^99Tc^m标记突触结合蛋白I-C2A片段无创性检测急性静脉血栓

突触结合蛋白I-C2A片段(SytI-C2A)具有与活化血小板膜表面的磷脂酰丝氨酸(PS)特异结合的能力。本研究通过动物实验初步探讨99Tcm标记突触结合蛋白I-C2A片段(99Tcm-SytI-C2A)作为显像剂用于进行急性静脉血栓显像的可行性。选择比格犬5只,通过导管将双股螺旋金属丝送入一侧后肢股静脉,制成急性股静脉血栓模型;然后静脉注射99Tcm-SytI-C2A185MBq,注射后1h、2h和3h分别进行显像,用勾画"感兴趣"区的方法计算血栓部位与对侧后肢的对称部位以及血栓/本底的放射性比值。取出血栓、后肢肌肉和血液等标本,体外测定%ID·g-1值。结果表明,注射后1h、2h和3h,血栓部位与对侧后肢对称部位的放射性比值分别为3.01±0.30、3.22±0.21和3.37±0.57;与同侧下肢放射性本底的比值分别为3.10±0.39、3.32±0.31和3.50±0.45。体外检测结果显示出股静脉血栓的单位质量放射性摄取量是血液的2.40±0.35倍,是后肢肌肉的68.90±45.30倍。99Tcm-SytI-C2A能用于无创性地早期检测静脉血栓,有望成为较理想的新型血栓显像剂。

突触结合蛋白家族成员在肿瘤中作用新进展

随着生物信息学和公共数据库的不断发展,越来越多的癌症相关基因被发现。突触结合蛋白(synaptotagmins,SYTs)是一类在突触小泡和嗜铬细胞颗粒中丰富存在的膜蛋白,其进化高度保守。由一个短的N-末端序列、一个可变连接结构域、一个跨膜结构域和两个C2结构域组成。SYTs在哺乳动物细胞中已被发现存在17种亚型,它们分布广泛且功能复杂。有研究表明SYTs在调节钙依赖的膜融合进程中发挥重要作用,一些家族成员还与激素分泌或神经递质释放相关。此外,有研究结果证实SYTs可以作为胞吐作用的钙离子感受器。近年来,大量研究表明SYTs与多种肿瘤的发生发展高度相关。下调SYTs的表达抑制肿瘤细胞的增殖,迁移和侵袭,促进细胞凋亡。腹腔注射siSYT的小鼠腹膜结节的生长受到抑制,存活时间延长。因此,SYTs被认为是一类致癌基因,其有望成为多种癌症的预后生物标志物。该文概述了最近报道的关于SYTs家族成员在癌症中作用的研究,并突出已经取得的进展。

^(99)锝~m标记突触结合蛋白I-C2A片段无创性检测易损动脉粥样硬化斑块的实验研究

目的利用^(99)锝~m 标记的突触结合蛋白 I-C2A 片段(^(99)Tc^m-Syt I-C2A)作为放射性核素显像剂检测体内易损动脉粥样硬化斑块。方法用基因工程制备突触结合蛋白 I-C2A 片段,2-亚氨基噻吩盐酸盐(2-IT)法进行放射性核素标记,制成^(99)Tc^m-Syt I-C2A。5只新西兰白兔经胆固醇饲料喂养3个月及腹主动脉内皮损伤形成易损动脉粥样硬化斑块模型,另3只作为正常对照组。静脉注射^(99)Tc^m-Syt I-C2A 后进行活体显像,并取出腹主动脉进行体外血管显像和病理检查。结果注射显像剂后2 h,实验组腹主动脉部位放射性摄取明显增高,显影清晰,靶器官/本底(T/B)放射性比值为3.25±0.51。体外显像,腹主动脉亦可见高放射性摄取,与胸主动脉的放射性比值为8.39±1.74。实验组腹主动脉单位质量放射性摄取是正常对照组的12.6倍,是胸主动脉的10.2倍。结论 ^(99)Tc^m-Syt I-C2A 能够与易损粥样硬化斑块特异结合,并进行体外成像,有望成为无创性检测动脉易损粥样硬化斑块的有效方法。

成年期甲状腺功能减退症大鼠额叶突触结合蛋白I表达及T4替代治疗作用

目的 观察成年期甲状腺功能减退症（甲减）大鼠额叶突触结合蛋白I（synaptotagmin I,sytI）表达改变及不同剂量甲状腺素替代治疗的作用.方法 将44只大鼠按体质量随机分为甲减组、常规治疗组、大剂量治疗组、对照组,用丙基硫氧嘧啶（PTU）腹腔注射建立成年期大鼠甲减及治疗模型;放射免疫法测定4组大鼠血清甲状腺激素水平,免疫组织化学S-P法分析sytI蛋白在4组大鼠额叶分子层、外颗粒层、外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体细胞层中的表达.结果 甲减组大鼠血清T3、T4[（0.34±0.04）、（43.01±2.95）nmol/L]显著低于对照组[（0.65±0.15）、（55.20±3.56）nmol/L,F值分别为6.026、4.503,P〈0.05或〈0.01],甲减组鼠syt I免疫反应产物在额叶分子层（0.018±0.010）、外颗粒层（0.020±0.007）、外锥体细胞层（0.013±0.008）、内颗粒层（0.011±0.005）、内锥体细胞层（0.024±0.013）均较对照组（0.028±0.010、0.031±0.010、0.028±0.010、0.022±0.008、0.038±0.013）明显减少（F值分别为5.697、8.965、14.668、13.597、6.807,P〈0.05或〈0.01）.常规治疗组大鼠血清T3、T4[（0.63±0.05）、（55.04±3.77）nmoL/L]与对照组比较,差异无统计学意义（F值分别为3.162、0.367,P均〉0.05）,额叶分子层、外颗粒层、外锥体细胞层、内颗粒层、内锥体细胞层syt I蛋白表达（0.027±0.013、0.025±0.009、0.022±0.008、0.020±0.010、0.033±0.010）与对照组比较差异均无统计学意义（F值分别为0.094、2.208、2.467、0.350、0.693,P均〉0.05）;大剂量治疗组大鼠血清T3、T4[（1.11±0.10）、（96.68±6.42）nmol/L]显著高于对照组（F值分别为6.291、12.031,P均〈0.01）,额叶各层syt I蛋白表达（0.028±0.008、0.031±0.011、0.026±0.012、0.023±0.011、0.038±0.010）与对照组比较的差异均无统计学意义（F值分别为0.001、0.019、0.111、0.061、0.001,P均〉0.05）.结论 成年期甲减大鼠额叶内syt I蛋白表达减少,常规剂量甲状腺素替代治疗就能使其恢复至正常水平.

突触结合蛋白Ⅰ的胞质片段与磷脂膜的相互作用

突触结合蛋白Ⅰ是神经细胞突触囊泡上的一个膜整合蛋白 ,C2AB是其具有重要功能的胞质片段 .近年的研究表明 ,突触结合蛋白Ⅰ在钙引发的神经递质快速释放过程中起到钙感受器的作用 ,它与神经细胞突触前膜的相互作用与其生理功能有关 ,但是其作用机制还不清楚 .利用气 /液单层膜技术结合荧光发射光谱和圆二色光谱技术 ,发现C2AB倾向于插入带负电荷的磷脂膜中 (如磷脂酰丝氨酸 ) ,而且插膜是钙依赖性的 ;对于不带电荷的磷脂不插膜 .C2AB与膜之间的作用力主要为静电力 .荧光发射光谱和圆二色光谱结果显示 ,它与膜相互作用时二级结构不发生显著变化 .结果表明 ,突触结合蛋白Ⅰ钙依赖的插入负电荷膜特点 ,可以帮助解释其钙感受器的作用机制 .

甲状腺激素对成年大鼠海马内突触结合蛋白I表达的影响

目的观察不同甲状腺激素水平对大鼠海马突触结合蛋白I（SytI）蛋白表达水平的影响。方法复制雄性SD大鼠成年期甲状腺功能减退症（甲减）、甲状腺功能亢进症（甲亢）模型，用放射免疫法测定血清甲状腺激素L、T4水平，用免疫组织化学超敏链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（S—P）法分析海马CA1区、CA3区和齿状回（DG）SytI蛋白的表达。结果甲减组大鼠血清L、T4水平[（0．34±0．12）、（41．03±11.37）nmol／L]明显低于对照组[（0．65±0．15）、（55．20±10．68）nmol／L，P〈0．01或〈0．05]；甲减组SytI免疫反应产物阳性颗粒较对照组也明显减少，尤以海马CA1、CA3区锥体细胞层、放射层及DG区颗粒细胞层减少明显．SytI免疫反应产物，甲减组海马CA。区多形层（0．048±0．007）、细胞层（0．299±0．035）、放射层（0．042±0．007）、腔隙分子层（0．038±0．006）和CA3区的细胞层（0．085±0．019）、放射层（0．040±0．011）、腔隙分子层（0．038±0．006）及DG区颗粒细胞层（0．076±0．019）均较对照组（0．068±0．014、0．376±0．053、0．053±0．008、0．056±0．009，0．118±0．026、0．052±0．010、0．053±0．009、0．099±0．015）明显减少（P〈0．01或〈0．05）。甲亢组大鼠血清L、T4水平[（1．43±0．30）、（157．18±19．95）nmol／L]明显高于对照组（P〈0．01）。CA1区细胞层（0．322±0．050）、放射层（0．039±0．006）、腔隙分子层（0．042±0．006）和CA3区细胞层（0．098±0．034）、放射层（0．046±0．013）、腔隙分子层（0．046±0．010）及DC区颗粒层（0．085±0．024）、分子层（0．042±0．009）SytI免疫反应产物也较对照组减少（P〈0．05或〈0．01）。结论甲状腺激素水平增高或降低均可导致成年大鼠海马内SytI蛋白表达减少。

电针结合康复训练对脑卒中肢体痉挛大鼠突触结合蛋白Ⅰ表达的影响研究

目的观察康复训练结合电针治疗对脑卒中肢体痉挛大鼠神经功能、运动功能、肌张力及大鼠脑干、脊髓中突触结合蛋白Ⅰ(SytⅠ)表达的影响。方法将75只SD大鼠随机分为5组,模型组、康复组、电针组和综合组采用线栓法建立局灶性脑缺血动物模型,空白组不做任何处理。造模成功后分别采用康复训练、电针、康复训练结合电针三种不同的治疗方案,每天1次,连续治疗6 d。术后第1、3、9天,分别评估神经功能、运动功能和肌张力变化;治疗结束后处死大鼠,应用免疫组织化学法测定SytⅠ的表达。结果术后1天、各组间无明显差异,术后3 d,各组评分分值均有降低的趋势,但其差异无统计学意义。术后9 d,康复组、电针组和综合组于模型组比较,各项指标都有所改善,以综合组较为明显,组间比较有统计学意义。结论康复训练、电针、康复训练结合电针三种不同的治疗方案,均可改善脑卒中肢体痉挛大鼠的神经功能、运动功能、肌张力,并可上调脑干、脊髓颈膨大、腰膨大中SytⅠ的表达,而尤以康复训练结合电针治疗方案更优。

突触结合蛋白-1与学习记忆的研究进展

突触结合蛋白-1（synaptotagmin-1,Syt-1）是脑内小突触囊泡和大致密核心囊泡特有的膜内在蛋白质,是在膜融合机制中起重要作用的一个蛋白,可以作为Ca2＋感受器调节刺激偶联的快速化学突触传递,对胞吐及递质释放过程皆有影响。

突触结合蛋白Ⅰ和Ⅳ在小鼠背海马表达的区域差异及年龄相关性变化

目的：探讨昆明小鼠背海马突触前囊泡蛋白（Syt）Ⅰ和Ⅳ的分布差异及其年龄相关性变化.方法：选取3个年龄段昆明小鼠22月龄17只、11月龄22只和6月龄28只作为研究对象,采用免疫组织化学技术检测其背海马Syt Ⅰ和Syt Ⅳ含量.结果：SytⅠ与Syt Ⅳ在不同年龄组小鼠背海马锥体细胞和颗粒细胞中均有表达,其中SytⅠ在CA3区透明层和齿状回（DG）门区呈高表达,而Syt Ⅳ在锥体细胞和颗粒细胞胞膜呈高表达.22月龄鼠在海马CA1、 CA3和DG中Syt Ⅰ的相对含量高于11月龄和6月龄鼠,而Syt Ⅳ的相对含量低于6月龄鼠.结论：相对于中、青年鼠而言,老年昆明小鼠背海马Syt Ⅰ水平升高而Syt Ⅳ水平降低;Syt Ⅰ的优势表达可能在苔藓纤维及其与CA3区锥体细胞顶树突形成的轴-树或树-树型突触,Syt Ⅳ的优势表达可能在锥体细胞和颗粒细胞的轴-体或树-体型突触.

年龄对C57BL/6小鼠脑突触结合蛋白量的影响

目的探讨年龄对C57BL/6小鼠脑额叶(frontol,F)、背侧海马(dorsal hippocampus,Hd)、腹侧海马(ventral hippocampus,Hv)和嗅球(olfactory bulb,O)突触结合蛋白(Synaptotagmin I,SytI)量的影响。方法定量western blot测SytI及对照β-actin经软件处理用图像分析系统测印迹条带灰度值,SytI与β-actin灰度值比值SytI量用方差统计分析。结果正常脑衰老对额叶SytI量无显著影响(P>0.05)对背腹侧海马和嗅球SytI量均有显著影响(P<0.05)、老年SytI量高于成年。结论C57BL/6小鼠正常脑衰老背腹侧海马和嗅球SytI量随年龄增加示学习记忆相关背腹侧海马和嗅球在突触蛋白水平均有改变可能涉及年龄相关学习记忆能力减退发生;额叶SytI量无改变示额叶年龄相关改变可能后于海马和嗅球。

突触结合蛋白-7通过Chk1-P53信号通路促进肝癌细胞增殖研究

目的通过检测突触结合蛋白-7(Syt-7)表达,研究其在肝细胞癌(HCC)中的作用,并阐明其潜在的机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测肝癌细胞和正常肝细胞中Syt-7mRNA表达水平。通过Celigo细胞计数、MTT检测、克隆检测和细胞周期分析评估体外敲低Syt-7的效果。通过裸鼠模型评价体内成瘤效果。应用PathScan应激和凋亡信号传导抗体阵列试剂盒评估潜在的分子机制。结果Syt-7mRNA在肝癌细胞Huh-7和Hep3B中高表达,在肝癌细胞SMMC-7721、HepG2和BEL-7402中适度表达,在人正常肝细胞L-O2中低表达。功能实验表明,敲低Syt-7可通过增加Chk1和P53磷酸化明显抑制细胞增殖和诱导细胞周期停滞。此外,敲低Syt-7可显著抑制裸鼠的体内成瘤。结论Syt-7在HCC肿瘤形成和进展中起着重要作用,可能成为HCC新的治疗靶点。

突触结合蛋白2基因多态性与中国汉族精神分裂症的关联研究

目的·探讨突触结合蛋白2(synaptotagmin 2,SYT2)基因与中国汉族人群精神分裂症(schizophrenia,SZ)的关联性。方法·采用TaqMan探针基因分型技术对478例SZ患者(SZ组)和474名健康对照者(HC组)的SYT2基因的5个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点(rs6427957、rs907697、rs12564274、rs10800856、rs61820945)进行检测分型,应用HaploView软件、SHEsis及SNPstats在线软件比较SZ组与HC组的等位基因、基因型、不同遗传模式下基因型以及单倍型频率分布有无差异。结果·rs10800856位点等位基因及基因型频率分布在SZ组与HC组之间差异有统计学意义(P=0.003,P=0.012);经Bonferroni校正后,rs10800856位点等位基因频率差异仍有统计学意义(P=0.015),基因型频率差异无统计学意义。rs10800856位点在显性及加性遗传模式下,基因型频率分布在SZ组与HC组之间比较差异有统计学意义(P=0.004,P=0.005),校正后差异仍有统计学意义(P=0.020,P=0.025)。由rs12564274-rs10800856-rs61820945组成的单倍型C-T-C频率分布在SZ组与HC组间差异有统计学意义(P=0.009);经Bonferroni校正后,差异仍具有统计学意义(P=0.036)。结论·在中国汉族人群中,SYT2基因可能是SZ的易感基因,rs10800856位点可能与精神分裂症发病风险有关联。

敲减突触结合蛋白1通过抑制 IL-6/STAT3信号通路改善结肠炎病变

突触结合蛋白1 (synaptotagmin 1,Syt1)属于突触结合蛋白家族一员,在神经递质囊泡转运和胞吐中发挥作用。Syt1在肠道上皮中有表达,但其在结肠炎中的生物学功能尚不明确。本工作以Syt1转基因小鼠结合葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导型溃疡性结肠炎模型,通过qRT-PCR、免疫染色及Western印迹检测Syt1在生理状态及肠炎状态下在结肠中表达的动态变化;采用H&E染色、免疫染色、Western印迹等方法,观察Syt1在结肠炎的炎症反应及肠道上皮再生修复中的作用。结果显示:正常野生小鼠的结肠上皮及结直肠癌患者癌旁组织的肠上皮细胞中均有较高水平的Syt1表达;DSS处理使Syt1在结肠中表达显著升高(P<0.01)。DSS诱导小鼠肠炎模型中,相较于对照组,Syt1敲减小鼠体重降低情况、结肠炎性红肿和长度缩短等均显著减轻(P<0.05),而再生隐窝数量则增多、Ki67增殖细胞也增多(P<0.01);结肠组织中的CD45免疫细胞、F4/80巨噬细胞浸润减少(P<0.001),炎症性肠病相关的促炎因子IL-1β、IL-6和TNFα分泌也减少(P<0.05)。免疫组化及Western印迹结果进一步显示,Syt1敲减小鼠中,IL-6和p-STAT3表达显著下调(P<0.05)。以上研究结果表明,敲减Syt1可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路改善结肠炎病变程度。

突触融合蛋白结合蛋白4对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和迁移的影响

目的:观察突触融合蛋白结合蛋白4(STXBP4)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达情况及其对OSCC细胞恶性生物学行为的影响。方法:(1)通过TIMER、GEPIA2、UALCAN、ENCORI、GEO和HPA数据库从mRNA和蛋白水平综合研究STXBP4在头颈鳞状细胞癌组织中的表达情况。采用qPCR和Western blot分别检测OSCC细胞系中STXBP4的mRNA和蛋白表达水平。(2)用RNA干扰技术下调SCC-9细胞中STXBP4表达,构建敲减组(si-STXBP4-1、si-STXBP4-2和si-STXBP4-3组)和阴性对照组(si-NC组);通过慢病毒转染技术过表达CAL-27细胞中的STXBP4,构建过表达组(LV-STXBP4组)和阴性对照组(LV-NC组)。分别用CCK-8实验、平板集落形成实验和Transwell实验检测OSCC细胞活力、集落形成能力和迁移能力;用Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达。(3)用裸鼠皮下移植瘤模型探究STXBP4在体内对OSCC细胞增殖的影响。结果:(1)TIMER、GEPIA2、UALCAN、ENCORI和GEO数据库分析发现,与正常组织相比,STXBP4的mRNA水平在头颈鳞状细胞癌组织中表达上调;HPA蛋白数据库分析显示,STXBP4在头颈鳞癌组织中表达比正常口腔黏膜组织较高。与正常口腔黏膜细胞相比,STXBP4在5种OSCC细胞系中高表达(P<0.05)。(2)SCC-9细胞转染si-STXBP4-1、si-STXBP4-2和si-STXBP4-3后,STXBP4的表达显著低于si-NC组(P<0.01);相较于si-NC组,敲减STXBP4的表达后,SCC-9细胞的增殖能力和迁移能力显著降低(P<0.05)。过表达STXBP4后的CAL-27细胞中,STXBP4的表达量显著高于LV-NC组(P<0.01);LV-STXBP4组中CAL-27细胞的增殖能力和迁移能力显著高于LV-NC组(P<0.01)。敲减STXBP4表达后Ncadherin的蛋白表达水平显著降低,而E-cadherin的蛋白表达水平则升高,过表达STXBP4后结果相反(P<0.05)。(3)与LV-NC组相比,过表达STXBP4后,裸鼠皮下移植瘤体积和重量显著升高(P<0.05)。结论:STXBP4在OSCC中高表达,可促进OSCC细胞的增殖和迁移,其对OSCC细胞迁移行为的影响可能与EMT有关。

突触结合蛋白家族在神经系统相关疾病中的研究进展

突触结合蛋白(synaptotagmin,Syt)家族通常被认为在神经元突触相关Ca2信号介导的突触间膜融合事件中起到非常重要的作用。既往研究已明确人类一共有17种不同亚型的突触结合蛋白,大多数突触结合蛋白作为钙离子传感器的作用也已经被揭示,其中Syt1、2、7、9这四种蛋白均与突触膜融合事件有密切联系,并且参与构成可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(SNARE)蛋白与SM(Secl/Munc18)蛋白构成的复合物,与其相关的研究最为深入。在中枢神经系统(central nervous system,CNS)中,神经细胞的功能,包括信号传递、突触释放、递质调节等,都依赖于突触结合蛋白之间的相互作用与协同调节。该综述旨在总结突触结合蛋白部分生理作用以及在神经系统疾病中的研究进展,提供其相互关联,为后续研究提供思路。

突触后突触结合蛋白在长时程增强过程中介导AMPA受体的胞吐作用

N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体依赖性长时程增强（long-term potentiation,LTP）引起的突触联系增强具有重塑神经环路及调节学习和记忆的作用。在NMDA受体依赖性LTP诱导过程中,Ca2＋内流会刺激突触α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异噁唑丙酸（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid,AMPA）受体的募集,从而强化突触联系。然而,Ca2＋诱导AMPK受体募集的机制尚未明确。Wu等的研究发现,

突触结合蛋白1在神经病理性疼痛小鼠前扣带回表达的变化

目的探讨突触结合蛋白1（synaptotagmin 1，Syt1）在神经病理性疼痛小鼠前扣带回表达的变化及与痛行为的关系。方法将20～25 g的小鼠随机分为4组：假手术（Sham）＋Syt1抗体（Syt1-Ab）组，Sham＋对照抗体（Con-IgG）组，坐骨神经结扎（CCI）＋Syt1-Ab组，CCI＋Con-IgG组。在CCI第7天给每组小鼠前扣带回立体定位注射相应药物（0.1 μg/0.5 μl），按Hargreaves法用热辐射刺激仪测定小鼠热痛的变化，用电子测痛仪测定小鼠机械痛缩足阈值的变化，免疫印迹法检测各组小鼠前扣带回Syt1的表达。结果免疫印迹显示神经病理性疼痛小鼠前扣带回Syt1表达明显升高，在神经病理性疼痛小鼠前扣带回立体定位注射Syt1-Ab可明显改善痛行为。结论神经病理性疼痛小鼠前扣带回Syt1表达显著升高，在神经病理性疼痛小鼠前扣带回立体定位注射Syt1-Ab可缓解疼痛。

母鼠妊娠前慢性不可预见性应激对子代学习记忆能力及海马突触结合蛋白Ⅰ和突触结合蛋白Ⅳ表达的影响

【目的】探讨母鼠妊娠前慢性不可预见性应激(chronic unpredictable stress,CUS)对1月龄子鼠学习记忆能力及大脑海马突触结合蛋白Ⅰ(synaptotagmin Ⅰ,syt Ⅰ)和突触结合蛋白Ⅳ(syt Ⅳ)表达的影响。【方法】SD系成年健康雌性大鼠随机分为正常对照组(8只)和CUS组(10只);采用11种刺激方法构建CUS模型;子鼠1月龄时行Morris水迷宫试验;应用Elisa法检测实验动物血清的皮质醇(cortisol,COR)和促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)水平;采用免疫组织化学法检测子鼠大脑海马syt Ⅰ和syt Ⅳ的表达情况。【结果】1)应激结束时和分娩后,CUS组母鼠血清CRH和COR水平均高于正常对照组。2)水迷宫实验中,CUS组子鼠寻找平台潜伏期长于正常对照组子鼠,而穿越平台次数少于正常对照组子鼠,差异有统计学意义。3)1月龄CUS组子代CRH和COR水平均高于正常组子代。4)CUS组和正常对照组子鼠大脑海马syt Ⅰ和syt Ⅳ蛋白表达的平均光密度(MOD)值,只在CA3层和DG层差异均有统计学意义。【结论】母鼠妊娠前CUS会使子鼠的学习记忆能力下降,并使大脑海马syt Ⅰ和syt Ⅳ的表达减少。

99~Tc^m-SytI-C2A突变体蛋白在心肌缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡显像中的应用

目的探讨99Tcm标记突触结合蛋白I-C2A片段突变体(99Tcm-SytI-C2A-G4C)在心肌凋亡显像中的应用。方法 (1)采用亚锡还原法制备99Tcm-SytI-C2A-G4C。99Tcm-SytI-C2A-G4C经纯化后通过纸层析法测定放化纯;细胞结合实验测定99Tcm-SytI-C2A-G4C与磷脂酰丝氨酸的结合能力。(2)选用5头小猪制备心肌缺血-再灌注损伤模型,静脉注射99mTc-Cyt-C2A-G4C2h后进行图像采集,计算心肌异常高放射性区/本底(T/B)比值;同时使用原位末端标记法(TUNEL)分析损伤心肌中细胞凋亡情况。结果 (1)标记后的99Tcm-SytI-C2A-G4C放射化学纯度为(96.42±0.76)%;(2)99Tcm-SytI-C2A-G4C与喜树碱处理组细胞结合测定的放射性计数是未处理组细胞的5.23±0.38倍;(3)99mTc-Cyt-C2A-G4C注射后2h,心肌部位可见明显的局部放射性异常浓聚,T/B比值为3.40±0.43;高放射性心肌组织标本,TUNEL染色亦可见大量黄染的凋亡细胞。结论 99Tcm-SytI-C2A-G4C可用于心肌细胞凋亡显像。

锝标突触结合蛋白Ⅰ C2A片段探测肺癌凋亡的实验研究

目的探讨锝标突触结合蛋白ⅠC2A片段（^99mTc-C2A）探测非小细胞肺癌（NSCLC）化疗后,肿瘤细胞凋亡的情况。方法采用2-IT修饰后配体交换法标记合成^99mTc-C2A。H460 NSCLC肿瘤裸鼠25只,以25 mg／kg紫杉醇化疗诱导,分成治疗前、化疗诱导后12、24、48、72 h共5组,^99mTc- C2A显像探测化疗前后各组肿瘤组织细胞凋亡,勾画感兴趣区,计算肿瘤与对侧正常组织放射性比值（T／NT）。显像结束后,即刻断颈处死,取出肿瘤及各脏器,测定每克组织百分注射剂量率（％ID／g）。瘤体分成两部分,一部分通过流式细胞术测定肿瘤组织活化半胱氨酸天冬蛋白水解酶（caspase-3）,另一部分通过光镜HE及TUNEL染色测定凋亡指数。结果^99mTc-C2A显像显示,治疗前肿瘤有少量放射性摄取,肿瘤摄取为（1．21±0．51）％ID／g;化疗诱导后肿瘤摄取（％ID／g）明显增加,12、24、48 h肿瘤摄取分别为2．82±0．90、3．13±0．48和3．52±1．18。治疗前肿瘤T／NT为1．48±0．23;12、24、48 hT／NT分别为1．79±0．34、2．23±0．33和2．78±0．34,各组之间差异均有统计学意义（P〈 0．05）。未化疗组活化caspase-3为2．33±0．63％;紫杉醇化疗后,大量caspase-3被激活,12、24、48 h分别为（10．03±2．15）％、（33．80±5．04）％和（57．80±11．29）％。光镜HE及TUNEL染色法显示,未化疗组有散在细胞发生凋亡,化疗诱导后12、24、48、72 h大批细胞发生凋亡,12、24、48 h每个高倍视野中的凋亡细胞数分别为（8．25±2．27）％、（34．43±4．73）％和（71．88±11．88）％。肿瘤摄取同活化caspase-3及凋亡细胞数有很好的相关性。结论^99mTc-C2A显像可早期探测实体肿瘤化疗后凋亡,并和活化caspase-3及凋亡指数呈直线相关。C2A有望成为探测细胞凋亡的分子探针,进而早期预测和评价肿瘤疗效。