调补心肾方通过活化PI3K/Akt/mTOR通路促进阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性相关蛋白的合成

目的探讨调补心肾方(党参、制首乌、枸杞子、黄芪等)对阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性的影响及机制。方法取5月龄雄性野生型(WT)小鼠和5xFAD转基因小鼠各18只,分别随机分为对照组(0.9%NaCl)、调补心肾方组(颗粒剂,4.18 g·kg^(-1))、安理申组(盐酸多奈哌齐,0.625 mg·kg^(-1)),每组6只。按照上述分组灌胃给药,每日1次,共60 d。采用透射电镜观察小鼠海马组织超微结构;Western Blot法检测小鼠皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1、NMDAR1、p-CaMKⅡa、CaMKⅡa、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果与WT对照组比较,5xFAD对照组小鼠海马CA1区突触的超微结构不规则,线粒体萎缩、减少,线粒体嵴断裂、消失,突触膜弯曲不规则,突触囊泡减少,突触后致密物(PDS)变薄甚至断裂;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.05)。与5xFAD对照组相比较,5xFAD调补心肾方组小鼠海马CA1区突触的超微结构有明显变化,线粒体数量增加,突触囊泡增多,突触膜完整,突触后致密物有增厚现象;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论调补心肾方可能通过活化PI3K/Akt/mTOR通路,促进突触可塑性相关蛋白合成,进而改善AD的认知功能障碍。

溃疡性结肠炎大鼠结肠肌层突触小体相关蛋白25的表达变化

目的:观察溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠肌层分子量为25 kDa的突触小体相关蛋白(synaptosomal associated protein of 25kDa,SNAP-25)的表达情况.方法:应用2,4-二硝基苯磺酸(2,4-dinitrobenzene sulfonic acid,DNBS)灌肠的方法制作大鼠UC模型,免疫组织化学评估结肠肌层SNAP-25标记的神经轴突的密度,Western blot半定量检测肌层SNAP-25含量,HE染色法评价结肠炎症状态,生化检测方法评价结肠匀浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力及丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量的变化,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测白介素1円(interleukin1円,IL-1円)含量的变化.结果:在DNBS诱导的UC大鼠,结肠肌层中SNAP-25标记的轴突密度减小为对照的22.60%(23.76个/百个平滑肌细胞±13.24个/百个平滑肌细胞vs 5.37个/百个平滑肌细胞±1.96个/百个平滑肌细胞,P<0.01),肠道肌层SNAP-25蛋白表达量减少为对照组的34.31%(P<0.01).与对照组相比,结肠组织中MPO活力增高(1.91 U/g wet weight±0.58U/g wet weight vs 0.99 U/g wet weight±0.21U/g wet weight,P<0.01),SOD活力显著降低(4.11 U/mg protein±1.80 U/mg protein vs 9.01U/mg protein±2.17 U/mg protein,P<0.01),MDA含量增高(1.72 nmol/mg protein±0.28nmol/mg protein vs 1.11 nmol/mg protein±0.27 nmol/mg protein,P<0.01),IL-1円表达量增高(181.51 pg/mg protein±55.30 pg/mg protein vs 84.27 pg/mg protein±42.27 pg/mg protein,P<0.01).结论:DNBS诱导的UC大鼠的结肠肌层SNAP-25蛋白表达量明显减少,肠道组织炎症及氧化应激水平增高可能是其重要原因之一.

远志皂苷元对APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白表达的影响

目的观察远志皂苷元(TEN)对APP/PS1双转基因小鼠突触相关蛋白PSD-95和Shank-1表达的影响。方法 50只转基因小鼠随机分为模型组、多奈哌齐组、TEN低剂量组、TEN中剂量组、TEN高剂量组5组。同月龄C57BL/6J小鼠10只作为对照,分别给予多奈哌齐和不同剂量的TEN,对照组和模型组给予等剂量的双蒸水。3个月后,用免疫组织化学和Western blot方法检测突触相关蛋白PSD-95和Shank-1的表达。结果与对照组比较,APP/PS1双转基因小鼠海马PSD-95和Shank-1阳性细胞数明显减少,PSD-95和Shank-1蛋白表达降低;TEN各剂量组PSD-95和Shank-1阳性细胞数及蛋白表达较模型组均明显增加(P<0.01)。结论 TEN能够增加APP/PS1双转基因小鼠PSD-95和Shank-1的表达,对突触的功能和可塑性具有改善作用。

一个新的人突触相关蛋白基因的生物信息学分析

目的 运用抑制消减杂交 (SSH)已从氧化型低密度脂蛋白处理的单核细胞源性泡沫化细胞中克隆差异表达基因 ,其中两个基因片段FRG4和FRG14经BLAST检索无同源序列 ,Genbank登录号为 :FRG4 [ABI 5 0 2 5 86 ]和FRG14 [AccessionBI 5 0 2 5 87]。通过基于文库cDNA基础热启动PCR快速扩增cDNA末端技术 ,获得FRG4全长cDNA序列。有关该基因编码蛋白的研究很少 ,与脂蛋白代谢和泡沫细胞形成、凋亡的关系没有报道。本文利用生物信息学技术对此进行研究 ,为进一步深入研究其表达和功能奠定基础。方法与结果 利用生物信息学软件通过互联网上核酸和蛋白质数据库。对泡沫化相关基因FRG4进行基因组分析、染色体定位分析、理化特性分析、细胞内定位分析和功能结构域预测。发现FRG4的开放阅读框 (ORF)是从第 6 2个碱基到第 112 0个碱基 ,编码 35 2个氨基酸 :FRG4编码的氨基酸序列与人类的突触相关蛋白 (Homosapienssynapseassociatedprotein 1,SYAP1)有高度同源性 (99% ) ;FRG4的染色体定位分析显示定位在X染色体的短臂 2区 2带 2亚带 2次亚带 ;根据内含子、外显子剪切规律分析 ,FRG4基因由 9个外显子、8个内含子组成 ;人FRG4蛋白质氨基酸序序列与小鼠、果蝇的氨基酸序列进行多序列同源性比较 ,一致率分别为 70 %和 5 8%

APP转基因小鼠脑内突触及相关蛋白的改变以及淫羊藿黄酮的干预作用

目的：阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是一种进行性中枢神经系统变性疾病，其发病机制和病理过程尚不十分清楚，因而缺乏针对关键靶点的有效治疗药物。我们以往研究发现，淫羊藿黄酮具有一定神经保护作用。

突触小体相关蛋白SNAP25的原核表达、纯化及鉴定

目的:克隆突触小体相关蛋白(SNAP25)基因,原核表达、纯化并鉴定SNAP25蛋白。方法:PCR扩增SNAP25基因,克隆至表达质粒pTIG-Trx,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western印迹分析肉毒神经毒素BoNT/A轻链对该蛋白的裂解情况。结果:构建了pTIG-SNAP25表达质粒,经IPTG诱导表达,目的蛋白占全菌蛋白的26.2%,表达形式为可溶性表达,表达量达115.4mg/L,纯化后蛋白纯度达95%以上;经SDS-PAGE及Western印迹分析,SNAP25蛋白可被BoNT/A轻链特异降解。结论:克隆了SNAP25基因,在原核系统中表达、纯化并鉴定了重组SNAP25蛋白。

突触相关蛋白25在成年期甲状腺功能减退症大鼠额叶内表达变化及甲状腺素治疗效应

目的研究成年期甲状腺功能减退症(甲减)大鼠额叶内突触相关蛋白25(SNAP-25)的表达及甲状腺素替代治疗后的恢复状况,探讨甲减脑损伤及恢复的分子基础。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)建立成年期大鼠甲减模型,采用放射免疫法测定甲减组、常规剂量甲状腺素替代治疗组、大剂量甲状腺素替代治疗组、健康对照组大鼠的血清甲状腺素水平,免疫组织化学方法分析四组大鼠额叶内SNAP-25蛋白的表达情况。结果与健康对照组相比,甲减组大鼠血清T3、T4水平显著减低(P<0.02);常规剂量(5μg.kg-1.d-1)替代治疗后,血清T3、T4恢复至正常水平。甲减组额叶I、II、III、IV、V层SNAP-25蛋白的表达水平显著高于健康对照组(P<0.01);常规剂量替代治疗组SNAP-25表达水平与健康对照组比较未见明显差异;与甲减组相比,大剂量(20μg.kg-1.d-1)替代治疗组SNAP-25表达水平在额叶各层显著减低(P<0.05)。结论成年期甲减大鼠额叶SNAP-25蛋白表达增多,常规及大剂量甲状腺素替代治疗后均可降低该蛋白表达,大剂量替代治疗后SNAP-25表达水平更接近正常。

人突触小体相关蛋白25单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备抗人突触小体相关蛋白25(SNAP25)的鼠源单克隆抗体。方法:利用大肠杆菌表达SNAP25蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备杂交瘤细胞,筛选针对SNAP25的阳性杂交瘤细胞株,鉴定抗体亚型;用杂交瘤细胞株制备腹水单抗,纯化后利用SDS-PAGE检测抗体纯度。结果:表达并纯化得到纯度大于90%的SNAP25蛋白,免疫小鼠后经2轮筛选得到12株阳性杂交瘤细胞株,其中抗体重链包括IgG1、IgG2型,轻链大部分为κ链;选择具有相对较高抗原结合活性的14号杂交瘤细胞株制备腹水,纯化后得到纯度大于90%的抗体。结论:获得1株高纯度的针对SNAP25的鼠源单克隆抗体,为肉毒毒素的检测奠定了基础。

血管壁细胞人突触相关蛋白的表达

目的 目前尚无文献报道人突触相关蛋白与脂蛋白代谢和泡沫细胞形成、凋亡的关系。本文研究氧化型低密度脂蛋白致THP 1细胞泡沫化过程中人突触相关蛋白基因的表达 ,用制备的兔抗人突触相关蛋白多克隆抗体检测其在血管细胞及肝癌细胞系HepG2细胞中的表达。方法 THP 1细胞用 16 4 0培养 ,PMA处理诱导其向巨噬细胞分化 ,实验组加氧化型低密度脂蛋白(终浓度 80mg/L) ,对照组不加氧化型低密度脂蛋白。根据人突触相关蛋白基因序列设计引物 ,以看家基因GAPDH为内对照 ,反转录—聚合酶链反应半定量检测人突触相关蛋白基因的表达。用特异的抗人突触相关蛋白的多克隆抗体 ,采用免疫组织化学或流式细胞术检测人突触相关蛋白在人内皮细胞、平滑肌细胞、THP 1细胞和肝癌细胞系HepG2细胞中的表达。结果 人突触相关蛋白基因在氧化型低密度脂蛋白致THP 1细胞泡沫化过程中表达增高 ,与抑制消减杂交结果一致。免疫组织化学或流式细胞术检测 ,人突触相关蛋白在人内皮细胞、平滑肌细胞、THP 1细胞和肝癌细胞系HepG2细胞中均有表达 ,主要定位在细胞质 ,与该基因的生物信息学分析结果一致。结论 人突触相关蛋白在多种细胞中均有表达 ,人突触相关蛋白基因在单核细胞泡沫化过程中表达增高 ,可能与单核细胞源性泡沫化细胞形成?

突触小体相关蛋白-25在神经退行性疾病中的研究进展

突触功能障碍是神经退行性疾病中神经退行性变的重要病理机制之一,检测突触蛋白生物标志物在判定疾病进展及监测疾病修饰药物的临床疗效中具有重要价值。突触小体相关蛋白-25是突触前质膜蛋白,能准确反映神经退行性疾病中发生的突触损伤,是目前十分有前景的评估突触功能的生物标志物。本文现围绕突触小体相关蛋白-25的基本特征、功能及其在阿尔茨海默病、帕金森病、路易体相关痴呆等神经退行性疾病中的研究进展进行综述,以期为在临床前阶段早期识别高危患者的病理改变、监测患者病情进展以及开发新的治疗靶点提供参考依据。

安神定志灵对大鼠脑突触体多巴胺释放相关因子表达的影响

目的研究安神定志灵对突触相关蛋白25(SNAP25)、突触融合蛋白1a(Synataxin 1a)的调控作用,从多巴胺释放途径探讨安神定志灵治疗注意力缺陷多动障碍(ADHD)的作用机制。方法自发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rats,SHR)随机分为模型组,盐酸哌甲酯组(10.5μg·kg^(-1)),安神定志灵低、中、高剂量(6.75,13.35,26.70 g·kg^(-1))组,每组10只,另取10只正常血压大鼠(Wistar-Kyoto rats,WKY)作为正常组,连续灌胃给药4周。采用Percoll密度梯度离心法制备脑突触体;采用Western Blot法检测突触体SNAP25、Synataxin 1a蛋白表达;Real-time PCR法检测SNAP25、Synataxin 1a m RNA表达;免疫组化法检测纹状体SNAP25、Synataxin 1a阳性细胞表达。结果与正常组比较,模型组大鼠脑突触体SNAP25及Synataxin 1a的蛋白、m RNA、阳性细胞表达量均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组的SNAP25、Synataxin 1a蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05,P<0.01);安神定志灵低、中剂量组的Synataxin1a m RNA相对表达量显著升高(P<0.05,P<0.01),安神定志灵中、高剂量组的SNAP25 m RNA相对表达量亦显著上调(P<0.01);安神定志灵低、中剂量组的Synataxin 1a阳性细胞表达量显著升高(P<0.01),安神定志灵中、高剂量组的SNAP25阳性细胞表达量亦显著升高(P<0.01)。结论安神定志灵能够显著改善SHR大鼠脑内SNAP25、Synataxin 1a的表达,其治疗ADHD的药效机制可能与调控多巴胺释放因子相关。

帕金森病相关蛋白α-synuclein与轴突病变

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种进行性神经退行性疾病，其发病率在50岁以上人群中呈指数级上升。突触核蛋白（α-synuclein）编码基因SNCA是第一个被鉴定的家族性PD致病基因，同时也是散发性PD危险因子，α-synuclein是PD显著病理特征路易小体（Lewybody，LB）的主要组成成分。

SNAP25基因多态性对氨磺必利治疗精神分裂症PANSS评分的影响

尽管目前抗精神分裂症药物的副作用已经大大减少,但是许多精神分裂症患者的治疗效果仍然难以令人满意[1],导致患者的症状加重出现功能障碍等严重后果。抗精神分裂症药物的临床疗效可能因个体差异而产生不同,因此药物遗传学研究对于精神分裂症的的治疗显得尤为重要[2]。Muller等[3]报道突触相关蛋白25kDa(synaptosomal associated protein of 25KD,SNAP25)基因与抗精神病药物反应相关,发现rs8636位点基因多态性与高加索人精神分裂症患者药物治疗反应有关。

突触小体相关蛋白-25基因多态性与精神分裂症相关研究

目的研究突触小体相关蛋白-25（SNAP-25）基因3端翻译区单核苷酸多态性（SNP）位点rs8636与精神分裂症的关系。方法采用聚合酶连反应-限制性片段长度多态性技术，检测300例精神分裂症患者（患者组）和300例正常对照（对照组）的基因型及基因频率。分析SNAP-25基因多态性与精神分裂症的相关性。结果①患者组与对照组rs8636多态性位点的等位基因和基因型的频数分布均符合Hardy—Weinberg平衡检验（Х^2=2．69，v=1，P〉0．05；Х^2=2．52，13=1，P〉0．05）。②患者组与对照组SNAP-25基因rs8636多态性位点的基因型和等位基因频率的总体分布差异有统计学意义（Х^2=6．454，P〈0．05；Х^2=7．033，P〈0．05）；③患者组C／C基因型频率（65．0％）和C等位基因频率（79．7％）高于对照组，差异有统计学意义（Х^2=5．848，P〈0．05；OR=1.50）；患者组T／T基因型频率（5．7％）略低于对照组，差异无统计学意义（Х^2=2．453，P〉0．05）。结论SNAP-25基因rs8636多态性位点与精神分裂症可能存在关联。C／C基因型和C等位基因可能是精神分裂症发病的危险因素。

氟对大鼠海马中SNAP-25基因表达的影响

通过建立氟中毒大鼠模型,研究一定剂量氟化钠下大鼠海马中氟突触体相关蛋白-25(SNAP-25)基因表达量,为探讨氟对神经系统造成的影响提供动物性试验依据。结果表明,与饮用去离子水组相比,染氟突触体相关蛋白-25基因mRNA的表达明显下调。

SNAP25MnlI多态性与儿童注意缺陷多动障碍关联性的meta分析

目的:评价突触相关蛋白25基因(SNAP25)MnlI多态性与儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)的关联性。方法:检索Pubmed、Embase、Web of Science、Google Scholar、中国知网、维普全文电子期刊、万方数据库和中国生物医学文献数据库,检索时限均为自建库至2019年11月,搜集SNAP25MnlI多态性与ADHD相关的研究。结果:本研究包含7项病例对照研究和8项传递不平衡检验。Meta分析显示,存在中度异质性(I^2=45.6%),因此采用随机效应模型分析,结果支持SNAP25MnlI多态性与儿童ADHD存在关联[OR(95%CI)=1.16(1.03~1.30),P<0.05]。按人种及研究类型进行亚组分析后,得到在白种人、病例对照研究中SNAP25MnlI多态性与儿童ADHD风险存在关联[OR(95%CI)=1.10(1.00~1.22)、1.38(1.11~1.70),均P<0.05]。结论:本研究提示在白种人中或采用病例对照研究的实验方法表明SNAP25MnlI多态性可能会增加儿童ADHD的风险。

移植胶质细胞源性神经营养因子基因修饰骨髓基质干细胞对脑出血大鼠的神经保护作用

背景:研究显示,细胞移植对脑出血脑损伤有保护作用,有学者在脑梗死后移植骨髓基质干细胞能促进大鼠神经功能恢复。目的:观察移植胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的骨髓基质干细胞是否比单纯骨髓基质干细胞移植对脑出血有更好的保护作用。方法:采用自体血制作大鼠脑出血模型,36只SD成年大鼠随机抽签法分为3组,每组按不同时间点分为2个亚组,每个时间点6只。胶质细胞源性神经营养因子/骨髓基质干细胞组、骨髓基质干细胞组分别在脑出血壳核注射胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的骨髓基质干细胞、骨髓基质干细胞20μL/只;对照组注射生理盐水20μL。分别在1,2周处死大鼠,免疫组织化学染色观察突触素和神经生长相关蛋白在脑出血周边区的表达。结果与结论:各时间点胶质细胞源性神经营养因子/骨髓基质干细胞组的突触素和神经生长相关蛋白43免疫阳性产物比骨髓基质干细胞组和对照组显著增加(P<0.05)。提示胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的骨髓基质干细胞比单一骨髓基质干细胞对大鼠脑出血有更好的保护作用。

甲状腺激素对成年大鼠额叶内synaptotagmin 1及SNAP-25表达的影响

目的观察成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠额叶内突触结合蛋白1(Syt-1)及突触相关蛋白SNAP-25(synaptosomal associated protein of 25KD)的改变及左旋甲状腺素(T4)替代治疗后的恢复状况,探讨甲减脑损伤及恢复可能的分子机制。方法药物建立成年期大鼠甲减及治疗模型,放射免疫法测定血清甲状腺激素水平,Western blot法观察Syt-1和SNAP-25在大鼠额叶的表达。结果与对照组相比,甲减组大鼠血清T3、T4水平显著降低(P<0.05),额叶突触小体内Syt-1的表达水平显著低于对照组,SNAP-25的表达水平显著高于对照组(P<0.05);T4替代治疗组与对照组比较血清T3、T4无统计学差异;Syt-1及SNAP-25的表达无统计学差异(P>0.05)。结论成年期甲减大鼠额叶内Syt-1表达减少,SNAP-25表达增加,甲状腺素治疗能使其恢复。

鹿茸多肽对APP/PS1双转基因小鼠Rho/ROCK通路的影响

目的探讨鹿茸多肽(VAP)对APP/PS1双转基因小鼠Rho/ROCK通路的影响。方法APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组和鹿茸多肽组,每组20只,另以同窝同性别阴性小鼠20只设立为对照组。鹿茸多肽组小鼠鹿茸多肽100 mg/kg灌胃给药,每天1次,连续28 d。治疗后水迷宫实验检测并记录小鼠逃避潜伏期和穿越平台次数;透射电子显微镜观察突触的超微结构;免疫荧光切片观察海马CA1区Ras同源基因家族成员A(RhoA)和Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶Ⅱ(ROCKⅡ)的表达;Western blotting法检测海马内RhoA和ROCKⅡ蛋白相对表达量;ELISA法测定海马β-淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)含量。结果与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组逃避潜伏期均缩短,跨越平台次数增多。与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组小鼠海马区突触计数增多,突触间隙宽度减小,突触后致密物厚度增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,对照组和鹿茸多肽组CA1区RhoA和ROCKⅡ表达量减少,Western blotting检测海马内RhoA和ROCKⅡ蛋白表达水平也减少(P<0.05)。与模型组比较,对照组和鹿茸多肽组海马Aβ;含量均下降(P<0.05)。结论鹿茸多肽对阿尔茨海默病模型小鼠神经损伤有保护作用,其机制可能通过抑制Rho/ROCK通路中RhoA和ROCKⅡ的表达,促进突触结构的改变和Aβ;含量减少,减轻神经损伤,改善认知功能。