突触后密度蛋白95在大鼠脊髓损伤后的表达变化

目的:探讨突触后密度蛋白95(PSD-95)在脊髓损伤(SCI)后的表达变化以及定位情况。方法:使用改良Allen's法建立大鼠急性脊髓损伤模型。采用实时定量PCR和Western印迹法测定损伤后各时间段PSD-95 mRNA及其蛋白水平在脊髓中的表达变化。采用免疫荧光双标方法显示PSD-95在正常脊髓中的分布以及损伤后的定位改变。结果:PSD-95 mRNA及其蛋白水平在SCI后呈现逐渐下降的趋势,mRNA在5 d降到最低水平,蛋白水平在7 d最低。PSD-95与神经型一氧化氮合酶(nNOS)在SCI后8 h存在着共定位关系,但在SCI后7d,PSD-95除与nNOS部分共定位之外,还高表达于损伤局部活化中性粒细胞和巨噬细胞。结论:SCI后PSD-95在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,并且损伤后高表达在活化的炎症细胞,提示PSD-95参与了脊髓继发性损伤过程。

突触后密度蛋白-95在三阴型乳腺癌外泌体中的表达情况及与临床病理特征的相关性

目的探讨三阴型乳腺癌患者血清外泌体中信使RNA(mRNA)突触后密度蛋白95(PSD-95)的表达及其与患者病理特征的关系。方法收集三阴型乳腺癌与乳腺良性肿瘤(乳腺纤维腺瘤、瘤样增生)患者血清外泌体各4例,通过高通量芯片和基因芯片相结合的方法,筛选出在三阴型乳腺癌与乳腺良性肿瘤患者血清外泌体中有显著差异的mRNAs。通过富集分析了解各mRNA的功能富集情况,并从中发现具有差异表达的mRNA(PSD-95,又称DLG4)富集在NF-κB信号通路中,该通路与肿瘤的侵袭转移相关。采用免疫组织化学染色法对30例乳腺良性肿瘤组织及36例三阴型乳腺癌患者的组织病理切片进行分析,并验证PSD-95在三阴型乳腺癌中的表达水平及其与临床病理特征的相关性。结果PSD-95在三阴型乳腺癌组织中的表达水平显著低于乳腺良性肿瘤组织(P<0.01)。相关性分析结果显示,PSD-95的差异表达与患者淋巴结转移情况明显相关(r=-0.514,P<0.05),而与患者的年龄、绝经状态、Ki67表达水平、肿瘤大小(T)及组织学分级等无关。结论PSD-95在三阴型乳腺癌中的表达显著下调,其与患者淋巴结转移呈负相关,可能与乳腺癌的侵袭转移有关。

补体C1q对脑缺血-再灌注损伤大鼠运动功能和突触蛋白PSD95的影响

目的探讨补体C1q对脑缺血-再灌注损伤大鼠运动功能和突触后密度蛋白95(PSD95)的影响。方法选择清洁级雄性SD大鼠36只,6~8周龄,体重220~250 g。采用随机数字表法将大鼠分为三组:假手术组(S组)、大脑中动脉栓塞(MCAO)组(M组)和MCAO+C1q中和抗体组(A组),每组12只。S组大鼠仅接受颈总动脉解剖分离,不置入线栓;M组采用线栓法制备MCAO大鼠模型;A组在大鼠建模后1 d通过侧脑室注射C1q中和抗体10μl。建模后3 d通过黏附去除实验记录黏附刺激去除时间,通过平衡木实验评估大鼠肢体运动功能,处死大鼠后采用ELISA法检测海马组织C1q、C3含量,采用Western blot法检测海马组织C1q子成分亚基A(C1qa)和PSD95蛋白含量,采用尼氏染色记录尼氏小体数量。结果与S组比较,M组黏附刺激去除时间明显延长,平衡木实验评分明显升高,海马组织C1q、C3含量、C1qa蛋白含量明显升高,PSD95蛋白含量明显降低,尼氏小体数量明显减少(P<0.05)。与M组比较,A组黏附刺激去除时间明显缩短,平衡木实验评分明显降低,海马组织C1q、C3含量、C1qa蛋白含量明显降低,PSD95蛋白含量明显升高,尼氏小体数量明显增加(P<0.05)。结论大鼠脑缺血-再灌注损伤可诱发补体系统广泛激活,并通过补体蛋白C1q加重大鼠海马组织突触蛋白PSD95的丢失及运动功能障碍;中和补体疗法可有效改善大鼠脑缺血-再灌注损伤。

淫羊藿苷对Aβ_(25-35)诱导的阿尔采末病大鼠海马突触素和突触后密度蛋白95表达的影响

目的探讨淫羊藿苷(Ica)对阿尔采末病(AD)大鼠海马突触素(SYN)和突触后密度蛋白95(PSD-95)表达的影响。方法雄性SD大鼠43只,随机分为对照组(n=13)、模型组(n=15)及Ica120 mg·kg-1组(n=15),每日灌胃给药1周后,右侧海马内注射Aβ25-3510μg制备AD模型,制模后继续给药3周。HE染色法光镜观察大鼠海马形态学变化,透射电子显微镜观察大鼠海马神经元超微结构,Western blot法检测大鼠海马SYN和PSD-95蛋白的表达。结果 HE染色显示模型组大鼠海马神经元排列稀疏,并有大量变性神经元,给予Ica治疗后,神经元排列较整齐,变性神经元数量减少;电镜观察发现模型组大鼠海马CA3区神经元数目减少,结构模糊,胞膜不完整,线粒体肿胀呈空泡样变,染色质成块状聚集,突触数目减少,Ica治疗后大鼠海马CA3区神经元数目较多,结构较清晰,线粒体肿胀减轻,染色质较均匀,突触数目增多;Western blot结果显示模型组大鼠海马SYN及PSD-95的表达较对照组明显降低(P<0.05),而Ica组大鼠海马SYN和PSD-95的表达显著增加(P<0.05)。结论 Ica可能通过增加突触标记蛋白SYN和PSD-95的表达改善Aβ25-35诱导的AD大鼠空间学习记忆能力。

突触后密度蛋白-95在大鼠脊髓发育过程中的表达变化

目的:探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在大鼠脊髓发育过程中的表达变化以及细胞定位。方法:采用实时定量PCR(Real-Time PCR)和Western blot测定发育不同时期PSD-95 mRNA及蛋白水平的表达变化。采用免疫荧光染色显示PSD-95在发育脊髓中的细胞定位。结果:大鼠脊髓发育过程中PSD-95 mRNA及其蛋白水平从生后1d开始逐渐升高,在生后1周达高锋,成年后维持在一定的生理水平。免疫荧光双标证实PSD-95在生后发育早期主要定位于脊髓灰质,与神经元的标记物NeuN和突触的标记物synapsin存在共定位;成年后广泛分布于脊髓前角、后角以及白质,分别与NeuN和synapsin以及小胶质细胞的标记物OX-42共定位。结论:大鼠脊髓发育过程中PSD-95在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,在生后发育早期主要表达在前角运动神经元和后角感觉神经元,提示PSD-95参与了神经元的发育和成熟。

突触内与突触外NMDA受体在β-淀粉样蛋白减少海马神经元突触后密度蛋白-95表达中的作用

目的研究可溶性Aβ寡聚体在海马神经元中对突触蛋白表达的影响。方法用免疫细胞化学方法检测在NMDA拮抗剂与激动剂作用下,Aβ25～35对突触后密度蛋白(PSD-95)表达的影响。结果Aβ25～35引起的PSD-95减少具有时间、剂量依赖性。PSD-95的减少可被非特异性NMDA受体拮抗剂(MK801)缓解;突触外NMDA受体被阻断时,也可显著缓解;而在突触内NMDA受体被阻断时,无显著性改变。结论Aβ引起的PSD-95减少依赖NMDA受体活性,突触外NMDA受体可能参与Aβ诱导突触蛋白降解。

突触后密度蛋白-95在大鼠坐骨神经损伤后的表达

为了探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在周围神经损伤过程中的表达变化,本实验建立大鼠坐骨神经夹伤模型,采用荧光定量PCR(real-timePCR)和Western blotting对PSD-95 mRNA及其蛋白水平进行定量检测,应用免疫荧光双标技术观察PSD-95与神经型一氧化氮合酶(nNOS)的共定位情况。结果显示,PSD-95 mRNA及其蛋白在正常坐骨神经中度表达,损伤后迅速下降;PSD-95 mRNA从损伤后2d开始表达上调;而其蛋白水平于损伤后1周明显升高。免疫荧光双标染色证实在坐骨神经损伤后1周PSD-95与nNOS共定位于Schwann细胞上,而与神经丝蛋白NF-200共定位不明显。本研究结果提示PSD-95通过nNOS参与了周围神经损伤修复过程。

A型流感病毒NS1与突触后密度蛋白-95的相互作用

目的 A型流感病毒NS1蛋白是一种多功能的致病因子,能够与被感染细胞中的多种蛋白相互结合,影响并干扰宿主细胞内的信号转导、蛋白质合成及抗病毒反应。突触后密度蛋白(Postsynaptic density protein95,PSD-95)主要存在于神经元及SH-SY-5Y等神经来源的细胞株中。假设NS1能够与PSD-95结合,则更有利于了解A型流感病毒对神经元及相关细胞的作用机制。方法通过酵母双杂交,GST-pull down及免疫荧光技术分别从体外和体内两方面检测NS1与PSD-95的相互作用。结果酵母双杂交表明,仅转染PGAD-NS51/PGBK-PSD-95的QDO有菌落生长,且α-半乳糖苷酶活性显著高于阳性对照;而转染PGAD-NS32/PGBK-PSD-95的QDO无菌落生长;GST-pull down表明仅NS51与PSD-95孵育后,能够被Western-blot检测到;免疫荧光表明NS51与PSD-95可能存在共定位,而NS32与PSD-95则不存在共定位。结论 H5N1(A/chicken/Guangdong/1/2005)的NS1能够与PSD-95结合;反之,H3N2(A/Shantou/602/06)的NS1则不能。

三七总皂苷对机械通气致脑损伤大鼠海马神经元及突触相关蛋白PSD-95、GAP-43的影响

目的 探究三七总皂苷(PNS)对机械通气(MV)致脑损伤大鼠海马神经元突触可塑性的影响。方法 SD大鼠采用随机数字表法分为对照(Control)组、MV组、MV+PNS组,每组18只。MV组和MV+PNS组大鼠行MV,Control组大鼠气管插管后进行自主呼吸,未行MV。MV+PNS组大鼠于MV前15 min尾静脉注射PNS 15.844 mg/kg,Control组及MV组于MV前15 min腹腔注射等量生理盐水。MV后,Morris水迷宫实验测量大鼠的认知功能;苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理学变化;高尔基染色观察海马神经元的树突棘密度;免疫组化法检测海马神经元谷氨酸受体(GluR)1的表达;Western印迹检测海马组织突触后密度蛋白(PSD)-95、生长相关蛋白(GAP)-43蛋白表达。结果 与Control组相比,MV组逃避潜伏期显著延长,穿越平台所在位置次数、树突棘密度、海马CA1区GluR1阳性表达和海马组织PSD-95、GAP-43蛋白表达显著减少(P<0.05),海马CA1区神经元未见明显病理学改变;与MV组相比,MV+PNS组逃避潜伏期显著缩短,穿越平台所在位置次数、树突棘密度、海马CA1区GluR1阳性表达和海马组织PSD-95、GAP-43蛋白表达显著增加(P<0.05),海马CA1区神经元损伤明显减轻。结论 PNS可减轻MV所致大鼠脑损伤,其作用机制可能与增加海马神经元突触可塑性有关。

海马过表达Ephrin-B3对颞叶癫痫大鼠突触重塑的影响

目的探讨海马内过表达酪氨酸蛋白激酶B3(Ephrin-B3)对大鼠癫痫突触重塑的可能作用机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、癫痫组、空载体组、慢病毒Efnb3过表达组,每组10只。除空白组外,其余3组均进行癫痫造模处理,造模前1周空载体组两侧海马各注射LV5-NC(5μL)载体,慢病毒过表达组海马注射包装后的Efnb3慢病毒(5μL)进行预处理。观察各组大鼠行为学变化,癫痫造模达24 h后各组取海马组织,采用qPCR检测Ephrin-B3、突触后密度蛋白95(PSD95)、离子型谷氨酸受体亚基(NR2B)的mRNA相对表达变化,蛋白质印迹法检测Ephrin-B3、PSD95、NR2B的蛋白相对表达量。结果Ephrin-B3过表达组癫痫发作潜伏期(30.2±4.38)min,较癫痫组(22.4±3.91)min和空载体组(21.0±5.29)min有所延长(P<0.05),癫痫组和空载体组造模后Ephrin-B3、PSD95、NR2B的mRNA表达量降低,转染Ephrin-B3成功组mRNA相对表达量相较于癫痫模型组明显增加(Ephrin-B3:F=25.11,P=0.0027;PSD95:F=14.80,P=0.0203;NR2B:F=19.51,P=0.0010),相较于空载体注射组亦明显增加(Ephrin-B3:P=0.0029;PSD95:P=0.0160;NR2B:P=0.0034);转染Ephrin-B3成功组相较于癫痫模型组蛋白相对表达量增加(Ephrin-B3:F=17.72,P=0.0032;PSD95:F=7.889,P=0.0145;NR2B:F=9.755,P=0.0199),较空载体注射组表达亦明显增加(Ephrin-B3:P=0.0034;PSD95:P=0.0253;NR2B:P=0.0144)。结论过表达Ephrin-B3可减轻癫痫发作损伤,其机制可能与调控突触后蛋白PSD95、NR2B的表达量控制突触重塑有关。

PSD-95基因DNA甲基化在睡眠剥夺相关疾病的作用研究进展

睡眠剥夺(SD)已成为世界各地普遍存在的问题,许多疾病的发生与睡眠不足有关。已经发现表观遗传机制与SD及相关疾病的发生发展密切相关,其中,DNA甲基化是最常见的表观遗传修饰,可影响基因表达。突触后密度蛋白-95(PSD-95)被认为是兴奋性信号传递过程中重要的调节因子,SD后,PSD-95表达降低,表现出情绪改变和认知障碍等精神疾病症状。在慢性应激小鼠中,观察到血清素1A受体启动子区DNA甲基化水平增加,与抑郁症患者前额叶皮层PSD-95表达水平降低有关。然而,PSD-95基因的DNA甲基化水平与抑郁症表型无关。在精神分裂症患者中,SD的长度会加重疾病程度,且PSD-95基因DNA甲基化与精神分裂症有关。此外,结直肠癌的发病风险与SD或昼夜节律紊乱有关,而PSD-95基因DNA甲基化也可能成为治疗结直肠肿瘤的靶点。未来仍需要进一步深入探索PSD-95基因DNA甲基化在SD相关疾病中的作用及调节机制。

电针百会、神庭对大脑中动脉栓塞大鼠学习记忆功能和前额叶皮层GABAA受体及PSD-95表达的影响

目的:观察电针百会、神庭对MCAO大鼠学习记忆功能及前额叶皮层γ-氨基丁酸A型(gamma-aminobutyric acid,GABAA)受体及突触后密度蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)表达的影响,探讨电针对MCAO大鼠学习记忆功能的影响及作用机制。方法:改良Longa线栓阻塞法制备左侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将造模成功的雄性Sprague-Dawley大鼠随机分成模型组、电针组(百会、神庭)和电针非穴组,同时另设假手术组,每组10只。电针组和非穴组进行连续7d电针干预,假手术组和模型组不做任何处理。采用小动物磁共振成像仪检测干预前后大鼠脑梗死体积变化;Morris水迷宫评价大鼠学习记忆功能;HE染色观察缺血侧前额叶皮层病理变化;Western Blot法检测缺血侧前额叶皮层GABAA受体及PSD-95蛋白表达水平。结果:干预前各组大鼠脑梗死体积无显著性差异(P>0.05),随着干预时间延长,与模型组和非穴组相比,电针组行为学评分明显降低(P<0.05);电针组Morris水迷宫学习记忆测试逃避潜伏期缩短(P<0.05)。干预后,与模型组和非穴组相比,电针组脑梗死体积明显减小(P<0.01);电针组神经元密度和神经细胞数量明显增加;电针组前额叶皮层GABAA受体及PSD-95蛋白表达均明显上升(P<0.05),而模型组和非穴组之间无明显差异(P>0.05)。结论:电针百会、神庭能有效减轻脑缺血后神经损伤,改善学习记忆功能,可能与增加其前额叶皮层神经元数量,促进GABAA受体及PSD-95表达有关。

氯胺酮长期滥用后小鼠海马区caspase-3和PSD-95的表达变化

目的研究氯胺酮长期滥用模型中海马区半胱氨酸蛋白酶(caspase)3和突触后密度蛋白(PSD)95的表达变化。方法每日小鼠腹腔注射氯胺酮(30 mg/kg)、持续3个月建立小鼠氯胺酮长期滥用模型,采用免疫组化及Western blotting检测小鼠氯胺酮长期滥用后caspase-3和PSD-95的表达情况。结果免疫组化结果显示caspase-3表达增强,PSD-95表达减弱。Western blotting结果显示caspase-3活化片段蛋白表达升高,PSD-95蛋白表达下降。结论氯胺酮长期滥用致小鼠脑海马区caspase-3表达增加、PSD-95表达减弱,这一结果揭示了长期滥用氯胺酮所致神经毒性作用的可能机制。

卵巢移植对去势大鼠海马神经元PSD-95表达的影响

目的观察去势大鼠卵巢移植后海马神经元尼氏体数量、突触后密度蛋白95(PSD-95)表达的变化,评价卵巢移植对海马神经元功能的保护作用。方法成年雌性SD大鼠分为对照组,去势组和去势卵巢移植组。对照组行假手术,去势组行双侧卵巢切除,卵巢移植组在切除双侧卵巢后,肾被膜下移植出生3d内乳鼠的卵巢。在去势和移植后的7、14、21和28d,尼氏染色测量海马神经元尼氏面积;免疫组织化学法和Western-blot检测PSD-95蛋白的表达情况。结果对照组见正常海马形态,神经元尼氏体丰富,PSD-95蛋白表达于神经元胞体。去势组随去势时间延长,海马神经元排列散乱,神经元层数减少,海马神经元胞体有皱缩,核有固缩深染。在去势28d时,尼氏体面积,PSD-95累计光密度和蛋白表达量分别减少到对照组的6.42%,33.33%和42.48%(P均<0.05)。卵巢移植组神经元形态随移植时间逐渐接近正常形态,在移植28d时,海马神经元内尼氏体面积,PSD-95累计光密度和蛋白表达量分别恢复到对照组的81.68%,86.67%和88.50%(P>0.05)。结论卵巢去势可损害海马神经元的功能和减少PSD-95蛋白的表达,卵巢移植可以逆转去势所致神经元形态改变,并提高PSD-95蛋白的表达。

神经病理性疼痛引起大鼠空间记忆障碍和内侧前额叶PSD95以及CaMK Ⅱ-Thr^(305)的表达升高

目的:研究神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)对大鼠空间学习记忆功能和内侧前额叶(medical prefrontal cortex,m PFC)钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(alpha calcium/calmodulindependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)磷酸化水平以及突触后密度蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD95)表达的影响。方法:选择经过八臂迷宫训练的雄性健康Wistar大鼠32只,将大鼠随机分为4组,神经病理性疼痛模型组(NP group,NP组,n=8),NP模型m PFC注射生理盐水组(NS组,n=8),NP模型m PFC注射Ca MKⅡ抑制剂KN-93组(KN-93组,n=8)和假手术组(sham operated group,SO组,n=8)。采用坐骨神经慢性压迫损伤制备大鼠NP模型。各组大鼠分别于术后第7、14、21、28和35天测机械缩足阈(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL),第29~35天再次进行八臂迷宫实验以检测大鼠的空间学习和记忆功能。术后第33天采用立体脑穿刺进行药物干预试验,建立NP模型m PFC注射生理盐水组(NS组)和NP模型m PFC注射Ca MKⅡ抑制剂KN-93组(KN-93组)两组实验模型,第35天进行八臂迷宫检测大鼠的空间学习和记忆功能,检测后立即处死大鼠,通过Western Blotting、RT-PCR和免疫荧光方法测定m PFC部位Ca MKⅡ磷酸化位点Thr305磷酸化水平和突触小体内PSD95表达水平。结果:与SO组相比,NP组、NS组和KN-93组的术后痛阈明显降低(P<0.05)。与SO组相比,NP组空间学习和记忆功能减退,PSD95表达升高,Ca MKⅡ-Thr305水平升高(P<0.05)。与NS组比较,KN-93组空间学习和记忆功能改善,PSD95表达降低,Ca MKⅡ-Thr305水平降低(P<0.05)。结论:NP能引起大鼠空间学习和记忆能力减退并使m PFC脑区的PSD95表达水平和Ca MKⅡ磷酸化水平升高。

加减薯蓣丸对血管性痴呆大鼠海马突触再生和可塑性影响的研究

[目的]探讨加减薯蓣丸(Modified Dioscorea Pills,MDP)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠学习记忆功能及海马突触再生与突触可塑性的影响。[方法]40只SD大鼠按照随机数字表分为手术组28只及假手术组12只。手术组采用改良双血管阻断(2-vessels occlusion,2-VO)法建立VD模型,术后按随机数字表再分为药物组12只、模型组11只,假手术组仅分离颈总动脉,不结扎。药物组用MDP浓缩汤剂(10g/kg·d)灌胃45d,模型组和假手术组以0.9%氯化钠溶液灌胃,剂量、疗程同药物组。采用水迷宫行为学实验评价各组大鼠智能差异,免疫组化测定海马CA1区突触素(synaptophysin,SYP)、突触后密度蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)及微管相关蛋白-2(microtubule associated protein-2,MAP-2)表达;透射电镜观察突触超微结构的改变。[结果]与模型组比较,药物组大鼠水迷宫行为学表现明显改善;药物组大鼠海马CA1区SYP、PSD-95、MAP-2蛋白表达明显升高,与模型组及假手术组比较均有统计学差异(P<0.01);电镜下可见模型组大鼠海马CA1区突触间隙模糊,突触前后膜肿胀、空化,难以区分突触前后膜;突触小泡减少,线粒体固缩,内质网脱颗粒。药物组突触数量丰富,结构基本完整,线粒体正常、突触小泡较为丰富。[结论]MDP通过上调突触相关蛋白的表达保护缺血条件下的神经突触,并增强突触可塑性,促进突触再生,从而改善突触的信息传递,是其治疗VD取得临床良效的机制之一。

突触后密度蛋白-95抑制剂对新生儿缺氧缺血性脑损伤动物模型的保护作用

为了揭示突触后密度蛋白-95抑制剂Tat-NR2B9c(NA-1)对新生儿缺氧缺血性脑损伤动物模型的保护作用,本研究将60只7日龄SD大鼠随机分为假手术组、模型组和NA-1组。在建立缺氧缺血性脑损伤模型1 h后,NA-1组按照20μg/g的剂量在大鼠腹膜内注射NA-1溶液,模型组和假手术组注射等体积的生理盐水。TTC染色显示,在建立缺氧缺血性脑损伤大鼠模型24 h后,NA-1处理可显著降低大鼠的脑梗死体积(p<0.05)。此外,建模7 d后,应用NA-1处理的大鼠的悬崖逃避反射、趋地反射和翻正反射时间均显著低于模型组(p<0.05)。Nissl染色显示,建模3 d时,应用NA-1处理的大鼠的存活的神经元数量明显升高(p<0.05)。TUNEL染色结果显示,NA-1处理的大鼠的神经细胞凋亡数量明显低于模型组(p<0.05)。Western blotting显示,NA-1处理可显著降低NA-1组大鼠脑组织的caspase-3蛋白表达水平,并上调大鼠脑组织中p-Akt/t-Akt的蛋白比率(p<0.05)。本研究表明,NA-1能够有效降低新生缺氧缺血性脑损伤大鼠的脑梗死体积,改善大鼠神经行为,抑制神经细胞凋亡。NA-1还可通过激活PI3K/Akt信号通路来提供神经保护作用。

视神经损伤后突触后密度蛋白-95在大鼠视网膜中的分布及表达研究

目的研究视神经损伤后突触后密度蛋白-95（PSD-95）在神经损伤后sD大鼠视网膜中的定位及表达的变化。方法采用钳夹法制作SD大鼠视神经损伤模型。分别于损伤后1d、3d、5d,7d及14d摘除眼球，以正常大鼠视网膜为对照，应用免疫组织化学方法和Westernblot法检测视神经损伤后PSD-95蛋白水平表达变化；免疫荧光双标技术检测PSD-95的细胞定位情况。结果在正常对照组中，视网膜外丛状层有大量的PSD-95存在。视神经损伤后，PSD-95在视网膜中的表达显著减少，损伤后1d，PSD-95在视网膜外层表达量最低，在损伤后7dPSD-95的表达恢复正常水平并维持到损伤后14d。免疫荧光双标染色结果显示视神经损伤后1dPSD-95与视杆细胞的标记物rhodopsin共定位减少，损伤后7d部分恢复。结论视神经钳夹伤导致了视网膜PSD-95表达量的减少和分布的改变，可能是视网膜神经元损伤后自我保护的一种反应。

人参皂苷Rg1对D-半乳糖诱导脑老化小鼠学习记忆功能的影响

背景:脑老化可导致学习记忆功能减退,其机制并不明确。近年研究发现,人参皂苷Rg1可提高阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆能力,其机制可能与其改善突触后密度蛋白95的表达相关。目的:探讨人参皂苷Rg1能否通过脑源性神经营养因子/TrkB信号通路改善D-半乳糖诱导衰老小鼠的学习记忆功能与海马区突触后密度蛋白95的表达。方法:取50只雄性昆仑种小鼠,采用随机数字表法分为5组,每组10只:A组不进行任何处理;B组皮下注射D-半乳糖溶液300 mg/(kg·d)建立脑老化模型;C组造模1 h后每天灌胃给予盐酸多奈哌齐;D组造模1 h后每天灌胃给予人参皂苷Rg1;E组造模1 h后每天灌胃给予人参皂苷Rg1,并且腹腔注射选择性TrkB阻断剂ANA-12(每2 d一次)。持续给药6周后,进行学习记忆能力(旷场实验、新物体识别实验、Morris水迷宫实验)测试、脑组织形态学观察及小鼠海马区突触后密度蛋白95、脑源性神经营养因子的蛋白表达检测。结果与结论:(1)行为学结果显示:B组小鼠学习记忆能力低于A组(P<0.05);C、D组小鼠学习记忆能力高于B组(P<0.05);D组小鼠学习记忆能力低于C组(P<0.05);E组小鼠学习记忆能力低于D组(P<0.05);(2)苏木精-伊红、Nissl染色显示,与A组相比,B组小鼠海马CA1区正常神经元数量减少,尼氏体表达明显减少;与B组相比,C、D组正常神经元数量增多,尼氏小体颗粒明显增加;与D组相比,E组正常神经元数量减少,尼氏小体颗粒明显减少;(3)Western blot检测显示,与A组相比,B组脑源性神经营养因子、突触后密度蛋白95的蛋白表达降低(P<0.05);与B组相比,C、D组脑源性神经营养因子、突触后密度蛋白95的蛋白表达升高(P<0.05);D组小鼠海马脑源性神经营养因子、突触后密度蛋白95的蛋白表达低于C组(P<0.05);与D组相比,E组突触后密度蛋白95的蛋白表达降低(P<0.05),脑源性神经营养因子蛋白表达无明显变化(P>0.05);(4)结果表明,人参皂苷Rg1可改善D-半乳糖诱导的脑老化小鼠神经元损伤与学习记忆能力,并促进海马中突触后密度蛋白95的表达,而脑源性神经营养因/TrkB信号通路可能为其调控机制之一。

低氧预适应对小鼠海马神经元细胞的保护作用及其相关基因

目的:探究低氧预适应(HPC)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)小鼠海马神经元细胞的保护作用及其作用的相关基因。方法:将小鼠海马神经元细胞系HT22细胞分为常氧组、OGD/R组和HPC+OGD/R组。采用MTS法检测细胞活力,RT-qPCR及蛋白免疫印迹技术检测N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)及突触后密度蛋白95(PSD95)基因的表达。结果:与常氧组比较,OGD/R组的细胞活力明显降低。HPC+OGD/R组细胞活力高于OGD/R组,细胞NR2B的表达低于OGD/R组,细胞PSD95的表达高于OGD/R组。结论:HPC对OGD/R的HT22细胞具有保护作用,其作用可能与降低NR2B的表达,升高PSD95的表达有关。