“突触引物”实时荧光PCR检测端粒酶活性

为建立一种简便的端粒酶测定方法 ,首先采用高灵敏的核酸染料SYBRGold染色代替放射自显影 ,建立了简便可靠的扩增产物显示方法 .进而合成了端粒酶扩增产物的模拟产物 ,考察了突触引物检测的可行性和灵敏度 .在此基础上 ,建立了检测端粒酶活性实时荧光PCR .由于突触引物可以有效的降低非特异扩增 ,有效解决了端粒酶活性检测中的非特异产物干扰 。

用荧光双链引物特异扩增并定量核酸

描述了一种利用特殊的双链引物———突触引物 ,用于核酸扩增的特异定量检测 .在传统的引物的 5’端标记荧光物质 ,而在引物的互补序列的 3’端标记荧光淬灭剂以封闭其延伸 .二者杂交即成双链突触引物 .在制备PCR反应混合物阶段以及加热的初期 ,突触引物保持稳定的双链结构而不能引导扩增 ,在退火阶段 ,突触引物部分解链导致引物延伸 ,荧光物质与淬灭剂分开而产生荧光 .利用人 β珠蛋白基因对此方法进行了验证 .这种可自行退火的荧光引物不仅简单地实现了实时扩增 。