铁蛋白在兔肾近端小管中的穿细胞运输

为了确定蛋白质的穿细胞转运途径，用体内显微注射技术，将阳离子铁蛋白直接注入家兔肾近端小管腔内，观察肾对蛋白质的摄取与转运。结果表明：注入铁蛋白后１５ｍｉｎ，蛋白质分子主要聚集在细胞顶部的胞吞小泡、胞吞大泡、致密顶端小管和溶酶体中。随着注入铁蛋白后时间的增加，这些蛋白质被转运到细胞底部胞质。此外，还可见一种与致密顶端小管不同的结构，直径小于０．０５μｍ，呈细管泡状，也含有铁蛋白颗粒，最初位于顶部胞质的铁蛋白运载大泡附近，可与该大泡融合，也可散在于胞质中，以后主要分布在细胞底部的胞质中。铁蛋白颗粒成簇分布在细胞侧基部间隙中，随着实验时间延长，该现象明显增加。

FRET技术研究PEG-PCL胶束跨MDCK细胞单层转运的完整性

本文旨在研究聚乙二醇-聚ε-己内酯[poly(ethylene glycol)-co-poly(ε-caprolactone),PEG-PCL]胶束跨犬肾极性上皮细胞(madin-darby canine kidney,MDCK)单层转运后的完整性。通过化学键合的方法将异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate isomer I,FITC)连接于PEG-PCL上,制备荧光标记的载体材料PEG-PCLFITC,并采用荧光光谱法进行鉴定。采用薄膜水化法制备两种荧光标记的胶束:一种是同时物理包载荧光共振能量转移(F?rster resonance energy transfer,FRET)荧光对3,3'-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate(DiO)与1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate(Di I)的胶束(DiO-DiI-M);另一种是含有部分PEG-PCL-FITC载体材料并物理包载Di I的胶束(FITC-DiI-M)。采用动态光散射法测定胶束的粒径,荧光光谱法测定胶束在孵育介质中的稳定性。采用激光共聚焦扫描显微镜和FRET技术研究这两种荧光标记的胶束跨MDCK极性上皮细胞单层的完整性。结果表明,FITC与PEG-PCL被成功连接。DiO-DiI-M与FITC-DiI-M的粒径大小一致,均约为30 nm,多分散度良好,且两种胶束在4 h内可在孵育介质中以稳定形式存在,基本无释放。通过比较Transwell层和接收层的FRET效率和皮尔森共定位系数(Person’s coefficient)可知,1 h时,两种胶束的FRET效率与Person’s系数在Transwell层和接收层间基本不变,但4 h时,接收层FRET效率与Person’s系数明显下降,同时FITC-DiI-M下降的幅度大于DiO-DiI-M,说明1 h时胶束基本保持完整且能以完整形式从极性上皮细胞基底侧排出并被接收室中的细胞摄取,4 h时部分胶束已在与细胞单层相互作用的过程中被破坏,以完整形式跨膜的比例有所下降。

载香豆素6的PEG-PCL胶束跨MDCK极性上皮细胞的转运过程

本课题对聚乙二醇聚ε-己内酯[poly(ethyl ethylene phosphate)-co-poly(ε-caprolactone),PEG-PCL]胶束跨犬肾极性上皮细胞(Madin-Darby Canine Kidney,MDCK)的转运过程进行了研究。采用薄膜水化法制备载香豆素6(coumarin 6,C6)的PEG-PCL胶束,并采用激光粒度测定仪测定其粒径,芘荧光探针法测定其临界胶束浓度(critical micelle concentration,CMC)。通过透射电镜、激光共聚焦扫描显微镜和荧光能量共振转移等方法研究了载C6的PEG-PCL胶束跨MDCK极性上皮细胞的转运过程。结果表明,PEG-PCL胶束的粒径约为30 nm,CMC为1.01μg·mL 1。PEG-PCL胶束以完整的形式被内吞进入细胞,经过细胞内转运过程将疏水性的模型药物C6从极性上皮细胞的基底侧排出,而PEG-PCL胶束本身很难以完整的形式跨膜。PEG-PCL胶束转运C6的过程是穿细胞途径,而非打开细胞紧密连接的细胞旁路途径。