突触后致密物蛋白质95基因沉默及对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为的干预

目的评估小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对突触后致密物蛋白质95(postsynaptic density protein95,PSD-95)基因的沉默效率及PSD-95基因沉默对谷氨酸诱导的神经细胞毒性与信号转导的影响,观察用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默大鼠脊髓PSD-95基因治疗神经病理性疼痛的效果。方法用神经母细胞瘤/大鼠神经胶质细胞瘤杂交瘤细胞(NG108-15细胞)筛选大鼠PSD-95基因特异的siRNA,并用谷氨酸刺激PSD-95基因沉默的NG108-15细胞,检测细胞生长活力与信号通路蛋白质表达与磷酸化的改变。建立大鼠神经病理性疼痛的坐骨神经慢性压迫(chronic constrictioni njury,CCI)模型,预防性及治疗性鞘内给予PSD-95siRNA,留取脊髓标本,实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)分析PSD-95 mRNA表达水平,并测定大鼠后足机械痛阈及热痛阈的变化。结果序列特异性最高的siRNA在最佳转染条件下使PSD-95基因表达水平下降91.5%;PSD-95基因沉默既可增强神经细胞对谷氨酸毒性的耐受能力,又可抑制Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白质激酶IIα(CaMKIIα)异构型磷酸化。正常大鼠鞘内注射PSD-95siRNA可降低大鼠脊髓背角PSD-95mRNA的表达水平38%(P<0.05),但对痛阈无显著影响;CCI模型大鼠鞘内注射PSD-95 siRNA可明显缓解神经病理性疼痛。结论 PSD-95基因在神经病理性疼痛的发生中起重要作用。鞘内注射PSD-95siRNA可以显著缓解CCI模型大鼠机械性和热痛觉过敏,PSD-95 siRNA可能成为有效控制神经病理性疼痛的基因治疗方法。

睾酮对β-淀粉样蛋白1-42寡聚体联合去势对大鼠脑内突触后膜致密物-95表达的影响

目的:研究睾酮对β-淀粉样蛋白(Aβ) 1-42寡聚体联合去势大鼠突触可塑性的影响.方法:采用双侧海马CA1区分别注射Aβ1-42寡聚体10 μg联合去势,建立阿尔茨海默病(AD)样动物模型,大鼠随机分为模型对照组、睾酮组、氟他胺组、氟他胺+睾酮组,另设空白对照组.尼氏染色计数各组正常锥体细胞;免疫组织化学和免疫印迹检测各组大鼠脑内突触后膜致密物-95(PSD-95)的表达量.结果:睾酮组细胞计数、PSD-95表达量较高,与空白对照组无差异,但与其余3组差异均存在统计学意义;氟他胺组、氟他胺+睾酮组、模型对照组中神经细胞数量与PSD-95表达量组间均无差异.结论:睾酮对突触可塑性的作用是通过增加细胞存活率与雄激素受体途径实现的.

脑血流低灌注对大鼠突触后致密物结构及PSD-95蛋白表达的影响

目的研究脑血流低灌注对大鼠学习记忆、脑组织突触后致密物(postsynaptic density,PSD)超微结构及PSD-95蛋白表达的影响。方法利用双侧颈总动脉永久性结扎制备SD大鼠脑血流低灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组和脑血流低灌注模型组。采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆情况。采用透射电镜结合Image Pro Plus图像分析系统定量分析大鼠海马突触数量、PSD长度和厚度。采用免疫组化观察大鼠脑组织PSD-95的表达。结果脑血流低灌注大鼠空间参考记忆及工作记忆能力减退,在第2至4天游泳训练时间段,搜寻隐藏平台路径较假手术组明显增加(P<0.05);撤离平台后,在原平台象限游泳时间及路径较假手术组降低,准确穿越原平台所在位置次数减少(P<0.05);当平台移动到第Ⅱ、Ⅳ象限时,搜索移动平台路径较假手术组明显延长(P<0.05)。与假手术组比较,脑血流低灌注大鼠海马突触数量明显减少,PSD长度变短,厚度变薄(P<0.05);海马CA1区、丘脑前内侧核、颞叶皮层PSD-95积分吸光度降低(P<0.05)。结论脑血流低灌注所致学习记忆功能减退与海马突触后致密物结构损伤、PSD-95蛋白表达下降有关。

突触后致密物蛋白95与疼痛

突触后致密物(PSD)是位于中枢神经系统突触后膜的特殊结构,它是由一系列细胞骨架蛋白与受体、激酶等传递突触信号相关分子结合形成,包括N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体、神经型一氧化氮合酶(n NOS)等。近年来研究发现,作为PSD中一种重要的结构蛋白——PSD蛋白95(PSD-95)通过与NMDA受体、n NOS的相互作用参与了疼痛信息的处理过程。特异性针对PSD-95的抑制剂可表现出显著的镇痛作用。

慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损及海马神经元突触素和突触后致密物95表达的变化

目的 了解慢性捆绑应激对大鼠学习记忆能力的影响及可能的神经解剖学机制。方法 将大鼠分为应激组和正常对照组 ,应激组大鼠每天捆绑 6h共 2 1d ,然后用Y迷宫对 2组大鼠进行行为检测 ,运用免疫组织化学方法 ,观察 2组大鼠海马突触素和突触后致密物 95 (PSD 95 )的表达 ,并用计算机图像分析仪对免疫反应结果进行处理。结果 应激组大鼠学习记忆能力明显受损 (P <0 0 5 ) ;其海马CA3 区突触素和PSD 95免疫阳性产物较对照组明显减少 (P <0 0 1)。结论 慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损可能与其海马神经元突触素和PSD 95的表达减少有关。

尼莫地平对癫痫大鼠海马突触后致密物95表达的影响

目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(Pen-tylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马突触后致密物95(postsynaptic density95,PSD-95)表达的影响。方法动物分为正常对照组、PTZ组和NIM组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Morris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,Western blot及反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠海马PSD-95蛋白和PSD-95 mRNA的表达。结果PTZ致痫组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马PSD-95蛋白水平及PSD-95 mRNA表达较对照组明显减少(P<0·05);与PTZ组比较,NIM组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马PSD-95蛋白水平及PSD-95 mRNA表达均升高(P<0·05)。结论PTZ点燃癫痫大鼠存在空间学习记忆受损,可能与PSD-95表达减少有关;NIM可以提高PSD-95的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力。

戊四氮诱导癫痫大鼠空间学习记忆受损及海马突触后致密物95表达减少

目的探讨戊四氮诱导癫痫对大鼠空间学习记忆功能的影响及海马突触后致密物95(PSD-95)的表达变化。方法戊四氮(PTZ)腹腔注射诱导慢性癫痫(CEP)模型,采用Morris水迷宫对两组大鼠进行行为学检测,运用免疫组织化学方法观察海马CA1、CA3区PSD-95的表达,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠海马PSD-95mRNA的表达。结果癫痫组大鼠空间学习记忆能力受损;其海马CA1、CA3区PSD-95免疫阳性产物较对照组明显减少(P<0.05),同时伴有海马PSD-95mRNA表达下降(P<0.01)。结论戊四氮诱导癫痫大鼠空间学习记忆受损可能与海马神经元PSD-95的表达减少有关。

戊四氮点燃癫痫大鼠空间学习记忆改变及海马突触素、突触后致密物PSD-95表达的变化

目的探讨戊四氮点燃癫痫对大鼠空间学习记忆的影响及可能的分子机制。方法戊四氮(pentylenetet-razol,PTZ)点燃建立慢性癫痫(chronic epileptic,CEP)模型,Morris水迷宫进行行为学检测,免疫组织化学方法观察大鼠海马CA1、CA3区突触素(synaptophysin,P38)和突触后致密物95(postsynaptic density 95,PSD-95)的表达,并用计算机图像分析系统对免疫反应结果进行处理。结果水迷宫试验检测癫痫组大鼠空间学习记忆能力受损;免疫组化结果表明其海马CA1、CA3区P38和PSD-95免疫反应产物较对照组明显减少(P<0.01,P<0.05)。结论戊四氮点燃癫痫大鼠伴有学习记忆功能减退,其海马神经元P38和PSD-95的表达减少可能参与了空间学习记忆受损。

血管性痴呆小鼠海马突触后致密物95表达的研究

目的:探讨血管性痴呆(vascular dementia,VD)小鼠海马突触后致密物95(postsynaptic density95,PSD-95)表达的变化。方法:双侧颈总动脉线结,反复缺血-再灌注法制备小鼠VD模型,跳台试验观测其行为学改变,免疫组织化学方法观察海马齿状回PSD-95的表达。结果:模型组小鼠学习、记忆成绩下降(P<0.05),其海马齿状回(dentategyrus,DG)PSD-95免疫阳性产物较对照组明显减少(P<0.05)。结论:VD模型小鼠学习记忆能力下降可能与海马PSD-95的表达减少有关。

颞叶癫痫大鼠突触后致密物中差异性表达蛋白的筛选和鉴定

目的筛选和鉴定颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)大鼠模型突触后致密物(postsynaptic density,PSD)中差异性表达的蛋白质。方法建立氯化锂-毛果芸香碱TLE大鼠模型,收集TLE组和健康对照组大鼠新鲜全脑组织,联合应用蔗糖密度梯度离心和膜顺序提取技术提取PSD蛋白质,进行双向凝胶电泳,通过PDQuest图像分析软件筛选TLE组差异性表达的蛋白质点,并应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对其进行鉴定。结果与健康对照组比较,TLE组存在70个差异性表达PSD蛋白质点,其中表达上调的蛋白质主要包括果糖二磷酸醛缩酶、肌酸激酶和热休克蛋白27,表达下调的蛋白质主要包括微管蛋白、肌动蛋白、中间丝蛋白α和脯氨酰顺反异构酶。结论TLE大鼠PSD中存在差异性表达蛋白质,其异常表达可能与TLE的形成、发作或神经元保护有关。

电针对SAMP8小鼠皮质及海马突触素和突触后致密物-95表达的影响

目的观察电针对SAMP8小鼠皮质及海马突触素(SYN)和突触后致密物-95(PSD-95)表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的介入时机。方法 SAMP8小鼠48只随机分为模型组、3月龄电针组、6月龄电针组和9月龄电针组,每组12只,选取同龄正常老化SAMR1小鼠12只为对照组。电针组电针"百会""大椎""肾俞",频率2 Hz,每日1次,8 d为1个疗程,疗程间隔2 d,共3个疗程。各组均在10月龄取材,选择皮质及海马区,采用免疫组化和Westernblot检测突触相关蛋白SYN、PSD-95的表达。结果与对照组比较,模型组小鼠皮质及海马SYN和PSD-95蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,各电针组小鼠皮质及海马SYN、PSD-95蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与3月龄电针组比较,6月龄电针组、9月龄电针组皮质及海马SYN、PSD-95蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论电针可促进SAMP8小鼠皮质及海马SYN、PSD-95蛋白的表达,改善突触功能,且早期电针治疗效果最明显。

电针对不同阶段SAMP8小鼠学习记忆能力及海马区突触素和突触后致密物-95表达的影响

目的观察电针对不同阶段SAMP8小鼠学习记忆能力及海马区突触素(SYN)和突触后致密物-95(PSD-95)表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的最佳时机。方法SAMP8小鼠48只随机分成模型组、3月龄电针组、6月龄电针组和9月龄电针组,每组12只,同龄正常老化SAMR1小鼠12只为对照组。电针组均选取“百会”“大椎”“肾俞”,电针频率为2 Hz,每日1次,8 d为1个疗程,每个疗程间隔2 d,共3个疗程。运用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,免疫组化和Western blot检测海马突触相关蛋白SYN和PSD-95的表达。结果与对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长,原平台象限停留时间明显缩短,跨越原平台次数明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),海马区SYN和PSD-95蛋白表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,各电针组小鼠逃避潜伏期明显缩短,原平台象限停留时间明显延长,跨越原平台次数明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),海马区SYN和PSD-95蛋白表达均明显升高(P<0.01),且均以3月龄电针组最显著(P<0.05,P<0.01)。结论电针能提高SAMP8小鼠学习记忆能力,促进海马区SYN、PSD-95蛋白的表达,改善突触功能。

雷公藤内酯醇对慢性脑缺血模型大鼠海马突触素和突触后致密物95的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对慢性脑缺血(CCI)模型大鼠海马神经元突触素(SYN)和突触后致密物95(PSD-95)表达的影响。方法取30只雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组、治疗组,每组10只。模型组和治疗组采用双侧颈总动脉永久性结扎法(2-VO)建立CCI模型。对照组大鼠只暴露双侧颈总动脉。治疗组大鼠每日腹腔注射雷公藤内酯醇0.4 mg/kg,连续注射28 d。采用免疫组织化学法和RT-PCR法检测各组大鼠海马SYN和PSD-95蛋白及mRNA的表达。结果免疫组织化学染色结果显示,治疗组大鼠海马CA1区分子层SYN阳性产物数量和平均光密度明显高于模型组;治疗组大鼠海马CA1区锥体层PSD-95阳性细胞数和平均光密度值明显高于模型组。RT-PCR结果显示,治疗组大鼠海马SYN和PSD-95 mRNA含量较模型组增加。结论雷公藤内酯醇能促进大鼠海马SYN和PSD-95蛋白及mRNA的表达。

健脑益智汤对海马神经元突触后致密物-95表达的影响

目的 观察健脑益智汤对慢性复合应激大鼠海马突触后致密物-95(PSD-95)表达的影响。方法 应用多因素的慢性复合应激制作Wistar大鼠学习记忆障碍的动物模型,应激组大鼠每天给予健脑益智汤灌胃共4周,然后用Y迷宫测定所有大鼠的学习记忆成绩,运用免疫组织化学方法观察海马的PSD-95的表达。结果 健脑益智汤能显著改善大鼠因慢性复合应激所致学习记忆障碍。结论 健脑益智汤可以防止大鼠海马PSD-95的丢失从而改善学习记忆能力。

突触后致密物-95研究新进展

突触后致密物．95（PSD-95）是膜相关的鸟苷酸激酶（MAGUK）家族的一员，是突触的支架蛋白与复杂的蛋白一蛋白作用区。PSD-95的结构中包含了3个PDZ区，一个SH3区或ww基序（两个保守的色氨酸残基）和一个同源的鸟苷酸（gGK）区，其中PDZ结构域在不同膜蛋白中具有不同结构。

银杏叶提取物对血管性痴呆大鼠模型学习记忆及PSD-95表达的影响

目的观察银杏叶提取物对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力和海马组织PSD-95蛋白的影响。方法将大鼠随机分为模型组,银杏叶提取物干预组,假手术组和正常组,造模14 d后用水迷宫测定各组大鼠的学习、记忆功能,将大鼠断头取脑后,用TUNEL法检测海马组织神经元情况,并用蛋白印迹方法观察大鼠海马PSD-95蛋白表达。结果模型组大鼠存在记忆障碍,而银杏叶提取物干预组大鼠学习记忆能力明显改善,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠海马组织有大量凋亡神经元,与假手术组及正常组相比有明显统计学意义(P<0.01),与银杏叶提取物干预组相比也有显著差异(P<0.05)。银杏叶提取物干预组海马CA1及CA3区PSD-95蛋白明显增加,与模型组比较有统计学意义(P<0.01)。结论银杏叶提取物明显促进VD大鼠海马组织PSD-95蛋白表达,抑制海马神经元凋亡,改善VD大鼠学习记忆能力,对VD大鼠有显著的治疗作用。

知母总皂苷对老年大鼠海马突触相关蛋白表达的影响

有些人认为AD样痴呆是正常脑衰老的结果,皮质失联络是其重要基础。在20～100岁的正常衰老过程中,新皮质突触密度的下降趋向于（但未达到）AD发病的水平,如果出生时突触有缺陷或缺少教育,将引起突触过早下降到出现痴呆的水平。

颞叶癫痫相关突触后致密物蛋白质的蛋白质组学筛选研究

目的筛选颞叶癫痫（TLE）相关突触后致密物（PSD）蛋白分子。方法建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫痫大鼠模型；收集颞叶癫痫组（TLE组）、非颞叶癫痫组（非TLE组）以及正常对照组（Norm）3组的新鲜全脑组织，联合应用蔗糖密度梯度离心和膜顺序提取技术提取PSD；进行双向凝胶电泳，并通过PDQuest图像分析软件比较分析，筛选TLE组特异性和差异性表达的蛋白质点；选取部分差异蛋白质点进行取MALDI—TOF—MS质谱鉴定；应用Western验证部分所鉴定蛋白质在PSD中的表达状况。结果与Norm和非TLE组比较，TLE组中存在40个差异表达蛋白质点，表达上调的主要有热休克蛋白27（HSP-27）、果糖二磷酸醛缩酶（FBA）、肌酸激酶（CK）、甲状腺受体相互作用蛋白6（TRIP6）、髓鞘碱性蛋白S（MBP）、LIM结构域（LIM）；表达下调的主要有细胞骨架蛋白、肽酰-脯氨酰-顺反式异构酶（PPIase）、分选连接蛋白3（SNX3）、乌头酸水合酶（ACO）、甘油醛三磷酸脱氢酶（GAPDH）、琥珀酸辅酶A连接酶（SCOAL）。HSP27和微管蛋白仅、SNX3在TLE、非TLE和Norm3组PSD中均免疫染色阳性。结论TLE组PSD蛋白质差异性表达可能是脑损伤后可塑性反应的结果，但其表达量改变的程度可能与颞叶癫痫形成有关，可视为促／抗TLE形成的重要候选分子。

电针“百会”“神庭”对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和海马突触结构与相关蛋白表达水平的影响

目的观察电针“百会”“神庭”对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠学习和记忆功能的影响,并从突触结构及突触相关蛋白表达水平的角度揭示其作用机制。方法将35只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针穴位组、电针非穴位组和奥拉西坦组,每组7只。采用改良双侧颈动脉结扎模型,电针穴位组大鼠选择“百会”“神庭”两穴治疗,电针非穴位组大鼠选择固定非穴位刺激,每次电针30 min,每日1次,连续干预14 d;奥拉西坦组大鼠选择腹腔注射奥拉西坦,50 mg/kg,每日1次,连续14 d。采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习和空间记忆能力;透射电子显微镜观察各组大鼠海马CA1区突触结构;Western blot检测各组大鼠海马突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD95)、GluA1、GluN2B和磷酸化GluN2B蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠学习期逃避潜伏时间延长,测试期跨越平台次数减少,目标象限停留时间显著缩短,大脑质量显著增加,海马CA1区突触结构数明显减少,海马PSD95、GluA1、GluN2B和磷酸化GluN2B蛋白表达水平均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针穴位组大鼠的学习期逃避潜伏时间缩短,测试期跨越平台次数增加,目标象限停留时间延长,大脑质量降低,CA1区突触结构数增多,海马PSD95、GluA1、GluN2B和磷酸化GluN2B蛋白表达水平增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论电针“百会”“神庭”能改善VD大鼠的学习记忆功能,改变海马突触结构,分子机制可能和增加突触蛋白PSD95、GluA1和GluN2B的蛋白表达水平相关。

人参皂苷对癫痫大鼠行为学和突触蛋白的影响

目的探讨人参皂苷Rb1对癫痫大鼠学习记忆及海马kalirin-7和突触后致密物95(PSD-95)表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为4组:对照组、模型组、Rb1低、高剂量组。模型制备成功后,采用Morris水迷宫检测其行为学,电镜法观察海马CA1区突触超微结构,Western blot法检测海马kalirin-7和PSD-95的表达。结果模型组大鼠的末次逃避潜伏期、穿台次数、海马CA1区PSD厚度、kalirin-7和PSD-95表达[分别为(11.2±1.6)s、(4.9±1.3)次、(25.9±2.4)nm、(0.32±0.03)、(0.95±0.08)];与对照组[分别为(4.5±0.8)s、(10.9±2.1)次、(34.1±3.7)nm、(0.86±0.07)、(1.94±0.13)],比较均具有显著性差异(P<0.05)。而人参皂苷Rb1干预组剂量依赖性地逆转了上述的异常变化(P<0.05)。结论人参皂苷Rb1可能通过上调海马kalirin-7和PSD-95蛋白的表达来改善癫痫大鼠的认知功能障碍。