靶向髓样分化蛋白—2特异性抗炎多肽的优化

目的对原始多肽即靶向髓样分化蛋白-2（MD-2）拮抗多肽T6、T11 进行突变多肽库的构建、筛选和功能鉴定,以获得具有更高抗炎活性的多肽.方法：以前期合成的可阻断MD-2 与内毒素（LPS） 结合但效率不高的原始多肽T6 和T11 序列为基础,每次随机突变相邻的3~5 个氨基酸,保留剩余氨基酸,并同时在肽链的氨基端和羧基端引入额外的两个氨基酸,构建大容量的噬菌体突变肽库;再用全长的MD-2 蛋白进行靶向淘选获得特异结合的多肽.最后用细胞实验和动物实验验证所获特异多肽的抗炎效果：①用获得的多肽200 μg/ml 分别孵育巨噬细胞和人单核白细胞2 h,再用内毒素（LPS）1 μg/ml 刺激6 h.以单纯细胞培养液培养的细胞和LPS 刺激6 h 的细胞作对照.② C57 小鼠腹腔注射获得的多肽200 μg/ml, 1 h 后腹腔注射LPS 400 μg/ml,6 h 后取血.以腹腔注射生理盐水1 ml 或LPS 的小鼠作对照.每组5 只小鼠.采用ELISA 法测定各组细胞培养上清和各组小鼠血清的肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白介素6（IL-6）的表达水平.结果：成功构建出原始多肽T6 和T11 序列为基础的突变肽库,用全长的MD-2 蛋白进行靶向淘选获得特异结合多肽A8、H2、F5、H5、H9,通过细胞实验筛选得到有抑炎效果的多肽2 条（A8、H2）,可以明显抑制LPS 所致细胞分泌TNF-α 和IL-6 水平的增高.动物实验发现只有1 条多肽（H2）可以明显抑制LPS 所致小鼠血清TNF-α 和IL-6 水平的增高.结论：成功构建了突变肽库,并从中筛选出一条具有高效抗炎效应的多肽.