方法对成人血液分别分组通过220V交流电电击5,10,20,30s和1min后,用扫描电镜观察血细胞膜的变化。结果电击后,即可以观察到红细胞与白细胞的细胞膜穿孔,其中红细胞穿孔可为一个或多个,形状多为圆形或卵圆形,白细胞穿孔则为多个,呈筛网状;穿孔细胞数随电击时间延长而增多;电击5s时为6%左右,以后逐渐增加,至电击1min时,穿孔细胞数可达40%左右。结论电流作用可以使血细胞膜发生穿孔,穿孔细胞数随通电时间延长而增多。

细胞电穿孔导入DNA的动态特征

本文以Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１为模型细胞，研究了不同幅度和时间常数的ＲＣ放电脉冲条件下，触发细胞穿孔，导入长度分别为４２２和１６８０ｎｍ的超螺旋长丝形质粒ｐＵＣ－１８和ｐＣＰ１０，及精胺缩合后直径为８８ｎｍ的复曲面体的质粒ｐＣＰ１０，测定了相应的细胞转化率。实验结果显示了细胞电穿孔导入ＤＮＡ的动态特征。

细胞电穿孔与电融合的机理及应用

近十余年来，由于细胞生物学家、分子生物学家、免疫学家与物理学家之间在学术上的相互渗透、共同实验，已经开辟出一个生物物理技术的新领域．它既涉及细胞电磁场效应及其机理的基础研究；同时作为一种新的生物技术，又涉及对分子生物学、细胞生物学、免疫医学以及医药、食品、农业等方面的广泛应用．文章综述了本领域的最近进展．

细胞膜电穿孔及其肿瘤治疗的研究

电穿孔是在脉冲电场作用下细胞膜暂时出现微孔的物理过程 ,其结果是细胞内外分子交换显著增加 ,有利于细胞吸收各种药物、基因物质、蛋白质和其它大分子等。电场取消后微孔关闭而不会对细胞造成任何影响。电穿孔对于研究脉冲电场作用下细胞的结构和功能有重大意义 ,这种瞬时可逆的膜渗透性增强大大促进了化疗药物的跨膜运送 ,有效地提高了其杀伤力 。

电流对人体损伤与细胞电穿孔在法医学中的研究进展

据世界卫生组织统计,在触电事故中,美国每年大约有0.5/100,000的致死率,大约1/3的电击伤(主要是一些高压电电击伤)与职业有关;发生于低压电源中的占60%～70%,多由于家用电器触电所致,其死亡率约占家庭突发死亡的1%.在低压电击伤的事故中,死亡人数约占整个电击伤死亡人数的一半,其死亡率是很高的[1].

低强度瞬态电磁脉冲引发细胞电穿孔的实验初探

采用宽频带横电磁传输室,通过实验观察到低强度瞬态电磁脉冲作用下产生的细胞电穿孔现象,并提出了初步分析及其应用前景。

强脉冲电场致细胞膜电穿孔的实验研究

采用肝癌细胞HePG2作为靶细胞,罗丹明偶联葡聚糖为荧光探针,荧光分光光度计作为检测设备,试验研究细胞膜电穿孔与电脉冲参数之间的关系.试验中发现随着电场强度或脉冲宽度的增加,样品荧光强度增加,细胞膜穿孔率相应增强;

应用穿孔全细胞膜片钳记录技术研究培养大鼠耳蜗螺旋神经节神经元的基本电生理特性

为了深入了解耳蜗螺旋神经节(SG)神经元的基本电生理特点,本研究首先成功培养了急性分离的大鼠SG神经元,然后采用穿孔全细胞膜片钳记录技术观察了培养SG神经元的基本电生理特性。结果表明,可从培养的SG神经元记录到动作电位,且不同的SG神经元具有异质性的放电特征。上述结果提示穿孔全细胞膜片钳记录技术可用于体外培养耳蜗SG神经元的电生理特征研究,为开展听觉信息传导和调控的功能研究开辟了新途径。

一种有效记录人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法

目的:探讨一种有效记录人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法,使细胞内环境保持稳定,改善常规全细胞膜片钳破膜所造成的封接不稳定。方法:以人肠系膜动脉平滑肌细胞为研究对象,采用穿孔全细胞膜片钳技术,记录人肠系膜动脉平滑肌细胞上大电导钙激活钾通道(big-conductance Ca2+-activated potassium channels,BKCa)宏观电流以及自发性瞬时外向电流(spontaneous transient outward currents,STOCs)。结果:采用这种穿孔全细胞膜片钳技术,能有效记录到人肠系膜动脉平滑肌细胞上BKCa和STOCs。结论:穿孔膜片钳技术是一种简便而有效的记录全细胞电流的实验方法,该方法的建立为今后更深入的研究提供实验基础。

高功率脉冲微波和电磁脉冲辐照对心肌细胞膜电穿孔效应及机理的研究

电磁辐射可造成人体多器官系统的损伤。对其损伤的病理机制至今尚未完全阐明。心脏是电磁辐射损伤的敏感器官之一。本实验拟通过研究HPPM和EMP对心肌细胞的影响,探讨电磁辐射致伤的关键机制,解释脉冲电磁场致心肌细胞损伤的发展规律。本实验采用HPPM和EMP辐照原代培养心肌细胞的方法,用原子力显微镜、激光扫描共聚焦显微镜、流式细胞仪和全自动生化检测仪等多种实验手段,检测辐照对细胞膜形态、结构和功能的影响。结果发现HPPM和EMP辐照后,心肌细胞搏动减慢,形态异常,活力下降,凋亡和坏死率明显增加。细胞膜出现数量不等、大小不一的电穿孔,细胞膜通透性丧失,结构破坏,细胞培养液中Na+、K+、Ca2+、Cl-、Mg2+、Ca2+和无机磷离子浓度显著升高(P<0.01),细胞内Ca2+浓度显著降低(P<0.01)。结果提示心肌细胞是电磁辐射损伤的敏感细胞,脉冲电磁场可致心肌细胞膜电穿孔,细胞形态、结构和功能均受到严重损伤。电穿孔效应是解释电磁辐射非热效应的关键机制之一。电穿孔导致的细胞膜通透性和膜结构改变存在一定发展规律。

穿孔膜片钳记录肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道方法初探

目的利用穿孔全细胞膜片钳技术以提高记录到稳定的大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large conductance Ca2+-activated K+channels,BKCa)电流的成功率。方法在两性霉素B穿孔全细胞膜片钳下记录大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa宏观电流和自发性瞬时外向电流(spontaneous transient outward currents,STOCs)。结果采用两性霉素B穿孔全细胞膜片钳技术,记录到BKCa和STOCs概率明显增加,且可以维持3小时。结论通过穿孔全细胞膜片钳可以记录到稳定的且维持时间长的大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa电流。

慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞内穿孔素的表达及临床意义

目的研究慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞内穿孔素(perforin)、干扰素(IFN-γ)和白介素10(IL-10)表达与病毒的消除间的关系。方法对50例慢性乙型肝炎患者外周血,用流式细胞术测定CD8+细胞内perforin、IFN-γ和IL-10表达,并同30例正常对照组进行比较;利用荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎患者HBV DNA的载量,分析其与CD8+细胞内perforin、IFN-γ和IL-10表达的关系。结果慢性乙型肝炎组CD8+T细胞perforin、IFN-γ和IL-10的表达分别为(5.30±2.62)%、(4.05±2.25)%和(0.77±0.50)%,明显低于正常对照组,差异有统计学意义;慢性乙型肝炎患者CD8+T细胞内perforin和IFN-γ表达率与乙肝病毒DNA载量成负相关(r分别为-0.539、-0.340,P【0.01、P【0.05)。结论慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞存在功能上的缺陷,细胞内perforin、IFN-γ和IL-10表达减少可能与病程迁延不愈有关。

一种有效记录成骨细胞L型钙通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法

目的:探讨一种有效记录成骨细胞L型钙通道电流的穿孔全细胞膜片钳方法。此方法使玻璃电极与细胞内液保持电化学连续性,使细胞内环境保持稳定,改善常规全细胞膜片钳破膜造成的破膜难和封接不稳,以及常规全细胞膜片钳破膜后造成的封接不稳。方法:以成骨细胞为研究对象,采用β-七叶素穿孔全细胞膜片钳技术,记录骨细胞L型钙通道电流。结果:采用这种穿孔全细胞膜片钳技术,能有效记录到成骨细胞上L型钙通道电流。结论:穿孔膜片钳技术是一种简便而有效的记录全细胞电流的实验方法,该方法的建立为今后更深入的研究疾病中成骨细胞的病理生理机制提供实验基础。

细胞电穿孔联合艾迪注射液对小鼠宫颈癌U14作用的实验研究

目的观察细胞电穿孔联合艾迪注射液对小鼠宫颈癌U14生长的抑制作用。方法取雌性昆明小鼠58只,建立U14宫颈癌皮下移植瘤模型,然后随机分为对照组(C组)、艾迪注射液治疗组(Ai组)、电穿孔处理组(E组)、电穿孔+艾迪注射液低剂量治疗组(EAL组)、电穿孔+艾迪注射液高剂量治疗组(EAH组)。比较治疗后各组荷瘤鼠体质量和肿瘤的质量,计算各组抑瘤率。光学显微镜下观察肿瘤组织的病理变化,用TUENL细胞凋亡试剂盒检测各组肿瘤细胞的凋亡情况。结果 Ai组、E组、EAL组和EAH组平均瘤质量明显低于对照组,能显著抑制肿瘤生长。EAH组的平均瘤质量显著低于E组和Ai组。Ai组、E组、EAL组和EAH组的抑瘤率分别为26.8%,25.6%,51.9%和59.4%。结论电穿孔联合艾迪注射液对U14移植肿瘤起到很大的杀伤和抑制生长的作用。

电穿孔脉冲宽度对细胞融合及DNA转化的作用研究

利用细胞电穿孔技术，在不同宽度的ＲＣ放电脉冲条件下，对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的脾细胞和ＮＳＩ骨髓瘤细胞的融合率及质粒ＰＵＣ—１８导入Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１细胞的转化率进行了检测。实验结果显示出细胞电穿孔技术中，脉冲宽度选择的重要性。

带对准光路的激光细胞穿孔显微物镜设计

针对近红外光谱可对活体组织进行无损伤穿孔，并解决在穿孔中需要重新对焦的问题，通过Zemax软件对7片式前置光阑显微物镜结构在0.48～1.48mm波长范围内进行了宽光谱消色差的优化设计。设计实现了像距为无限远的多光谱共焦成像，其放大倍率为40，数值孔径0.5，最大焦面漂移量仅为27mm，可见光波段在空间频率为350 lp/mm时，0.7视场的MTF＞0.5，具有较高的分辨力。并且在波长1480 nm处，MTF值接近衍射极限，具有较高的能量，满足细胞穿孔的要求。文中还给出了实验结果，并预测其应用前景。

CD4^(+)T细胞、NK细胞穿孔素异常表达对手足口病免疫状态评估及预后的指导价值

目的探究CD4+T细胞、NK细胞穿孔素(PRF)异常表达对手足口病(HFMD)患儿免疫状态和病情评估,分析其对临床预后的指导价值。方法选取2017年1月至2020年6月我院收治的143例HFMD患儿,按照病情严重程度分为普通型组(n=67)、重型组(n=45)和危重型组(n=31),另选体检正常儿童35例作为对照组,比较各组T淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T)、CD14+单核细胞、NK细胞PRF、颗粒酶B(GrzB)、CD19+B细胞亚群、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)及补体(C3、C4)水平,并分析CD4+T细胞、NK细胞PRF表达与病情严重程度(PCIS评分,PRISMⅢ评分)及预后关系。结果重症组、危重型组、普通型组患儿CD3+T、CD4+T、CD14+、CD19+B、NK细胞数及低于对照组,NK细胞PRF、GrzB表达高于对照组,其中重症组、危重型组较普通型组变化更明显,差异具有统计学意义(P <0.05);各组IgA、IgG、IgM及补体C3、C4水平差异无统计学意义(P> 0.05);Pearson相关性分析显示,CD4+T细胞与PCIS评分呈正相关(r=0.665,P <0.05),与PRISMⅢ评分呈负相关(r=-0.757,P <0.05),PRF与PCIS评分呈负相关(r=-0.615,P <0.05),与PRISMⅢ评分呈正相关(r=0.596,P <0.05);预后良好患儿CD4+T细胞高于预后不良患儿,NK细胞PRF低于预后不良患儿,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论手足口病患儿存在明显CD4+T细胞表达过低、NK细胞PRF表达过高,两者可用于重症患儿细胞免疫状况评估,且与患儿病情严重程度和预后不良有关。

慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞内穿孔素、干扰素及白细胞介素10表达与病毒消除的关系

目的对慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞内穿孔素(Perforin)、干扰素(IFN-γ)及白细胞介素10(IL-10)表达与病毒消除的关系进行研究分析,为今后的临床工作提供有价值的参考依据。方法选择2017年1月至2019年6月我院收治的获得临床确诊的慢性乙型肝炎患者56例作为研究对象,定义为观察组,另取同期健康体检者56名作为对照组,对其进行外周血短期培养,采取流式细胞术对CD8^(+)细胞内Perforin、IFN-γ、IL-10的表达水平进行检测,并对两组受试者检测结果进行对比分析。采用荧光定量PCR法对慢性乙型肝炎患者HBV DNA载量进行检测,对病毒载量与CD8^(+)细胞内Perforin、IFN-γ、IL-10表达的关系进行分析。结果观察组患者CD8^(+)细胞内Perforin、IFN-γ、IL-10表达水平较对照组发生显著降低(P<0.05);观察组HBeAg阳性患者CD8^(+)细胞内Perforin、IFN-γ、IL-10表达水平较HBeAg阴性患者发生显著降低(P<0.05);观察组CD8^(+)细胞内Perforin、IFN-γ、IL-10的表达水平与HIV DNA载量呈现明显负相关(P<0.05)。结论慢性乙型肝炎患者细胞毒T细胞内Perforin、IFN-γ、IL-10表达水平会发生显著减少,并且与慢性乙型肝炎患者病毒长期存在有关,与病程迁延不愈存在密切联系,在今后的临床诊断和治疗中,应对其给予足够的关注。