突变型胸苷激酶促进前体药物对小鼠T淋巴细胞的杀伤作用

目的研制表达单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV1-TK)及其突变体HSV1-SR39TK的T淋巴细胞,探讨给予更昔洛韦(GCV)和阿昔洛韦(ACV)后T细胞的生存率。方法采用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体三质粒系统共转染来源于人胚肾的293T细胞,表达HSV1-SR39TK和HSV1-TK的T细胞与不同浓度的GCV和ACV培养3d后,应用CCK-8法测定T细胞存活率。结果包装后慢病毒载体的滴度超过106IU/ml、ACV/GCV浓度在1～10μmol/L时,SR39TK+T细胞的存活率下降明显,ACV组T细胞存活率从(98.4±2.7)%下降至(49.9±5.9)%,GCV组从(97.9±2.7)%下降至(33.7±5.3)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。当ACV/GCV浓度进一步升高时,T细胞活率下降不明显。TK+T细胞对GCV敏感,T细胞活率从(97.9±2.7)%下降至(38.4±5.5)%,差异有统计学意义(P<0.05);但是对ACV不敏感,T细胞存活率从(98.4±2.7)%下降至(73.8±7.4)%,差异无统计学意义(P>0.05)。IC50值测定结果显示,SR39TK+T细胞对GCV和ACV的敏感性高于TK+T细胞。结论表达HSV1-SR39TK的T细胞对GCV和ACV的敏感性均较HSV1-TK高。突变型HSV1-TK在体外可促进前体药物介导的杀伤小鼠T细胞的作用。

全反式维甲酸与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对胶质瘤的协同杀伤作用

背景与目的:细胞间缝隙连接通讯(gapjunctionalintercellularcommunication,GJIC)是介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplixvirusthymidinekinase,HSV-tk)基因治疗中旁观者效应的重要机制。全反式维甲酸(all-trans-retinoticacid,ATRA)可能通过上调胶质瘤细胞GJIC和抑制肿瘤细胞生长的双重作用,促进HSV-tk基因治疗的疗效。本研究的目的在于证实HSV-tk和ATRA联合应用对胶质瘤细胞的协同杀伤作用。方法:分别以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L3种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,并研究ATRA对C6胶质瘤细胞分化、增殖、GJIC及connexin43(Cx43)基因转录等方面的影响。将C6细胞与稳定表达HSV-tk基因的C6tk细胞按不同比例混合,分别在含GCV和不同浓度ATRA或仅含GCV的培养基中培养,并于药物作用7天后用MTT法检测旁观者效应。结果:经3种浓度的ATRA作用后,C6胶质瘤细胞均显示出细胞分化的形态学特征。C6细胞的增殖也明显受到ATRA的抑制,绝大多数的活细胞都静止于G1期,100μmol/LATRA对C6细胞增殖的抑制尤其明显,并诱导细胞凋亡。经3种浓度的ATRA分别作用后,C6细胞的GJIC也明显提高,而Cx43基因的转录未受明显影响。旁观者效应实验的结果显示,3种浓度的ATRA均可以明显增强旁观者效应。

白细胞介素18、单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因联合修饰骨髓间充质干细胞治疗脑胶质瘤

目的了解骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(HSV-tk)和白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)后在荷瘤大鼠体内的治疗作用。方法提取1周龄大鼠骨髓培养大鼠骨髓间充质干细胞。骨髓间充质干细胞转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因(BMSCs/tk)或白细胞介素18(BMSCs/IL-18)或联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因、白细胞介素18(BMSCs/tk/IL-18),而后进行体内外试验检测其抗肿瘤作用。检测荷瘤鼠脾脏淋巴细胞免疫活性,采用TUNEL方法检测胶质瘤内的凋亡细胞,抗-CD34染色检测微血管密度(MVD),检测淋巴细胞的浸润,记录试验大鼠的生存期。结果骨髓间充质干细胞可稳定转染IL-18及tk基因,BMSCs/tk和BMSCs/IL-18/tk均显示了明显的旁观者效应,荷瘤鼠移植BMSCs/IL-18或BMSCs/IL-18/tk后,血清白细胞介素2和干扰素-γ浓度明显增高,并且接受移植的荷瘤鼠再次受到C6细胞冲击后可诱导快速的抗肿瘤免疫反应。微血管密度检测显示,BMSCs/IL-18(4.50±2.19)、BMSCs/tk/IL-18(3.65±2.13)与对照组(7.15±2.11)、PBS组(7.55±1.64)、BMSCs组(7.80±2.28)、BMSCs/tk组(7.65±1.84)比较有明显低的微血管密度(P<0.05),通过TUNEL检测、浸润淋巴细胞计数、细胞因子浓度及荷瘤鼠生存期比较,BMSCs/IL-18/tk比BMSCs/IL-18或BMSCs/tk显示了更加明显的抗肿瘤作用,BMSCs/IL-18/tk组生存期明显延长。结论联合转染单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因和白细胞介素18的骨髓间充质干细胞显示了明显的抗恶性胶质瘤作用,骨髓间充质干细胞可能成为一种理想的治疗颅内胶质瘤的基因治疗载体。

全反式维甲酸增强超声微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶自杀基因治疗荷肝癌裸鼠的效果

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否提高微泡包裹的单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)自杀基因对肝癌的体内治疗作用。方法用人肝癌SMMC-7721细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,先检测不同剂量ATRA的抗肿瘤效应;再用ATRA联合基因治疗,实验分4组:磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组,各组测量肿瘤体积,计算抑瘤率,Western blot检测输注的目的基因质粒的表达,HE染色行病理学观察,免疫组化法检测连接蛋白Cx32的表达。结果 ATRA在1 mg/kg下无抗肝癌作用,但≥4 mg/kg即具有明显抗肝癌效应;抑瘤率在磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组、联合治疗组分别为0、(7.46±7.25)%、(37.65±3.87)%、(59.04±3.08)%,联合治疗组分别与磷酸盐缓冲液组、ATRA组、HSV-TK组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HE结果显示:采用ATRA联合基因治疗后,肿瘤坏死细胞明显较对照组多,免疫组化结果显示:ATRA处理过的组织中,Cx32蛋白表达增加,且以胞膜表达为主。结论 ATRA具有抗肝癌作用;ATRA能增强超声微泡包裹的HSV-TK自杀基因杀伤肝癌的效果,其可能机制与ATRA促进了Cx32蛋白的正常表达有关。

腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤的初步观察

目的应用腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶(ADV-TK)/更昔洛韦(GCV)系统联合光动力疗法对口腔恶性肿瘤复发患者进行治疗,探讨此法治疗口腔恶性肿瘤的临床效果。方法选取10名口腔不同部位的恶性肿瘤复发患者,用光敏剂——血卟啉衍生物(HPD)静脉给药,选择相应激光输出功率定时照射,以ADV-TK基因行瘤体及周边注射,经GCV静脉输入治疗后,通过影像学及瘤体血流动力学分析进行临床疗效评估。结果经联合法治疗后,患者肿瘤明显缩小(甚至完全消失),瘤体内血流量降低,影像结果对比改变明显,治疗效果理想。结论将ADV-TK/GCV系统联合光动力治疗口腔恶性肿瘤具有显著的抗肿瘤效应,具备副作用轻微、临床安全性高的特点,为系统性治疗相关肿瘤提供了一种安全可靠的治疗手段。

白细胞介素-2基因与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因联合治疗小鼠头颈鳞状细胞癌的研究

目的 观察白细胞介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )基因与单纯疱疹病毒胸苷激酶 (herpessimplexvirusthymidinekinase ,HSV TK)基因联合治疗小鼠头颈鳞状细胞癌的疗效。方法 建立小鼠头颈鳞状细胞癌动物模型后在荷瘤部位分别注射表达小鼠IL 2基因的重组腺病毒(recombinantadenovirus,Ad)和表达HSV TK基因的重组腺病毒AdHSV TK及联合注射组 ,对照组分别注射不带目的基因的腺病毒或磷酸盐缓冲液 (phosphaticbufferedsolution ,PBS)。对注射有AdHSV TK基因组和联合治疗组每日腹腔注射抗病毒药物更西罗韦 (ganciclovir,GCV) 2 5mg/kg体重 ,每日 2次连续 7d。观察肿瘤大小变化并检测脾脏自然杀伤细胞和颈淋巴结细胞毒性T淋巴细胞的活性 ,探讨其抗肿瘤机制。结果 AdIL 2和AdHSV TK联合治疗组 ,肿瘤生长明显受抑制 ,疗效显著优于单独治疗组和对照组 (P <0 0 5 ) ,在注射有AdIL 2基因的治疗组中 ,IL 2蛋白水平明显升高 ,自然杀伤细胞活性和细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性增强 ,肿瘤组织中可见大片坏死 ,并含有大量的CD+ 4 、CD+ 8淋巴细胞浸润。结论 AdIL 2基因治疗可提高肿瘤局部和全身的抗肿瘤免疫应答 ,能加强自杀基因AdHSV TK的抗肿瘤效果 ,两者联合应用能显著抑制小鼠头颈鳞状细胞癌的生长。

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因的扩增、克隆和测序

目的：对单纯疱疹Ⅰ型胸苷激酶基因扩增、克隆和测序．方法：从单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１）１７ｓｙｎ＋株感染的ＢＨＫ２１细胞上清液中提取ＨＳＶ－１基因组ＤＮＡ，以此为模板，用ＰＣＲ方法扩增胸苷激酶（ＴＫ）．将扩增的片段克隆入载体ｐＵＣ１８中，并进行测序．结果：除终止码外，ＨＳＶ－１ＴＫ基因全部编码区为１１２８ｂｐ，编码３７６个氨基酸，其中含１２个蛋氨酸，４个半胱氨酸．ＴＫ的第２４９和２５０位氨基酸残基分别为Ｌｅｕ和Ｇｌｎ，其相应密码子为ＣＴＧ，ＧＡＧ，构成１个ＰｓｔＩ位点，第３１３和３１４氨基酸残基分别为Ａｓｐ和Ｖａｌ，其相应密码子为ＧＡＣ和ＧＴＣ，构成另一个ＰｓｔＩ位点．

单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因在大肠杆菌中的融合表达

用ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒Ｉ 型胸苷激酶（ ＨＳＶ１ ＴＫ） 基因的ｐ ＵＣ１８／ＴＫ 质粒，将切出的ＴＫ 基因片段克隆入原核表达载体ｐ ＷＲ４５０１ 中，构建成ＨＳＶ１ ＴＫ 基因重组表达质粒ｐ ＷＲ４５０１／ＴＫ。以ＨＳＶ１ ＴＫ 特异性引物ＴＫ１ Ｆｏｒ 和ＴＫ２ Ｒｅｖ 进行ＰＣＲ 鉴定可扩增出预期的５０３ ｂｐ 的ＴＫ 基因编码区部分序列；ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切质粒ｐ ＷＲ４５０１／ ＴＫ， 可切出约１１５０ｂｐ 的ＤＮＡ 片段， 表明重组质粒中已插入ＨＳＶ１ ＴＫ基因片段。用ＩＰＴＧ 诱导ｐ ＷＲ４５０１／ＴＫ／ＪＭ１０９ ，表达出相对分子质量（ Ｍｒ） 约为９７ ０００ 的ＴＫ 和β半乳糖苷酶（ Ｍｒ５５ ０００） 融合蛋白。薄层扫描显示，该融合蛋白含量占菌体蛋白总量的２７ ．４７ ％ 。

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因及更昔洛韦系统对S-D大鼠的毒副作用

旨探讨将单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因载体生产细胞（pLTKcSN／VPC）脑内注射和腹腔注射更昔洛韦（GCV）在大鼠体内的急性系统性毒副作用，以及载体生产细胞（VPC）在大鼠脑内的存在时问。S-D大鼠24只，雌雄各半，随机分为2组。第1组颅内注射pLTKcSN／VPC，细胞总量3ｘ106/只，7天后腹腔注射GCV30mg·kg-1·d-1，共7天。GCV用药结束后1周处死动物，进行备脏器组织学检查及TK序列的聚合酶链反应（PCR）和原位杂交检测。第2组，采用脑内注射等量整合有β半乳糖苷酶基因（β-gal／nVPC），注射后的9、14、21和30天各处死3只动物，取注射针道周围脑组织行冰冻切片x-gal组化染色，观察VPC在大鼠脑内的生存时限。结果：第1组动物的各脏器组织学病理改变主要为脑内手术部位蛛网膜下腔出血、个别动物有心肌间质灶性炎症和肝细胞脂肪变性。TK序列聚合酶链反应（PCR）检测动物体内各脏器均未检出TK序列。x-gal组化染色见9天和21天两个时问点分别有1只动物脑内有阳性细胞存在。本文结果提示：pLTKcSN／VPC及GCV系统对大鼠脑及全身各脏器有轻微非特异性急性毒副作用，pLTKcSN／VPC在大鼠体内的生存时间约为3周。为pLTKCSN／VPC及GCV系统的临床试验治疗恶性脑胶质瘤提供了脑内注射PLTK。SN／VPC的安全性依据。

单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因融合表达产物的免疫学特性研究

目的研究TK基因在真核细胞中的表达。方法应用已构建和表达的单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV 1TK)融合蛋白免疫兔制备抗HSV 1TK血清 ,并以免疫印迹法鉴定其特异性 ,以免疫荧光法检测HSV 1TK基因在转染人肝癌细胞系中的表达。结果免疫印迹显示 ,自制和国外提供的抗TK兔血清 ,均能特异性地识别Mr 约为97000的TK融合蛋白。免疫荧光染色得到的结果满意 ,而且自制抗血清的效价和染色强度均优于国外提供的免疫血清。结论原核表达的HSV 1TK融合蛋白具有较好的免疫学活性 ;自制抗HSV

全反式维A酸对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦旁观者效应增强作用及其机制

目的 通过研究全反式维A酸 (ATRA )对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦 (HSV tk/GCV)旁观者效应的增强作用及与Cx4 3表达的关系 ,为提高TK自杀基因的疗效及探索增强作用机制提供实验基础。方法 应用Polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察ATRA对宫颈癌细胞ME180 ,ME180 /TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果 ME180 ,ME180 /TK不同比例的混合细胞随ATRA浓度的增加而存活率降低。ME180 +ME180 /TK混合细胞的存活率随ME180 /TK细胞比例的增加而降低。在 2mg·L- 1更昔洛韦 (GCV)作用下 ,以 10 - 8mol·L- 1ATRA与不加ATRA (0mol·L- 1)的作用相比较 ,在ME180与ME180 /TK不同比例混合的各组中 ,细胞的存活率明显降低 (P <0 .0 5 )。并观察到10 - 8及 10 - 10 mol·L- 1ATRA对GCV旁观者效应的增强作用。RT PCR结果表明 ,经ATRA处理的ME180细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 1.84倍及 2 .6 5倍。结论 宫颈癌ME180细胞中 ,ATRA在10 - 8～ 10 - 10 mol·L- 1范围内 ,具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。其主要机制是通过ATRA在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,导致旁观者效应的增强。

构建单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因真核表达载体

从单纯疱疹病毒Ⅱ型 (HSV -Ⅱ )Sav株感染的Hep - 2细胞培养液和细胞裂解液中提取HSV -II基因组DNA ,以此为模板 ,用PCR方法获取胸苷激酶 (TK)基因 ,将获取的DNA片段克隆入真核表达载体pcDNA3中 ,筛选阳性克隆测序 .结果表明 :本研究所获取的HSV -Ⅱ -TK基因全部编码区为 112 8bp ,编码 376个氨基酸 .结果表明 :本研究扩增出HSV -ⅡTK基因的全部编码区序列 ,并成功构建真核表达载体 pcDNA3/TK .

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢上皮癌细胞杀伤作用的研究

目的 :探讨逆转录病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV1 tk)基因转染 ,联合抗病毒药物羟甲基无环鸟苷 ( ganciclovir ,GCV)和无环鸟苷 (acyclovir ,ACV )对人卵巢上皮癌 (OEC)细胞系TYK的杀伤作用。方法 :用lipofectionreagent介导法将PLNTK5质粒转移入包装细胞PA317中 ,用滴度最高的PA317病毒上清液转染TYK细胞 ,运用MTT法及光镜、电镜检测GCV、ACV对目的细胞的体外杀伤效应。结果 :将PLNTK 5质粒转入PA317细胞后 ,得到了稳定的产病毒细胞株。TYK细胞可被病毒上清液转染 ,转导HSV1 tk基因可显著增强ACV、GCV对TYK细胞的杀伤作用。结论 :逆转录病毒可介导HSV1 tk基因转染TYK细胞并获稳定表达 ,ACV、GCV对携有HSV1 tk基因的卵巢癌细胞有明显的体外杀伤作用。

单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因部分缺失重组质粒的构建及序列分析

目的：构建ＨＳＶ１ 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法：以ｐ ＵＣ１８／ ＴＫ 重组质粒ＤＮＡ 为模板，用ＰＣＲ 方法扩增ＴＫ５′端５０３ｂｐ 基因片段，并将扩增的片段克隆入载体ｐ ＵＣ１８ 中（ｐ ＵＣ１８／ＴＫ１） ；用Ｐｓｔ Ｉ 和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切ｐＵＣ１８／ ＴＫ， 获得ＴＫ３′端３８３ｂｐ 片段， 将此酶切片段克隆入ｐＵＣ１８／ ＴＫ１ 中， 并进行测序。结果： 构建成重组质粒ｐＵＣ１８／ ＴＫ－ 。经酶切鉴定获得１ 条约９００ ｂｐ 的基因片段； 序列测定证实， ＨＳＶ１１７ｓｙｎ ＋ ＴＫ 基因缺失了第４９３ ～７４４ 位２５１ 对碱基。结论：成功地构建了部分缺失的ＨＳＶ１／ＴＫ－ 基因重组质粒，为研制其突变株奠定了基础。

单纯疱疹病毒胸苷激酶多克隆抗体的制备

目的:克隆单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因,并在大肠杆菌中表达,通过免疫家兔,获得HSV-TK多克隆抗体,为进一步研究HSV-TK的功能奠定基础。方法:从纯化的单纯疱疹病毒(HSV)中提取病毒基因组,用PCR特异性扩增HSV-TK全长基因,克隆入表达载体pRSETB中进行表达,以纯化的表达产物免疫家兔制备多克隆抗血清,进行Western blotting鉴定。结果:用IPTG诱导后,表达出相对分子质量(Mr)约43000的融合蛋白,免疫家兔制备的兔血清,第2～5周每周采血1次,Western blotting检测均获得特异性蛋白带;最后一次样品3个稀释度(1∶1000、1∶3000、1∶5000)的Western blotting分析仍可以检出蛋白质带。结论:成功获得了特异性强和滴度高的HSV-TK多克隆抗体。

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对肺腺癌细胞杀伤作用探讨

目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因转染联合抗病毒药物更昔洛韦(GCV)对人肺腺癌细胞系的杀伤作用。方法应用基因工程技术构建了携带单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因的逆转录病毒重组体pLXSN-tk,通过脂质体法转染PA317细胞,G418筛选出产重组病毒颗粒的生产细胞PA317-tk细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HSV-tk/GCV系统对人肺腺癌细胞系GLC-82的生长抑制率。结果 重组逆转录病毒载体能有效地将HSV-tk(基因导入GLC-82细胞系内并使其获得对GCV的敏感性。结论肺腺癌细胞转染HSV-tk基因后,能有效地被GCV杀死。

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因在骨肉瘤细胞中的表达和作用

目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV TK)及其底物丙氧鸟苷 (GCV)的基因治疗系统对骨肉瘤细胞株SAOS 2的杀伤作用。方法 :用DOTAP将含有HSV TK基因的真核表达质粒tgCMV HyTK导入骨肉瘤细胞株SAOS 2 ;提取阳性转染细胞 (SAOS 2TK)的总RNA ,用斑点杂交的方法检测HSV TK基因的表达 ;用MTT比色法测定SAOS 2TK细胞对GCV的敏感性及“旁观者效应”。结果 :SAOS 2TK细胞能产生稳定的TK基因的转录产物 ;SAOS 2TK细胞在GCV的作用下呈现明显的生长抑制效应 ,且观察到强效的“旁观者效应”。结论 :HSV

单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因及血管生成抑制素融合基因真核表达质粒的构建及鉴定

目的 对单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因及血管生成抑制素进行基因扩增 ,克隆构建真核表达质粒pcDNA3 /HSV ⅡTK/As。方法 从单纯疱疹病毒Ⅱ型 (HSV Ⅱ )Sav株感染的Hep 2细胞上清液中提取HSV 2基因组DNA ,以此为模板 ,用PCR方法扩增胸苷激酶 (TK )基因 ,将扩增的片段克隆入载体 pcDNA3 中 ,挑取阳性克隆测序。限制性核酸内切酶酶切 pcDNA3 /HSV ⅡTK ,得到目的基因TK ,将其克隆于已构建的真核表达载体 pcDNA3 /As上。结果 HSV Ⅱ TK基因全部编码区为 112 8bp ,基因序列与 genebank中报道相符。新质粒 pcDNA3 /HSV ⅡTK/As经限制性核酸内切酶 (BamHⅠ ,HindⅢ )酶切后得到 70 0bp(As)及 10 0 0bp(HSV ⅡTK)相应基因片段。 结论 本研究成功构建 pcDNA3 /HSV ⅡTK /As真核表达质粒。

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗结肠癌的研究

目的:观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因治疗系统在体内外对结肠癌的杀伤效应。方法:构建携带 HSV-tk基因的逆转录病毒载体,将该重组逆转录病毒感染结肠癌细胞株 SW480,筛选稳定表达 tk 的细胞克隆 SW4801tk,测定 SW480/tk 细胞在体外对GCV 的敏感性;SW480/tk 细胞在裸鼠皮下成瘤,用 GCV 治疗并观察疗效。结果:HSV-tk 基因整合入 SW480细胞并在 SW480/tk 细胞中稳定表达;GCV 在体外对 SW480/tk 细胞有明显的杀伤作用。其作用呈现剂量和时间依赖性特点和旁杀伤效应,对未转染细胞则无明显毒性。裸鼠 ex vivo实验得到相应结果,治疗组肿瘤受到明显抑制。结论在 in vitra 和 ex vivo 水平,表达 HSV-tk 基因的肿瘤细胞均可被 GCV 有效杀伤,逆转录病毒介导 HSV-tk/GCV 自杀基因治疗系统有可能成为结肠癌的有效治疗方法。