鱼藤酮对PC12细胞多巴胺相关转运体的影响

探讨鱼藤酮对PC12细胞多巴胺转运体(DAT)和突触囊泡单胺转运体2(VMAT2)的影响。我们将PC12细胞经不同浓度的鱼藤酮处理24h后,利用HE染色观察PC12细胞的形态学变化;利用免疫组织化学法观察不同浓度的鱼藤酮对PC12细胞酪氨酸羟化酶(TH),DAT和VMAT2蛋白表达的影响;利用RT-PCR法检测鱼藤酮对PC12细胞DAT和VMAT2基因表达的影响;通过生化实验检测Na+/K+-ATP酶活性。实验结果显示:鱼藤酮浓度为1.0mmol/L时,PC12细胞出现了明显的形态学改变,胞浆染色不均、胞体呈圆形、细胞核形状不规则、核浆比例增加;TH蛋白阳性细胞数量减少;DAT蛋白和基因表达增加;VMAT2蛋白和基因表达降低,与对照组比较均具有统计学意义(P<0.05),且随着鱼藤酮浓度的增加,变化趋势更为明显。鱼藤酮浓度为1.0mmol/L时,Na+/K+-ATP酶活力与对照组比较显著降低(P<0.05)。因此,DAT和VMAT2的表达异常可能参与了毒性作用。

鱼藤酮对大鼠中脑神经元多巴胺转运、储存和代谢的影响

目的探讨鱼藤酮对多巴胺(DA)神经元选择性毒性作用的可能机制。方法大鼠背部sc鱼藤酮(1.0或1.5mg.kg-1.d-1)28d,观察大鼠的外观和行为变化。然后麻醉处死大鼠,取中脑黑质组织。分别用免疫组织化学法、Western蛋白印迹法和RT-PCR法检测鱼藤酮对大鼠中脑黑质DA神经元突触囊泡单胺转运体(VMAT2)表达的影响;以卞胺为底物进行比色,检测组织单胺氧化酶(MAO)的活性;高效液相色谱-荧光检测器流速梯度法测定黑质组织内DA及其代谢产物3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量。结果注射鱼藤酮28d后,大鼠发生外观和行为改变,出现类帕金森病症候群特征;中脑黑质DA神经元VMAT2蛋白免疫深染的细胞数量减少;鱼藤酮1.0和1.5mg.kg-1组VMAT2蛋白和基因表达与正常对照组比较明显降低,MAO活性分别从对照组的(23.6±7.6)升高至(37.8±5.0)和(40.5±4.3)kU.h-1.g-1蛋白,均具有统计学意义;实验组大鼠中脑黑质组织内DA及其代谢产物DOPAC和HVA含量明显减少。结论鱼藤酮可抑制大鼠中脑黑质DA神经元VMAT2的表达,增强DA代谢相关酶MAO的活性,进而影响DA的转运、储存和代谢,这可能是鱼藤酮DA神经元选择性毒性作用机制之一。