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人egf基因在突变枯草芽孢杆菌WYBS2001中的转化、分泌表达及其产物功能研究(英文) 被引量:6
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作者 王关林 易庆 方宏筠 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期97-102,共6页
通过紫外线突变诱导获得了对感染致病菌具有显著抑菌作用的枯草芽孢杆菌突变株WYBS2 0 0 1。采用PCR技术人工合成了 175bp的人表皮生长因子 (hEGF)的基因片段 ,并引入PstⅠ、HindⅢ酶切位点、起始密码子及pUS186载体信号肽序列CTTAGA。... 通过紫外线突变诱导获得了对感染致病菌具有显著抑菌作用的枯草芽孢杆菌突变株WYBS2 0 0 1。采用PCR技术人工合成了 175bp的人表皮生长因子 (hEGF)的基因片段 ,并引入PstⅠ、HindⅢ酶切位点、起始密码子及pUS186载体信号肽序列CTTAGA。经DNA测序分析 ,合成的片段与人egf基因序列完全一致。然后将其克隆至枯草杆菌分泌型质粒载体pUS186上构建成重组质粒pUSE ,并转化枯草杆菌突变菌株WYBS2 0 0 1,获得转人egf基因的枯草杆菌生态工程菌WYBS2 0 0 1T。RIA检测结果表明 ,WYBS2 0 0 1T阳性工程菌培养的上清液中可检测到hEGF ,含量为 7 6ng ml。如果培养液中添加蛋白酶抑制剂可提高hEGF检测量。通过多代的培养仍然能够稳定地分泌表达hEGF。生物学功能实验表明 ,分泌的hEGF对人K5 6 2体外培养细胞的增殖和生长具有明显生物学活性。对烧伤动物模型的功能性实验观察到 ,WYBS2 0 0 1T工程菌制剂对动物的烧伤有明显的治疗作用。该研究表明 。 展开更多
关键词 人egf基因 突变枯草芽孢杆菌 WYBS2001 转化 分泌表达 功能
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枯草芽孢杆菌proA基因突变对提高大肠杆菌转化子渗透压耐受能力的影响
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作者 魏红波 曹军卫 +1 位作者 陈明清 刘瑞杰 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期207-212,共6页
将枯草芽孢杆菌93151野生型菌株的proB基因和耐盐突变株93151-14的proA基因,进行体内重组,筛选出含有野生型proB和突变型proA杂合基因的转化子.此杂合基因能够与脯氨酸营养缺陷型大肠杆菌JM83功能互补.分别测定了大肠杆菌JM83三种转化子... 将枯草芽孢杆菌93151野生型菌株的proB基因和耐盐突变株93151-14的proA基因,进行体内重组,筛选出含有野生型proB和突变型proA杂合基因的转化子.此杂合基因能够与脯氨酸营养缺陷型大肠杆菌JM83功能互补.分别测定了大肠杆菌JM83三种转化子(分别含有野生型proBA基因,双突变proBA基因和杂合proBA基因)的耐盐能力,发现含有杂合proBA基因转化子的耐盐能力(0.45 mol/L)尽管比含有双突变proBA基因的转化子(0.5 mol/L)要低一些,但比含有野生型proBA基因的转化子(0.3 mol/L)要高得多.测定了3种转化子在不同盐浓度下生长时的胞内自由脯氨酸含量,发现其含量均随着盐浓度的上升而提高,表明其耐渗透压胁迫能力的提高与胞内自由脯氨酸的积累密切相关.但在相同盐浓度下,含有杂合proBA基因转化子的胞内自由脯氨酸含量要低于含有双突变proBA基因的转化子的胞内自由脯氨酸含量,但明显高于含有野生型proBA基因的转化子的胞内自由脯氨酸含量.说明尽管proB基因的突变在提高细胞耐高渗胁迫的能力中,有重要作用但proA基因的突变也发挥了不可忽视的作用. 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌耐盐突变 proA基因突变 渗透压胁迫 脯氨酸合成
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Screening of Biocontrol Strain Bacillus subtilis by N^+ Ion Beam Implantation 被引量:5
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作者 刘桂君 孟佑婷 +2 位作者 杨素玲 包放 尚宏忠 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第8期1658-1663,共6页
[Objective] This study was to investigate the effect of N+ ion beam implantation on the survival rate and mutation rate of biocontrol strain Bacillus subtilis. [Method] The factors influencing B. subtilis ion beam im... [Objective] This study was to investigate the effect of N+ ion beam implantation on the survival rate and mutation rate of biocontrol strain Bacillus subtilis. [Method] The factors influencing B. subtilis ion beam implantation, including culture time, dilution concentration, solvent, drying time of mycoderm were optimized. B. subtilis cells were implanted by using ion beam at dose of 2.0×10^14~4.0×10^14 ions/cm2 and the energy of 30 kev. Then the methods of culturing colonies confronting each other on plate and Oxford cup diffusion were used to screening strains. [Result] The optimal parameters were found as follows: culture in liquid for 20-24 h, dilution with sterile water to 106 cells/ml and drying time of 60 min for sample preparation; the optimal N+ ion beam implantation dose of 2.0×10^14~4.0×10^14 ions/cm2 at the energy of 30 kev, the survival rate of 8.43%-26.71% and the mutation rate of 3.50%-5.43%. [Conclusion] This study provided reference for ion beam implantation mutation of B. subtilis. 展开更多
关键词 Ion beam implantation Survival rate Mutation rate Bacillus subtilis
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