期刊文献+
共找到14篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
哺乳动物细胞表面展示IgG抗体Fc组合突变库的构建及评估
1
作者 张咪 柳淑君 +1 位作者 李福彬 张燕 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期510-517,共8页
目的·在单点突变文库筛选结果和多个简并引物引入组合突变的基础上,建立一种高效获得高通量的哺乳动物细胞膜表面展示IgG抗体Fc(fragment crystallizable domain)组合突变文库的方法。方法·单点突变文库经流式细胞术分选获得... 目的·在单点突变文库筛选结果和多个简并引物引入组合突变的基础上,建立一种高效获得高通量的哺乳动物细胞膜表面展示IgG抗体Fc(fragment crystallizable domain)组合突变文库的方法。方法·单点突变文库经流式细胞术分选获得与Fcγ受体IIB(FcγRIIB)高亲和力的位于EU编号233~240位点的氨基酸突变;根据这些突变设计多个简并引物,将引物等比混合或按引物所包含突变多样性占比混合后进行PCR获得含有组合突变的DNA片段;利用重组酶连接片段与载体后转化大肠埃希菌DH5α,获得质粒文库;质粒文库转染Pheonix细胞,制备反转录病毒,然后感染3T3细胞,获得细胞表面表达有Fc突变的细胞文库;使用流式细胞术检测质粒转染Pheonix细胞的效率,以及病毒感染3T3细胞的效率;高通量测序评估质粒文库和细胞文库的构建情况。结果·根据单点突变文库筛选结果,设计32条简并引物,可以覆盖所有期望的组合突变,并且实际文库多样性为期望文库的3.6倍(41600/11520);高通量测序结果显示,相较于引物等比混合获得的质粒文库,按引物所包含突变多样性占比混合所获得的质粒文库具有更好的均一性与完整性,能够覆盖期望文库中99.58%的组合突变类型(11472/11520);一代测序结果显示,10条序列中有3条为期望文库突变,与简并引物设计时计算的多样性相符;流式细胞术的结果显示,Pheonix细胞的转染效率为51.6%,3T3细胞的感染效率为47.4%;高通量测序结果显示,所获得的细胞文库能够覆盖期望文库中85.92%的组合突变(9898/11520)。结论·在已有单点突变文库筛选的氨基酸突变基础上设计多个简并引物,并通过PCR、质粒转染和反转录病毒感染,能够高效、低成本地获得文库覆盖率超过85%的抗体Fc组合突变质粒文库和哺乳动物细胞表面展示文库。 展开更多
关键词 Fc工程 Fc组合突变 简并引物 哺乳动物细胞表面展示 高通量测序
下载PDF
基于领导者竞争策略的改进猎人猎物优化算法 被引量:2
2
作者 常耀华 韦根原 《计算机应用研究》 CSCD 北大核心 2024年第1期142-149,共8页
针对猎人猎物优化算法寻优精度低和易陷入局部最优等问题,提出了一种基于领导者竞争策略的改进猎人猎物优化算法。首先将种群随机分为三个亚群,采用不同的搜索策略,扩大搜索范围;其次,采用精英组合突变策略,提升种群子代多样性,规避局... 针对猎人猎物优化算法寻优精度低和易陷入局部最优等问题,提出了一种基于领导者竞争策略的改进猎人猎物优化算法。首先将种群随机分为三个亚群,采用不同的搜索策略,扩大搜索范围;其次,采用精英组合突变策略,提升种群子代多样性,规避局部最优值;最后,提出领导者竞争策略,利用个体间的信息交流,统合各个策略,筛选出最优变量。通过数值实验以及在工程优化问题上的应用结果表明,所提算法相较于对比算法具有更为优异的寻优能力,验证了改进策略的有效性和可靠性。 展开更多
关键词 猎人猎物优化算法 精英组合突变策略 领导者竞争策略 均值搜索策略 正余弦策略
下载PDF
盖子区域氨基酸的定点突变对T1脂肪酶酶学性质的影响 被引量:3
3
作者 朱彩林 吕祥 夏小乐 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期94-102,共9页
T1脂肪酶来源于Geobacillus zalihae菌株,常作为生物催化剂广泛应用于各领域。为了综合改善T1脂肪酶的酶学性质,前期通过对该酶盖子结构进行理性设计得到3个效果较好的突变体L188M、A190L、A190Y,在此基础上,将单点突变体进行组合得到L1... T1脂肪酶来源于Geobacillus zalihae菌株,常作为生物催化剂广泛应用于各领域。为了综合改善T1脂肪酶的酶学性质,前期通过对该酶盖子结构进行理性设计得到3个效果较好的突变体L188M、A190L、A190Y,在此基础上,将单点突变体进行组合得到L188M/A190L和L188M/A190Y两个复合突变体。在该实验中对突变体脂肪酶酶学性质展开研究,同时将单点与组合突变效果进行比较。结果显示野生型及突变体最适pH均为9.0,复合突变体的最适温度提高5℃。单点突变及组合突变均使T1脂肪酶的酶学性质得到不同程度的改善,且复合突变体效果更显著。组合突变体使脂肪酶的温度、pH稳定性显著提高,L188M/A190L对于有机溶剂二甲基亚砜及正十六烷的耐受性为野生型的1.88倍和2.73倍,L188M/A190Y为野生型的1.96倍和2.58倍。此外,对C16和C18底物的选择性也明显增强,L188M/A190L为野生型的1.65和2.7倍,L188M/A190Y为野生型的1.5倍和2.25倍。该研究成果在一定程度上拓宽了T1脂肪酶的应用前景,同时为其他脂肪酶的改造提供了一定理论依据。 展开更多
关键词 T1脂肪酶 盖子结构 单点突变 组合突变 酶学性质
下载PDF
采用测井曲线对比云南富源矿区龙潭组主采煤层 被引量:3
4
作者 陈国庆 《煤炭技术》 CAS 2008年第11期116-118,共3页
选择常规数字测井中采用的视电阻率、人工放射性、自然放射性3种测井曲线,对云南富源矿区龙潭组7,9,15,16,17,23及24等七层煤层进行对比,其方法是:利用测井曲线连续性中的突变性和突变组合性规律,对它们进行对比,其效果显著,为利用地质... 选择常规数字测井中采用的视电阻率、人工放射性、自然放射性3种测井曲线,对云南富源矿区龙潭组7,9,15,16,17,23及24等七层煤层进行对比,其方法是:利用测井曲线连续性中的突变性和突变组合性规律,对它们进行对比,其效果显著,为利用地质模型难以精确对比的龙潭组的七层主要煤层,开辟了对比的新思路,对该区中、深部煤层开发有着重大的指导意义。 展开更多
关键词 测井曲线 突变 突变组合 对比 龙潭组
下载PDF
黔西岔河井田龙潭组主采煤层测井曲线对比分析
5
作者 解有波 《科学技术与工程》 2009年第12期3445-3448,3456,共5页
选择常规数字测井中采用的三侧向视电阻率、伽玛伽玛放射性、自然放射性三种测井曲线,进行贵州岔河矿区龙潭组6、10、16等三层煤层进行对比。利用测井曲线连续性中的突变性和突变组合性规律,对它们进行对比,发现效果显著,为利用地质模... 选择常规数字测井中采用的三侧向视电阻率、伽玛伽玛放射性、自然放射性三种测井曲线,进行贵州岔河矿区龙潭组6、10、16等三层煤层进行对比。利用测井曲线连续性中的突变性和突变组合性规律,对它们进行对比,发现效果显著,为利用地质模型难以精确对比的龙潭组的三层主要煤层,开辟了对比的新思路,为该区煤层开发有着重大的实际意义。 展开更多
关键词 测井曲线 突变组合 对比 龙潭组
下载PDF
组合突变提高重组人干扰素α2b的抗病毒活性 被引量:3
6
作者 赵广荣 杜磊 祝琳琪 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第2期347-351,共5页
本文合理设计新型重组人干扰素α2b(rh-INFα2b)基因序列,采用组合突变策略,对第52-53-55、103-107和121-125位氨基酸残基定向突变。将突变基因连接于原核表达载体pET28a上进行诱导表达,所获得的新型rh-IFNα2b的抗病毒活性效价达9.3... 本文合理设计新型重组人干扰素α2b(rh-INFα2b)基因序列,采用组合突变策略,对第52-53-55、103-107和121-125位氨基酸残基定向突变。将突变基因连接于原核表达载体pET28a上进行诱导表达,所获得的新型rh-IFNα2b的抗病毒活性效价达9.3×107IU/mg,比对照样品(1×106IU/mg)高93倍。结果表明:所采用邻近多点突变方法,有效组合了位点效应,大幅度提高了干扰素的生物活性,获得高抗病毒活性的rh-IFNα2b。 展开更多
关键词 重组人干扰素 组合突变 大引物扩增 抗病毒活性
原文传递
采用测井曲线对比吕凤矿区童子岩组第三段主采煤层
7
作者 周东霞 《中国西部科技》 2008年第20期1-2,38,共3页
本文选择常规数字测井中采用的视电阻率、人工放射性、自然放射性等三种测井曲线,进行吕凤区童子岩组第三段中亚段13、20、22、25等四层煤层进行对比,其思路是:利用测井曲线连续性中的突变性和突变组合性规律,对它们进行对比,发现其效... 本文选择常规数字测井中采用的视电阻率、人工放射性、自然放射性等三种测井曲线,进行吕凤区童子岩组第三段中亚段13、20、22、25等四层煤层进行对比,其思路是:利用测井曲线连续性中的突变性和突变组合性规律,对它们进行对比,发现其效果显著,为利用地质模型难以精确对比的P1t3-2、P1t3-1等四层主要煤层,开辟了对比的新思路,为吕凤矿区煤炭资源开发有着重大的实际意义。 展开更多
关键词 测井曲线 突变 突变组合 对比 吕凤矿区
下载PDF
1975-2015年洪泽湖水沙变化趋势及成因分析 被引量:8
8
作者 樊贤璐 徐国宾 +2 位作者 邓恒 段宇 陈春锦 《南水北调与水利科技》 CAS 北大核心 2019年第3期7-15,共9页
淮河流域洪涝灾害频繁,洪泽湖对其防洪除涝起关键性作用。掌握洪泽湖水沙变化趋势及突变点对流域水资源管理、水沙调节有重要的现实意义。利用入、出洪泽湖各支流代表水文站1975-2015年实测年径流量和年输沙量数据,分析入、出洪泽湖水... 淮河流域洪涝灾害频繁,洪泽湖对其防洪除涝起关键性作用。掌握洪泽湖水沙变化趋势及突变点对流域水资源管理、水沙调节有重要的现实意义。利用入、出洪泽湖各支流代表水文站1975-2015年实测年径流量和年输沙量数据,分析入、出洪泽湖水量和沙量分布特征。通过Mann-Kendall(M-K)秩相关检验法和Pettitt突变点识别法研究入湖、出湖水沙量年际变化趋势和突变点。在此基础上,从流域降雨、水资源开发利用和水库滞沙三个方面分析了洪泽湖水沙变化的主要影响因素。研究表明:洪泽湖入湖、出湖水量年际变化趋势一致,无明显减小趋势,且无显著突变点。入湖沙量有小幅减小趋势,出湖沙量M-K统计值超过95%显著性水平,有明显减小趋势。入湖、出湖沙量发生突变的年份为1991年。对影响因素的分析得到:降雨量变化是水量变化的重要影响因素。1993-2015年,入湖水量呈不明显减小趋势则与流域用水量明显增加、水资源开发利用程度不断提高有关。上游水库建设是导致洪泽湖沙量有明显减小趋势的主要原因,1991年治淮工程的实施,水库复建和水土保持等措施是沙量突变的主要原因。 展开更多
关键词 洪泽湖 水沙 趋势分析 Mann-Kendall-Pettitt组合突变检验 成因分析
下载PDF
组合突变提高甲基对硫磷水解酶MPH热稳定性的研究
9
作者 罗晓亮 顾杏露 +2 位作者 田健 初晓宇 伍宁丰 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期167-172,共6页
来源于苍白杆菌Ochrobactrum sp.M231的甲基对硫磷水解酶MPH-Och具有优良的催化水解甲基对硫磷农药的能力,针对其热稳定性较差的缺点,通过组合3种提高蛋白热稳定性的突变策略,最终获得热稳定性改良的突变酶MPHM7,其T50达到65℃,在之前... 来源于苍白杆菌Ochrobactrum sp.M231的甲基对硫磷水解酶MPH-Och具有优良的催化水解甲基对硫磷农药的能力,针对其热稳定性较差的缺点,通过组合3种提高蛋白热稳定性的突变策略,最终获得热稳定性改良的突变酶MPHM7,其T50达到65℃,在之前研究热稳定性提高的四点突变酶(S274Q/T183E/K197L/S192M)的基础上又提高了5℃。同时,该突变酶的催化效率也获得了一定的提高,其kcat/Km值是四点突变酶的3.8倍。热稳定性改良突变酶的获得证实了这些提高热稳定性的方法是有效的,并且其作用具有加合性,这为分子设计改良酶蛋白热稳定性提供了新的研究思路。 展开更多
关键词 甲基对硫磷水解酶 热稳定性 组合突变
原文传递
一种高效的多点组合突变克隆构建方法(英文)
10
作者 王杰 逯晓云 +1 位作者 刁爱坡 江会锋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期309-319,共11页
高质量的突变方法和高效的筛选方法相结合可以提高酶定向进化的效率。文中开发了一种高效的多点组合突变(Multi-points combinatorial mutagenesis,MCM)的克隆方法。MCM方法通过引入DNA组装、融合PCR和杂交技术,实现高效多点组合突变。... 高质量的突变方法和高效的筛选方法相结合可以提高酶定向进化的效率。文中开发了一种高效的多点组合突变(Multi-points combinatorial mutagenesis,MCM)的克隆方法。MCM方法通过引入DNA组装、融合PCR和杂交技术,实现高效多点组合突变。应用优化后的方法定向进化改造苯甲酰甲酸脱羧酶(Benzoylformate decarboxylase,BFD)来测试MCM方法的效率。通过电转至大肠杆菌感受态Escherichia coli TreliefTM 5α所获得的单菌落数量(Colony-formingunits,CFUs)超过106 CFUs/μgDNA。经验证90/100单菌落精确组装;5个位点L109、L110、H281、Q282和A460同时组合突变的效率达到88%。最后,筛选到一种kcat/Km提高10倍的突变酶(L109Y、L110D、H281G、Q282V和A460M)。因此,应用该方法可以有效地创建突变体库,促进酶的定向进化技术的快速发展。 展开更多
关键词 组合突变 定向进化 高通量筛选 苯甲酰甲酸脱羧酶
原文传递
Is There Hysteresis in Unemployment in OECD Countries? Evidence From Panel Unit Root Test With Structural Breaks
11
作者 Meliha Ener Feyza Ariea 《Chinese Business Review》 2011年第4期294-304,共11页
This study tests the hysteresis hypothesis of unemployment in fifteen OECD countries by using panel unit root tests which allow for structural breaks. We apply annual unemployment rates covering 1985-2008 periods. We ... This study tests the hysteresis hypothesis of unemployment in fifteen OECD countries by using panel unit root tests which allow for structural breaks. We apply annual unemployment rates covering 1985-2008 periods. We test whether unemployment rates are stationary by using second generation tests which allow cross section dependency among series and panel unit root test based on structural break advanced by Carrion-i-Silvestre, Barrio-Castro and Lopez-Bazo (2005). We find series as a stationary process with structural breaks according to Carrion-i Silvestre et al. (2005) test, while we find series as unit root process with second generation panel unit root test. According to the Carrion-i Silvestre et al. (2005) test, we find the evidence of absence of hysteresis in analyzed countries. As a result, temporary shocks have temporary effects on unemployment instead of permanent effect. Structural factors can affect the natural rate of unemployment and, therefore, unemployment would be stationary around a process that is subject to structural breaks. So, there still exists a unique natural rate of unemployment to which the economy eventually will converge. 展开更多
关键词 structural break UNEMPLOYMENT cross-section dependence panel unit root tests
下载PDF
Relationship between Mutations in DNA Sequences Loci Coding Pre-miRNAs and Genes Related to Biogenesis of SncRNAs with MiRNA Expression in Endometrial Carcinoma Tissues
12
作者 Massimiliano Chetta Angela Cordella +3 位作者 Giuseppina Bruno Maurizio Guida Alessandro Weisz Maria Ravo 《Journal of Environmental Science and Engineering(B)》 2015年第7期372-379,共8页
Endometrial cancer (EC) is the most common and lethal gynaecological cancer type in Europe and in North America. Frequently EC arises more in the corpus proper and manifests as round, polypoid expansile masses, but ... Endometrial cancer (EC) is the most common and lethal gynaecological cancer type in Europe and in North America. Frequently EC arises more in the corpus proper and manifests as round, polypoid expansile masses, but it may also originate in the lower uterine segment or spread in endometrium with necrosis and hemorrhage. The analysis was performed using a custom panel containing all DNA sequences loci coding pre-miRNAs and genes related to biogenesis and regulation of sncRNAs in normal and tumor tissues extracted from 6 unrelated patients with endometrial carcinoma. The identified variations were correlated with mature miRNAs differentially expressed in the same normal and tumor endometrial tissues. The comparison analysis confirmed the high degree of cellular and genetic intratumoral heterogeneity with a temporal and spatial miRNA expression distribution in association with genomic variants identified. The classification of specific DNA mutations, onto the loci identified, should be suitable to characterize possible instability genome regions and help classification of tumors to ameliorate the clinical management of patients affected by endometrial carcinoma. 展开更多
关键词 Endometrial cancer pre-miRNAs sncRNA miRNA expression.
下载PDF
一例罕见P表型个体家系研究 被引量:1
13
作者 魏玲 姬艳丽 +5 位作者 骆宏 莫春妍 张润青 赵阳 王贞 罗广平 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期701-704,共4页
目的研究1例广东籍罕见P表型的血清学特点及其家系的分子遗传背景。方法用血清学方法鉴定P表型,提取先证者及其家系成员的静脉血基因组DNA,采用PCR方法扩增a-1,4半乳糖基转移酶[r(1,4)galactosyltransferase,A4GALT]基因第3外显... 目的研究1例广东籍罕见P表型的血清学特点及其家系的分子遗传背景。方法用血清学方法鉴定P表型,提取先证者及其家系成员的静脉血基因组DNA,采用PCR方法扩增a-1,4半乳糖基转移酶[r(1,4)galactosyltransferase,A4GALT]基因第3外显子,并对扩增产物进行直接测序分析。此外,用测序方法针对该家系中发现的变异在100名健康献血者中进行筛查。结果先证者及其家系成员中共有5人为P表型,A4GALT基因都存在纯合的点突变c.100G〉A(P.Val34Ile)及组合缺失插入突变c.418—428delllins34(P.Glnl39Trpfs”72);家系成员中有1人为P。表型,两条等位基因中一条为上述突变型,另一条为野生型。健康献血者中发现5名携带c.100G〉A杂合突变,未发现c.418—428delllins34突变。结论A4GALT基因的纯合缺失插入突变导致无功能的等位基因是该家系罕见P表型的分子遗传基础。测序结果表明P表型的遗传方式为常染色体隐性遗传。 展开更多
关键词 p表型 A4GALT基因 组合缺失插入突变
原文传递
Whole-exome sequencing identified compound heterozygous variants in MMKS in a Chinese pedigree with Bardet-Biedl syndrome 被引量:2
14
作者 Zhan Qi Ying Shen +6 位作者 Qian Fu Wei Li Wei Yang Wenshan Xu Ping Chu Yaxin Zhang Hui Wang 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2017年第7期739-745,共7页
Bardet-Biedl syndrome(BBS) is a genetically heterogeneous disorder characterized by retinal dystrophy, polydactyly, obesity,developmental delay, and renal defects. At least 21 candidate BBS-associated genes(BBS1-19, N... Bardet-Biedl syndrome(BBS) is a genetically heterogeneous disorder characterized by retinal dystrophy, polydactyly, obesity,developmental delay, and renal defects. At least 21 candidate BBS-associated genes(BBS1-19, NPHP1, and IFT172) have previously been identified, and all of them play important roles in ciliary function. Here, we collected a BBS pedigree with four members and performed whole-exome sequencing on the proband. The variants were analyzed and evaluated to confirm their pathogenicity. We found compound heterozygous variants(c.1192C>T, p.Q398* and c.1175C>T, p.T392M) in MKKS in both the siblings, and these were likely to be pathogenic variants. We also found a missense variant(c.2029G>C, p.E677Q) in NPHP1 and a missense variant(c.2470C>T, p.R824C) in BBS9 in the proband only, which are variants of uncertain significance. The compound heterozygous variants were probably responsible for the BBS phenotype in this Chinese pedigree and the missense mutations in NPHP1 and BBS9 might contribute to the mutation load. 展开更多
关键词 Bardet-Biedl syndrome MKKS BBS6 NPHP1 whole-exome sequencing
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部