突变型hIL-2在Pichia pastoris中直接诱导表达条件研究

为了简化突变型白细胞介素 - 2 (mutantvarianthumaninterleukin - 2 ,MvIL - 2 )在毕赤酵母中的表达工艺 ,作者参照传统方法 ,设计了一种新的表达方法 -直接诱导法。在该实验中 ,在摇瓶条件下 ,对OD6 0 0 、诱导时间这两个重要的参数进行了重点研究 ,并对表达蛋白的抗原性和生物学活性进行鉴定。结果表明 :在pH6 0、温度 30℃、转速 2 80r min的条件下进行培养 ,菌体密度(OD6 0 0 )达到 4 0时直接在发酵液中加入 1%的甲醇进行诱导表达 ,间隔 2 4h补充同上浓度的甲醇 ,96h收集发酵液。以相同体积的培养基最后获得的总目的蛋白来比较 ,直接诱导法的产量是传统诱导法产量的 5倍。Westernblot的抗原性检测和MTT生物学活性实验证明表达的蛋白是特异性蛋白。MTT法测得突变型IL - 2具有 4倍于同样在毕赤酵母中表达的天然IL -