穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物大鼠长期毒性试验研究

目的观察连续给予穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物后,由于积蓄而对机体产生的毒性反应及严重程度,提供中毒靶器官及其损害的可逆性,确定无毒反应剂量。方法大鼠连续4周腹腔给予穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物250、500、1000mg.kg-1,观察动物的一般状况,体重增长及血液、生化指标并解剖进行病理检查。结果穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物250mg.kg-1给药4周后大鼠一般行为、体重增长、尿常规、血液学、血液生化学、脏器重量、脏器系数及病理学检查均未见显著性变化。500mg.kg-1给药结束后BUN、CRE有升高趋势。1000mg.kg-1给药后动物出现扭体、消瘦、体重减轻等症状;给药结束后BUN、CRE升高,组织病理学检查3/10动物出现肾小管出血,小灶性水肿。以上各症异常指标在停药后均可恢复。结论连续腹腔注射4周,安全用药剂量为250mg.kg-1.d-1。

穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物解热镇痛作用的实验研究

昆明种小白鼠，体重18～22g，雌雄兼用，合格证号：10-1015。Wistar大鼠。体重150-190g，雄性，合格证号10—1016。日本大耳白兔，体重2．0-2．5kg，合格证号：10—5115。以上动物均购于长春高新医学动物实验研究中心。

亚硫酸氢钠穿心莲内酯在Beagle犬体内的药动学研究

目的 建立检测亚硫酸氢钠穿心莲内酯血浆浓度的反相离子对高效液相色谱 (Ion pairRP HPLC)法 ,研究亚硫酸氢钠穿心莲内酯在Beagle犬体内的药动学。 方法 血浆样品经含离子对试剂四丁基溴化铵的二氯甲烷萃取后 ,用 40℃氮气流吹干 ,残渣用流动相溶解后进行分析。流动相为甲醇∶0 0 9mol·L 1 磷酸二氢钾水溶液 (含四丁基溴化铵 6mmol·L 1 ) (4 5∶5 5 ) ,pH值 =7 2 5 ;固定相为Shim packVP ODS色谱柱 ;流速为 1.0mL·min 1 ;紫外检测波长 2 15nm ,室温 ,内标法定量。结果 线性范围为 1～ 3 0 0mg·L 1 ,最低检测浓度 0 0 5mg·L 1 ,平均回收率 96 44 % ,日内、日间精密度均 <5 0 % ,血浆在 -2 0℃下保存稳定。Beagle犬静脉注射亚硫酸氢钠穿心莲内酯后的药动学行为符合二室模型。结论 该检测方法准确、灵敏、简便 ,适用于亚硫酸氢钠穿心莲内酯血浆浓度的测定和药动学研究。亚硫酸氢钠穿心莲内酯在Beagle犬体内分布及消除较快。

亚硫酸氢钠穿心莲内酯有关物质测定的方法学研究

目的:建立高效液相色谱法,测定亚硫酸氢钠穿心莲内酯的有关物质。方法:采用DiamonsilC18色谱柱(250mm×4·6mm,5μm),甲醇-乙腈-0·02mol·L-1磷酸二氢钾溶液(5∶24∶75)为流动相,220nm为检测波长。结果:亚硫酸氢钠穿心莲内酯有关物质与主峰分离度大于1·5,最小检出量为4·0ng。结论:本方法专属性好,简便快捷,可用于亚硫酸氢钠穿心莲内酯的质量控制。

亚硫酸氢钠穿心莲内酯对小鼠和家兔的肾毒性作用

目的观察亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)的肾毒性作用。方法 30只ICR小鼠随机分为正常对照组、ASB150和1000mg.kg-1组,ASB组小鼠尾静脉iv给予ASB,每天1次,连续7d,正常对照组iv给予等体积生理盐水,检测体重、肾脏系数、血常规、血清尿素氮和肌酐浓度,观察肾脏组织病理变化等指标。18只新西兰家兔,随机分为对照组、ASB125和500mg.kg-1组,麻醉后单次经耳缘静脉iv给予ASB,导尿管法收集尿液并测定尿量及尿常规指标。结果与正常对照组比较,ASB1000mg.kg-1可使小鼠血清肌酐和尿素氮浓度分别从124±19和18±3升高至197±35和(35±10)mmol.L-1(P<0.05),并使外周血白细胞从(10.5±2.0)×109L-1升高至(13.7±3.4)×109L-1,血小板从(666±122)×109L-1降低至(451±207)×109L-1,淋巴细胞比例从(0.83±0.03)降低至(0.68±0.11)(P<0.05),7/10小鼠肾脏出现间质性肾炎,伴轻度纤维化,部分肾小管有蛋白,近曲小管浊肿;与正常对照组比较,ASB150mg.kg-1对小鼠上述指标无明显影响。ASB500mg.kg-1可引起家兔尿蛋白和酮体阳性检出率一过性增加,给药后120min总尿量明显增加(P<0.05);与正常对照组比较,ASB125mg.kg-1对家兔上述指标无明显影响。结论 ASB1000mg.kg-1和500mg.kg-1时分别对小鼠和家兔肾脏具有毒性作用。

亚硫酸氢钠穿心莲内酯对人肾小管上皮HK-2细胞的毒性作用(英文)

目的探讨亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)对人肾小管上皮细胞HK-2的细胞毒性作用。方法HK-2细胞在DMEM/F12培养液培养24 h后,在经ASB作用2 h前,分别加入N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)10 mmol·L-1、2-氨基-4(丁基磺酸亚氨)-丁酸(BSO)2 mmol·L-1及30 min前分别加入过氧化氢酶(CAT)1000 U·L-1、环孢素A(Cs A)50μmol·L-1,再经ASB作用24 h,MTT法检测细胞存活率;用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总ATP酶(T-ATP)活性;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS);Western蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶酶原3、Bcl-2、Bax和细胞色素c(Cyt c)蛋白的表达。结果 ASB呈浓度依赖性地抑制HK-2细胞增殖,作用24和48 h后IC50值分别为19.1±3.6和(11.6±3.9)g·L-1。ASB 20 g·L-1处理HK-2细胞24 h后,G2/M期细胞由对照组的(23.3±1.0)%增至(37.0±0.8)%(P<0.01)。与正常对照组相比,ASB组LDH漏出率和ROS水平明显增加,MMP呈下降趋势;与ASB 20 g·L-1组相比,加入还原剂NAC后,细胞存活率和MMP水平明显增加(P<0.05),LDH和ROS水平明显降低(P<0.05);加入Cs A后,细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH和细胞内ROS水平明显增加(P<0.05)。随着ASB浓度增加,HK-2细胞上清液中的MDA水平明显增加,GSH,SOD和T-ATP酶活性逐渐减弱;同时细胞内胱天蛋白酶原3、Bax和Cyt c蛋白表达升高。结论 ASB对HK-2细胞的毒性作用可能是通过干扰HK-2细胞线粒体能量代谢,改变细胞内氧化还原状态,耗竭细胞内GSH和SOD,导致细胞内ROS大量堆积,引发脂质过氧化作用,破坏细胞膜的通透性,导致Cyt c等凋亡因子从线粒体释放,进而引发细胞凋亡或坏死。

HPLC测定亚硫酸氢钠穿心莲内酯

目的:建立一种用 HPLC 测定亚硫酸氢钠穿心莲内酯的新方法。方法:采用 Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,甲醇-乙腈-0.02 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(5:24:75)为流动相,220 nm 为检测波长,流速1.0 mL·min^(-1),进样量10μL。结果:能将亚硫酸氢钠穿心莲内酯与其主要杂质分离,在100.4～1004μg·mL^(-1)浓度范围内,其峰面积与浓度线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=3)为100.2%,100.5%,99.6%;RSD 分别为0.49%,0.98%,0.49%。结论:该方法简便、快速、准确,可用于亚硫酸氢钠穿心莲内酯的检验。

穿心莲内酯及水溶性衍生物致HK-2细胞毒性筛选及亚硫酸氢钠穿心莲内酯相对毒性机制

目的观察和比较穿心莲内酯及其水溶性衍生物〔亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)、穿琥宁和炎琥宁〕的原料药对人肾小管上皮细胞HK-2的毒性作用,探讨ASB所致内质网应激作用机制。方法 MTT法检测分别给予4种药物作用后HK-2细胞存活率,计算半数抑制浓度(IC50)。ASB给药组采用Hoechst33342染色和流式细胞术检测细胞凋亡;检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;Western蛋白质印迹法检测免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)、增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和胱天蛋白酶4的表达。结果 4种药物在一定浓度下均能抑制HK-2细胞增殖,呈时间和浓度依赖性。药物作用24 h,穿心莲内酯IC50为30.6μmol·L-1,均比其他衍生物小,而穿琥宁和炎琥宁的IC50(分别为16.2和15.6 mmol·L-1)相差不大,ASB的IC50为29.4 mmol·L-1。在ASB(0,15,30和60 mmol·L-1)处理24 h后,细胞凋亡率上升,SOD活性下降,MDA含量上升,均呈现浓度依赖性。与对照组比较,8 h时,ASB(30和60 mmol·L-1)组CHOP表达水平增加(P<0.01),Bip和胱天蛋白酶4蛋白无显著变化。另外,24 h时,ASB(60 mmol·L-1)组Bip蛋白水平减少(P<0.05),ASB(30和60 mmol·L-1)组CHOP蛋白表达增加(P<0.01);活化的胱天蛋白酶4随ASB浓度升高表达增加(P<0.01)。结论穿心莲内酯及其水溶性衍生物对HK-2细胞具有一定毒性作用,内质网应激相关的CHOP和胱天蛋白酶4通路参与了ASB诱导的细胞凋亡。

亚硫酸氢钠穿心莲内酯的抗炎解热镇痛作用研究

目的:研究亚硫酸氢钠穿心莲内酯的抗炎、解热、镇痛作用。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀和醋酸所致小鼠毛细管通透性增高模型观察其抗炎作用,采用大肠杆菌诱发家兔发热模型观察其解热作用,采用热板法及扭体法观察其镇痛作用。结果:与对照组比较,亚硫酸氢钠穿心莲内酯160.0、80.0和40.0mg.kg-1可明显抑制二甲苯诱导小鼠耳肿胀;亚硫酸氢钠穿心莲内酯160.0、80.0和40.0mg.kg-1可明显抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性的增高。结论:亚硫酸氢钠穿心莲内酯具有一定抗炎、解热、镇痛作用。

亚硫酸氢钠穿心莲内酯和硫酸卡那霉素对HK-2细胞的毒性分析

目的比较亚硫酸氢钠穿心莲内酯和硫酸卡那霉素对HK-2细胞毒性作用的差异。方法通过倒置显微镜观察亚硫酸氢钠穿心莲内酯和硫酸卡那霉素作用后HK-2细胞形态的改变，应用噻唑蓝（M1Tr）比色法和流式细胞术法检测药物对HK-2细胞的形态、细胞周期、凋亡率、线粒体膜电位（MMP）和活性氧（ROS）的影响。结果亚硫酸氢钠穿心莲内酯对HK-2细胞作用后24h和48h的‰值为（19．12±3．55）和（n．56±3．881）玑；硫酸卡那霉素对HK-2细胞的作用后24h和48h的IC50值为（119．35±6．22）和（120．25±22．09）g／L，随着硫酸卡那霉素作用的时间增加，IC50值变化不显著。西药对HK-2细胞的形态、细胞周期、凋亡率、MMP和ROS的影响不同．联合用药对细胞的损伤作用更大。结论亚硫酸氢钠穿心莲酯和卡那霉素可能以不同的途径对HK-2细胞产生毒性，联合作用可加重对HK-2细胞毒性作用。

注射用亚硫酸氢钠穿心莲内酯与2种输液配伍的稳定性及溶血性研究

目的考察注射用亚硫酸氢钠穿心莲内酯分别与5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液配伍的稳定性及溶血性。方法采用高效液相色谱法试验。结果亚硫酸氢钠穿心莲内酯分别与5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液配伍后,在强光(4 500±500)Lx、(40±2)℃两种条件下,24 h内,主药含量和降解产物均无明显变化。注射用亚硫酸氢钠穿心莲内酯分别与2种输液配伍后无溶血现象和凝集现象。结论亚硫酸氢钠穿心莲内酯与2种输液配伍24 h内稳定,临床上可配伍使用。

亚硫酸氢钠穿心莲内酯的一般药埋学研究

目的观察亚硫酸氢钠穿心莲内酯对动物的一般药理作用。方法用抖笼法、爬杆法、游泳耗竭法及麻醉家犬静脉滴注等方法,观察亚硫酸氢钠穿心莲内酯对动物中枢神经系统、心血管及呼吸系统的影响。结果给小鼠静脉推注亚硫酸氢钠穿心莲内酯250、500mg/kg后,小鼠的自发活动明显减少。爬杆试验等级数和游泳耗竭时间与对照组比较无明显差异。小鼠静脉推注亚硫酸氢钠穿心莲内酯后加腹腔注射戊巴比妥钠(40mg/kg),500mg/kg组可缩短戊巴比妥钠入睡时间,250、500mg/kg组可延长睡眠持续时间。麻醉家犬静脉滴注亚硫酸氢钠穿心莲内酯后,对血压、心率、心律及心电图各波形未见有临床意义的改变,呼吸频率和深度也未见明显影响。结论亚硫酸氢钠穿心莲内酯对小鼠中枢神经系统具有明显的镇静作用,对小鼠的协调运动无明显影响,与戊巴比妥钠催眠作用有协同作用,麻醉家犬静脉滴注亚硫酸氢钠穿心莲内酯对心血管及呼吸系统均无明显影响。

UPLC测定莲必治注射液中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量

目的建立检测莲必治注射液中亚硫酸氢钠穿心莲内酯含量的方法。方法采用超高效液相色谱(UPLC)法,色谱柱:Acquity UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm),检测波长:220 nm,进样量:1μl,流动相为甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾水溶液(15∶85),流速1.0 ml/min,柱温为40℃。结果亚硫酸氢钠穿心莲内酯在0.10~0.26 mg/ml(R2=0.998)范围内,呈良好线性关系;亚硫酸氢钠穿心莲内酯的加样回收率是99.39%(RSD 0.28%,n=9)。结论该方法专属性强,快速稳定,能够准确测定莲必治注射液中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量,可为莲必治注射液的质量控制提供依据。

亚硫酸氢钠穿心莲内酯结构研究

亚硫酸氢钠穿心莲内酯是我国药典(1977年版)收我的一种抗菌消炎药物,结构为(Ⅰ),作者在研究穿心莲二萜内酯过程中采用双共振和溶剂效应技术,对其中四种已知二萜内酯及其衍生物的NMR谱进行了一系列实验研究,从中发现亚硫酸氢钠穿心莲内酯的结构与(Ⅰ)不完全相符,通过进一步的光谱和化学研究、确认在亚硫酸氢钠加成后随按发生14位羟基的脱水,故结构(Ⅰ)应修正为(Ⅸ)。

近20年穿心莲内酯药理作用研究进展

穿心莲为中国传统中药材,应用历史悠久,对机体发挥了重要的调节作用,具有抗炎、抗肿瘤、免疫调节、抗病毒、心血管保护等多种药理活性,可作为治疗呼吸道感染、心脑血管疾病和肿瘤等病证的新型药物。近年来,随着对穿心莲属药用植物化学成分和药理作用的深入研究,以及新型药物制剂的研发,穿心莲内酯已成为国内外学者广泛关注的热点,其药理活性作用广泛。该文概述了近20年来国内外关于穿心莲内酯的药理作用研究进展,分别从传统的抗病毒、抗菌、抗炎、抗肿瘤、心血管保护和神经保护等方面作用,以及新开发的防治糖尿病、抗骨质疏松、避孕、减肥减脂等方面药理作用进行阐述,随着对其药理作用广泛开展讨论,将对穿心莲内酯类药物的研发起到积极的推动作用,为临床实际应用提供确切的理论支持,开阔了诊疗思路,并提出了进一步研究穿心莲的临床意义,希望扩展对传统中药材穿心莲资源的开发利用,为我国传统药用植物提取物穿心莲内酯的研究与应用奠定基础。

穿心莲内酯调节Nrg-1/ErbB4信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元凋亡的影响

目的探讨穿心莲内酯(Andro)调节神经调节蛋白1(Nrg-1)/表皮生长因子受体4(ErbB4)信号通路对缺血性脑卒中(IS)大鼠神经元凋亡的影响。方法采用线栓法建立IS大鼠模型。将60只造模成功的大鼠随机分为模型组(Model组,生理盐水)、Andro低剂量组(Andro-L组,50 mg/kg)、Andro高剂量组(Andro-H组,100 mg/kg)和Andro-H+Dacomitinib组(100 mg/kg Andro+7.5 mg/kg Nrg-1/ErbB4信号通路抑制剂Dacomitinib),每组15只;另取15只大鼠为Sham组(生理盐水)。灌胃给药/生理盐水,每天1次,连续7 d。给药结束后,评估大鼠神经功能;检测大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-10、神经生长因子(NGF)水平;测定大鼠脑梗死面积;观察大鼠海马组织病理变化;检测大鼠海马神经元凋亡率和海马组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平及基质金属蛋白酶9(MMP-9)、剪切型胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)、Nrg-1蛋白表达水平和磷酸化ErbB4(p-ErbB4)/ErbB4比值。结果与Model组比较,Andro-L组、Andro-H组大鼠Zea-Longa评分,逃避潜伏期,血清中LDH、TNF-α、IL-1β水平,脑梗死面积百分比,海马神经元凋亡率,海马组织中MDA水平和MMP-9、cleaved-caspase-3蛋白表达水平均显著降低/缩短(P<0.05);滞留时间、穿越平台次数,血清中IL-10、NGF水平,海马组织中CAT、SOD水平和Nrg-1蛋白表达水平、p-ErbB4/ErbB4比值均显著延长/增加/升高(P<0.05);海马神经组织结构损伤程度明显降低。Dacomitinib可减弱高剂量Andro对IS大鼠神经元损伤的改善作用(P<0.05)。结论Andro可减轻IS大鼠炎症反应、氧化应激和海马组织损伤,改善神经功能;其作用机制可能与激活Nrg-1/ErbB4信号通路有关。

穿心莲内酯对胰岛素抵抗大鼠的影响及可能作用机制分析

目的 探讨穿心莲内酯对胰岛素抵抗大鼠的影响及可能作用机制。方法 获得SPF级健康成年Wistar大鼠48只,随机选择36只大鼠经高脂高糖饲料喂养建立实验性Wistar大鼠IR模型,按照随机数字分配法分为空白对照模型组(HFD组)、穿心莲内酯高剂量组(High组)和穿心莲内酯低剂量组(Low组),选择12只大鼠接受普通饲料喂养作为正常对照组(NC组),High组大鼠予以经腹腔注射穿心莲内酯200 mg/(kg·d),Low组大鼠予以穿心莲内酯腹腔注射100 mg/(kg·d),HFD组以及NC组仅予以等量生理盐水腹腔注射,连续14 d。应用葡萄糖氧化酶法对空腹血糖值(FBG)水平进行监测,应用ELISA法检测空腹胰岛素(Fasting insulin, FINS),计算稳态模型评估胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance, HOMA-IR);油红O染色制片检测肝脏的病理变化;应用联苯三酚自氧化法对超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力,应用硫代巴比妥酸法对丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平进行监测;免疫组化法检测大鼠肝脏组织内核糖体蛋白S6激酶(Ribosomal protein S6 kinase, S6K1)及p-胰岛素受体底物-1(p-insulin receptor substrate-1,p-IRS-1)(Tyr632)蛋白表达水平,Westernblotting法检测肝脏组织内S6K1及p-IRS-1(Tyr632)表达水平。应用SPSS 23.0软件包进行分析。结果 相比NC组比较,HFD组、High组、Low组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR水平明显升高(P<0.05);与HFD组相比,其余3组FBG、FINS、HOMA-IR水平较低(P<0.05);与穿心莲内酯Low组相比,High组FBG、FINS、HOMA-IR水平较低(P<0.05)。相比NC组,HFD组光密度平均值增加(P<0.05);相比HFD组,穿心莲内酯High组与Low组脂滴面积/肌纤维总面积、光密度平均值均下降(P<0.05);与穿心莲内酯Low组相比,High组脂滴面积/肌纤维总面积、光密度平均值较低(P<0.05)。与NC组相比,HFD组SOD活性与MDA含量增加(P<0.05);相比HFD组,穿心莲内酯High组与Low组SOD活性与MDA含量均下降(P<0.05);与穿心莲内酯Low组相比,High组SOD活性与MDA含量较低(P<0.05)。与NC组相比,HFD组FAT/CD36蛋白相对表达量增加,CPT-1蛋白相对表达量下降(P<0.05);相比HFD组,穿心莲内酯High组与Low组FAT/CD36蛋白相对表达量下降,CPT-1蛋白相对表达量增加(P<0.05);与穿心莲内酯Low组相比,High组FAT/CD36蛋白相对表达量较低,CPT-1蛋白相对表达量较高(P<0.05)。与NC组相比,HFD组FAT/CD36mRNA相对表达量增加,CPT-1mRNA相对表达量降低(P<0.05);相比HFD组,穿心莲内酯High组与Low组FAT/CD36mRNA相对表达量下降,CPT-1mRNA相对表达量增加(P<0.05);与穿心莲内酯Low组相比,High组FAT/CD36mRNA相对表达量较低,CPT-1mRNA相对表达量较高(P<0.05)。结论 穿心莲内酯能够改善胰岛素抵抗大鼠胰岛素抵抗状态,显著改善IR大鼠的IR状态,其治疗机制与改善氧化应激状态,与下调S6K1的表达及提升IRS-1酪氨酸磷酸化水平具有密切相关性。

基于转录组学探讨穿心莲内酯对铜绿假单胞菌的抗菌增效机制

目的:基于前期研究结果,探索穿心莲内酯(Andrographolide,Andr)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的抗菌增效作用机制。方法:利用illunima二代测序平台,比较PA标准菌株ATCC27853在有无Andr干预下的细菌转录组改变,采用基因组比对、差异鉴定、通路和表型分析确定核心靶标;考察在不同浓度穿心莲内酯(100、50、25μg·mL^(-1))干预下ATCC27853绿脓毒素(Pyocyanin,PYO)的分泌量;结合Andr可能的作用机制,RT-q PCR检测其对PA代谢过程中关键基因phz M、phz H、phz S和pvd I表达的影响;尾静脉注射临床分离耐药PA(PA2019-32)构建小鼠急性细菌感染模型,分别给予左氧氟沙星(阳性对照组)、左氧氟沙星联合Andr(联合用药组),观察记录各组小鼠的存活情况,连续观察5 d,绘制生存曲线,测评Andr联合抗菌药物的体内抗感染保护作用。结果:转录组学共组装对比出289个显著差异基因,其中145个基因显著上调,144个基因显著下调。差异基因的GO富集分析显示,差异基因主要涉及细胞代谢过程、细胞组成及“铁离子结合”;KEGG分析差异基因在42条通路中高度富集,主要涉及各类抗菌药物抗性通路,能量代谢相关通路以及毒力因子相关通路,其中色氨酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、泛醌和其他萜类-泛醌、辅助因子的生物合成、β-内酰胺抗药性、离子抗菌肽(CAMP)抗药性显著下调(pvalue<0.01~0.05)。RT-q PCR检测结果显示,Andr对pvd I无影响,但显著降低phz H和phz S的表达,同时phz M的表达升高,影响铜绿假单胞菌PYO的生物合成过程。验证实验证实Andr降低了PYO的生成,并且体内感染模型实验表明Andr与左氧氟沙星联合使用可显著提高感染小鼠的存活率。结论:通过干扰PYO的合成,调控Fe转运,增强CAMPs活性,可能是Andr最终实现“减毒”和“增效”的重要原因。

穿心莲内酯靶向Akt信号干预HIV感染T细胞的效率研究

目的探讨穿心莲内酯靶向Akt信号干预人类免疫缺陷病毒(HIV)感染T细胞的效率。方法培养Jurkat T细胞,用WST-1试剂检测穿心莲内酯干预对Jurkat T细胞活性的影响。将Jurkat T细胞分为空白对照组、穿心莲内酯组、LY294002组(PI3K抑制剂)及穿心莲内酯联合LY294002组。各组药物分别干预24 h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞PI3K、Akt mRNA相对表达量,采用Western blotting检测各组细胞p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量。制备HIV假病毒,用假病毒感染各组细胞,萤光素酶系统检测假病毒感染Jurkat T细胞的效率。结果WST-1试剂检测结果显示,随着穿心莲内酯浓度增加,Jurkat T细胞活力降低(P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,穿心莲内酯降低Jurkat T细胞PI3K及其下游Akt mRNA相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量(P<0.05)。HIV假病毒感染实验结果显示,穿心莲内酯降低HIV假病毒感染Jurkat T细胞的效率,联合组比单独组的抑制效果更好(P<0.05)。结论穿心莲内酯可能通过PI3K降低其下游Akt的活化,从而减少HIV假病毒在Jurkat T细胞间的传播及进入细胞的机会,降低其感染Jurkat T细胞的概率。

穿心莲内酯调节HMGB1/RAGE信号通路对糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经功能损伤的影响

目的探讨穿心莲内酯调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠坐骨神经功能损伤的影响。方法将84只大鼠随机分为对照组(生理盐水)、DPN组(生理盐水)、穿心莲内酯低剂量组(0.833 mg/kg)、穿心莲内酯高剂量组(3.332 mg/kg)、硫辛酸组(阳性对照,0.1 g/kg)、重组大鼠HMGB1蛋白(rHMGB1,8μg/kg)组、穿心莲内酯高剂量+rHMGB1组,每组12只。除对照组外,其余各组大鼠均采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素的方式构建DPN模型。造模成功24 h后,进行给药处理,每天1次,持续8周。给药结束后,检测大鼠空腹血糖、机械痛阈值、热痛阈值、坐骨神经传导速度的变化;观察大鼠坐骨神经病理变化;检测大鼠坐骨神经中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;检测大鼠坐骨神经中HMGB1、RAGE蛋白表达水平和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白磷酸化水平。结果与对照组比较,DPN组大鼠坐骨神经病理损伤严重,空腹血糖、热痛阈值、MDA含量及HMGB1、RAGE蛋白表达水平和NF-κB p65蛋白磷酸化水平均显著升高(P<0.05),机械痛阈值、感觉神经传导速度、运动神经传导速度、SOD活性显著降低/减慢(P<0.05);与DPN组比较,穿心莲内酯低、高剂量组和硫辛酸组大鼠上述指标均显著改善(P<0.05),rHMGB1组对应指标变化趋势与上述3个给药组相反(P<0.05);并且,rHMGB1可减弱高剂量穿心莲内酯对DPN大鼠血糖的降低作用及坐骨神经氧化应激损伤的改善作用(P<0.05)。结论穿心莲内酯可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路来降低血糖、抑制氧化应激,进而改善DPN大鼠坐骨神经损伤。