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TAT介导的金属硫蛋白的穿膜效应及对细胞氧化损伤的修复作用 被引量:1
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作者 马文丽 和柳芝 +2 位作者 杨月 李玉英 王兰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1266-1272,共7页
人类免疫缺陷病毒反式激活因子(human immunodeficiency virus transactivator,TAT)蛋白质转导肽是HIV-1编码的反式转录激活因子,富含碱性氨基酸序列,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,例如细胞质膜和血脑屏障等。金属... 人类免疫缺陷病毒反式激活因子(human immunodeficiency virus transactivator,TAT)蛋白质转导肽是HIV-1编码的反式转录激活因子,富含碱性氨基酸序列,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,例如细胞质膜和血脑屏障等。金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质,在维持生物体内金属含量动态平衡、重金属解毒以及防御氧化应激中均发挥重要作用。本研究通过基因重组技术制备由TAT介导的能跨膜进入细胞的重组融合蛋白质TAT-MT,使其进入细胞,高效发挥抗氧化损伤效应。通过体外抗氧化实验测定TAT-MT的体外羟自由基清除率及总抗氧化能力;免疫荧光技术检测其穿膜活性;MTT法研究其对H2O2诱导的293T细胞氧化损伤的修复作用。结果显示,通过长引物PCR技术在目的基因5′-端加入TAT序列,成功构建原核表达载体pET28a-TAT-MT;通过TAT标签的引入显著增加了MT的可溶性表达;进一步通过表达条件的优化成功获得了TAT-MT的高效可溶性表达;采用亲和层析方法对重组蛋白质进行了分离纯化;免疫荧光检测显示,重组蛋白质可以高效进入细胞;体外抗氧化结果显示,当TAT-MT浓度为100μmol/L时,羟自由基清除率达到94.87%±5.18%,说明TAT-MT具有较强的清除羟自由基的能力;MTT结果表明,重组蛋白质对H2O2诱导的293T细胞氧化损伤具有显著的(P<0.05)修复作用。本研究为MT的规模化制备及进一步开发其在生物医药、食品保健及化妆品领域的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 TAT蛋白质转导肽 金属硫蛋白 融合表达 穿膜效应 氧化损伤修复作用
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pET15b-GFP-HCTP、pETl5b-Apoptin-HCTP原核表达载体的构建、表达及其意义
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作者 钟春燕 柳长柏 《中国药理通讯》 2007年第3期30-30,共1页
目的:HCTP(HPV tansformed cervical cancer cell targeting penetratin HCTP)是新近发现的一种能特异性识别并穿透HPV转化宫颈癌细胞胞膜的短肽。构建HCTP与绿色荧光蛋白(GFP)、凋亡素(Apoptin)的重组表达载体,原核系统表达并... 目的:HCTP(HPV tansformed cervical cancer cell targeting penetratin HCTP)是新近发现的一种能特异性识别并穿透HPV转化宫颈癌细胞胞膜的短肽。构建HCTP与绿色荧光蛋白(GFP)、凋亡素(Apoptin)的重组表达载体,原核系统表达并纯化出GFP-HCTP、Apoptin-HCTP融合蛋白,研究HCTP的特异性靶向穿膜效应。方法:根据美国NIH基因库收藏的Apoptin基因序列,利用多重PCR技术拼接出Apoptin cDNA、运用PCR方法以pEGFP-C1质粒为模版扩增获得GFP cDNA片段,将Apoptin及GFP cDNA分别与退火形成的HCTP双链连接并克隆至原核表达载体pETl5b,成功构建pETl5b-GFP-HCTP、pETl5b-Apoptin-HCTP重组表达载体。DNA测序证实重组构建无误,用上述两个重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3).以IPTG诱导融合蛋白表达并用Ni-NTA His-Bind Resin蛋白纯化试剂纯化,获得可溶性基因重组融合蛋白GFP-HCTP和Apoptin-HCTP。运用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定目的蛋白。结果:成功构建pETl5b-GFP-HCTP、pETl5b-Apoptin-HCTP原核表达载体,经表达、纯化制备了GFP-HCTP和Apoptin-HCTP基因重组融合蛋白。结论:我们使用基因工程技术,经原核表达系统表达制备的GFP-HCTP和Apoptin-HCTP融合蛋白将为进一步研究HCTP的特异穿膜效应以及探讨HCTP作为宫颈癌治疗药物的靶向运送载体提供实验基础。 展开更多
关键词 HCTP 宫颈癌 穿膜效应 融合蛋白表达
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肿瘤电化学治疗的研究现状 被引量:3
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作者 杨孝军 胡丽娜 《国外医学(肿瘤学分册)》 2004年第3期198-200,共3页
电脉冲介导的电化学治疗是一门多学科的生物医学工程学技术 ,已有 2 0余年历史 ,已有资料证实其治癌机制是电脉冲的膜穿效应促使非渗透性化疗药物进入癌细胞内 ,近年对其治癌机制、“时间窗”效应及临床综合治疗的研究已有长足进展 ,电... 电脉冲介导的电化学治疗是一门多学科的生物医学工程学技术 ,已有 2 0余年历史 ,已有资料证实其治癌机制是电脉冲的膜穿效应促使非渗透性化疗药物进入癌细胞内 ,近年对其治癌机制、“时间窗”效应及临床综合治疗的研究已有长足进展 ,电化学疗法已成为癌症综合治疗的有效补充手段之一。 展开更多
关键词 肿瘤 电化学治疗 研究现状 电脉冲 穿效应 多药耐药性
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PAANa-induced ductile SEI of bare micro-sized FeS enables high sodium-ion storage performance 被引量:1
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作者 Linjie Chen Keming Song +5 位作者 Juan Shi Jiyu Zhang Liwei Mi Weihua Chen Chuntai Liu Changyu Shen 《Science China Materials》 SCIE EI CSCD 2021年第1期105-114,共10页
High-capacity metal chalcogenides often suffer from low initial coulombic efficiency(ICE)and serious capacity fading owing to the shuttle effect and volumetric expansion.Various carbon-coating and fixing methods were ... High-capacity metal chalcogenides often suffer from low initial coulombic efficiency(ICE)and serious capacity fading owing to the shuttle effect and volumetric expansion.Various carbon-coating and fixing methods were used to improve the above-mentioned performance.However,the synthesis processes of them are complex and time-consuming,limiting their engineering applications.Herein,polar polymer binder sodium polyacrylate(PAANa)is selected as an example to solve the problems of metal chalcogenides(bare micro-sized FeS)without any modification of the active materials.The special function of the polymer binder in the interface between the active material particles and the electrolytes demonstrates that a PAANa-induced network structure on the surface of ion sulfide microparticles not only buffers the mechanical stress of particles during discharging-charging,but also participates in forming a ductile solid electrolyte interphase(SEI)with high interfacial ion transportation and enhanced ICE.The cyclic stability and rate performance can be simultaneously improved.This work not only provides a new understanding of the binder on electrode,but also introduces a new way to improve the performance of batteries. 展开更多
关键词 sodium-ion batteries solid electrolyte interphase polymer binder metal sulfides initial coulombic efficiency
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