突触结合蛋白-1与学习记忆的研究进展

突触结合蛋白-1（synaptotagmin-1,Syt-1）是脑内小突触囊泡和大致密核心囊泡特有的膜内在蛋白质,是在膜融合机制中起重要作用的一个蛋白,可以作为Ca2＋感受器调节刺激偶联的快速化学突触传递,对胞吐及递质释放过程皆有影响。

Munc13-1、Munc18-1对锰染毒SH-SY5Y细胞中多巴胺分泌障碍的影响

[背景]慢性锰中毒诱发神经递质分泌障碍一直是其造成机体损伤的重要原因之一,但锰致神经递质分泌障碍的机制目前并不清楚。[目的]探究突触前膜胞内蛋白13-1(Munc13-1)与突触融合蛋白结合蛋白18-1(Munc18-1)对氯化锰(MnCl_(2))致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)多巴胺(DA)分泌障碍的影响。[方法]建立MnCl_(2)诱导SH-SY5Y细胞模型,根据MTT法测细胞存活率,实验分组为对照组和低、中、高浓度染锰组(0、100、200、400μmol·L^(−1)MnCl_(2)),处理24 h。用酶联免疫吸附试验试剂盒测定培养基中DA分泌量。通过实时荧光定量PCR检测细胞突触融合蛋白-1(Syntaxin-1)mRNA表达水平。提取细胞总蛋白,采用Western blotting检测Munc13-1、Munc18-1以及Syntaxin-1蛋白表达水平。并对MnCl_(2)染毒浓度和DA分泌量与Munc13-1、Munc18-1蛋白表达量之间做Pearson相关性分析。[结果]与对照组比较,随着锰染毒浓度的增加,细胞存活率逐渐下降,中、高浓度染锰组差异具有统计学意义(P<0.05);各锰染毒组细胞培养液中DA浓度随锰浓度增加呈下降趋势,与对照组和低浓度染锰组比,中、高浓度染锰组差异具有统计学意义(P<0.05);Syntaxin-1的表达量在mRNA和蛋白层次上,在各组间变化不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,Munc13-1的蛋白表达量随染锰浓度增加而依次下降,Munc18-1的蛋白表达量依次上升(P<0.05),其中与低浓度染锰组相比,高浓度染锰组Munc13-1和中、高浓度染锰组Munc18-1蛋白变化有统计学意义(P<0.05),与中浓度染锰组比,高浓度染锰组Munc18-1蛋白变化有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,MnCl_(2)染毒浓度与Munc13-1蛋白表达呈负相关(r=-0.898,P<0.05),与Munc18-1蛋白表达呈正相关(r=0.678,P<0.05);DA浓度与Munc13-1蛋白表达呈正相关(r=0.932,P<0.05),与Munc18-1蛋白表达呈负相关(r=-0.817,P<0.05)。[结论]锰染毒SH-SY5Y细胞致DA的分泌抑制,与其上调Munc18-1和下调Munc13-1蛋白的表达水平有关,这可能是锰致神经损伤的原因之一。

清心开窍方3种提取部位改善阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的机制研究

目的探讨清心开窍方3种提取部位(皂苷成分、挥发油成分、多糖成分)改善阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆能力及其机制研究。方法动物实验采用对照观察法。雄性SD大鼠56只,称体重后按随机数字表法分为7组:正常组、假手术组、模型组、安理申组、皂苷组、挥发油组及多糖组,每组8只。采用双侧海马注射Aβ1-402μL(2.5μg/μL)制备AD大鼠模型,造模后第2天开始灌胃,连续灌胃2周(每天上午10:00开始),皂苷组、挥发油组、多糖组剂量分别为9 m L/(kg·d)(2.1 g/m L)、3.33m L/(kg·d)(5.7 g/m L)、8.33 m L/(kg·d)(2.28 g/m L),安理申组给药剂量为1.67 mg/(kg·d),对照组和模型组予等体积生理盐水。2周后,采用水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,采用免疫组化法检测AD大鼠皮层及海马区突触结合蛋白-1(Syt-1)、白介素-1β(IL-1β)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-APP)表达。结果清心开窍方3种提取部位能改善AD大鼠学习记忆能力;定位航行试验(逃避潜伏期),多糖组大鼠逃避潜伏期与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05),其余治疗组大鼠逃避潜伏期均缩短(P<0.05);与安理申组比较,各有效成分组大鼠逃避潜伏期均延长(P<0.05,P<0.01)。空间搜索试验(穿台次数),与模型组比较,安理申组及皂苷组大鼠平均穿台次数显著增加(P<0.05);与安理申组比较,有效成分组大鼠平均穿台次数显著减少(P<0.01)。与假手术组比较,模型组皮层及海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,皂苷组、挥发油组皮层Syt-1表达增加,挥发油组、多糖组皮层IL-1β表达增加,3种提取部位组海马区GFAP表达增加(P<0.05,P<0.01),其余治疗组皮层及海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与安理申组比较,皂苷组、挥发油组、多糖组皮层与海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方3种提取部位可能是通过降低大鼠皮层及海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达发挥抗AD的作用。