一种改进的神经突触膜制备方法

介绍一种改进的神经突触膜(SPM)的制备方法.采用此方法,可简化制备过程,缩短制备时间,提高 SPM 产率,特别是可以完全排除胞液对 SPM 制备物的污染.

血管性痴呆大鼠海马结构突触膜糖蛋白的变化及药物干预

目的 观察血管性痴呆雌性大鼠海马结构突触膜糖蛋白的变化及中药黄精口服液对其的影响。 方法 以结扎 SD雌性大鼠双侧颈总动脉方法建立血管性痴呆模型 ,采用 Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力 ,黄精口服液 (0 .5 m L / 10 0 g)灌胃 ,应用免疫组织化学法和图像分析技术测定海马结构突触膜糖蛋白免疫反应产物灰度值。 结果 痴呆组和痴呆 +生理盐水组海马结构突触膜糖蛋白免疫反应产物灰度值比空白对照组明显降低 ;痴呆 +黄精组高于痴呆组和痴呆 +生理盐水组 (P<0 .0 5 ) ;大鼠平均逃避潜伏期与海马结构突触膜糖蛋白呈负相关。 结论 海马结构突触膜糖蛋白减少是血管性痴呆神经病理机制之一 ;黄精口服液具有重塑突触、改善

兔脑缺血后脑微血管和突触膜Na^+,K^+—ATP酶活性变化

建立兔MCAO局灶脑块血实验模型。通过不连续梯度超迷离心分离脑微血管(CMV)和突触膜(SPM),用生化法分别测其Na^+,K^+-ATP酶活性。结果发现CMV Na^+,K^+-ATP酶活性在MCAO后先升后降,而SPM Na^+,K^+-ATP酶活性别随时相递降,且两者与脑水含量变化均有密切关系。提示CMV和SPM Na^+,K^+-ATP酶活性变化参与了脑缺血后早期脑水肿的发生发展。

环境设置对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围神经丝蛋白、突触膜糖蛋白表达的影响

目的观察学习环境对局灶性脑梗死大鼠神经丝蛋白(NF)、突触膜糖蛋白(Syn)表达的影响。方法 SD大鼠110只,随机分为假手术对照组(对照组,10只)和大脑中动脉阻塞(MCAO)组(100只)。MCAO组大鼠采用电凝法造成右侧MCAO模型后,再随机分为独居亚组(30只)、社会交往亚组(社交亚组,40只)和探索学习亚组(探索亚组,30只)。于术后7d、14d、21d、28d分批处死大鼠,用免疫组化染色观察梗死灶周围皮质NF、Syn阳性表达。结果 MACO后7d不同环境设置亚组动物NF的表达水平均低于对照组(P<0.05),但其表达逐渐增高,28d时,探索亚组、社交亚组高于对照组(P<0.05);MCAO后7d、28d不同环境设置亚组梗死灶周围皮质Syn阳性表达均高于对照组(P<0.05);探索亚组于MCAO术后各时间点梗死灶周围皮质NF、Syn表达均明显优于独居亚组和社交亚组(P<0.05,P<0.01);第7天、21天、28天社交亚组NF表达均优于独居亚组(P<0.05),第7天、14天、21天社交亚组Syn表达均优于独居亚组(P<0.05)。结论探索学习环境、社会交往环境能促进梗死灶周围NF、Syn的表达。

马桑内酯对大鼠脑突触膜Ca^(2+),Mg^(2+)-ATP酶作用的研究

目的：探讨致痫剂马桑内酯（ｃｏｒｉａｒｉａｌａｃｔｏｎｅ）对大鼠大脑皮层突触膜Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶的作用。方法：酶底物动力学分析（Ｈａｎｅｓ作图法）。结果：马桑内酯对Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶具有抑制作用，在１．２×１０－９～６．０×１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１范围内，随浓度增加其抑制作用增强。此作用有明显的时效关系，抑制作用随作用时间延长而增强。酶底物动力学分析表明，马桑内酯对该酶的抑制属非竞争性抑制。结论：马桑内酯是Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶的强力抑制剂。本文对Ｃａ２＋，Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶与胞内游离钙之间的关系及该酶抑制在癫痫发病机制中的意义进行了讨论。

大鼠实验性甲状旁腺功能减退的研究——Ⅲ.脑突触膜流动性的改变

本实验采用荧光偏振和差示扫描量热(DSC)技术,测定了实验性甲状旁腺功能减退的大鼠模型脑突触膜流动性的改变。结果表明,2个月持续低血钙状态,使火鼠的大脑皮层、海马、纹状体和中脑的突触膜平均微粘度减小,其中大脑皮层和海马与对照组呈显著性差异(P<0.001),提示低钙鼠突触膜流动性上升。此外,低钙还使海马突触膜脂质的棚变温度Tc提前,提示膜的流动性和通透性均增加。

溴氰菊酯对鸡脑突触膜蛋白磷酸化和Ca-ATP酶活力的影响

研究了神经毒性杀虫剂———溴氰菊酯对体内源性蛋白质磷酸化作用的影响。结果表明，浓度为１０－５ｍｏｌ／Ｌ溴氰菊酯明显抑制正常鸡和经三甲基苯基磷酸酯处理的鸡脑突触膜中５５ｋＤ和６０ｋＤ两种蛋白的磷酸化。而０２５ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋加０２５ｍｍｏｌ／Ｌ的钙调蛋白则明显地促进这两种蛋白质的磷酸化，但较低浓度（１０－６ｍｏｌ／Ｌ）时，溴氰菊酯明显抑制４８ｋＤ蛋白的磷酸化。而００３ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋加００３ｍｍｏｌ／Ｌ的钙调蛋白则明显地增强４８ｋＤ和４５ｋＤ两种蛋白的磷酸化。此外，还发现溴氰菊酯可抑制鸡脑突触膜中ＣａＡＴＰ酶活力。

胆红素对神经突触膜Na^+,K^+-ATP酶影响的实验研究

为了研究胆红素的神经毒性作用，对５９只出生２天的ＳＤ大白鼠分别予以腹腔注射不同剂量胆红素制造高胆红素血症动物模型，不连续密度梯度法分离提取脑神经元突触膜，测定Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力。结果：随着血清胆红素浓度的逐渐增加，脑组织中胆红素沉积量也逐渐增加，神经元突触膜Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力逐渐降低，Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶活力与脑组织中沉积的胆红素量呈负相关（ｒ＝－０．３４，Ｐ＜０．０１）。提示：胆红素对Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰ酶具有抑制作用。

溴氰菊酯对大鼠大脑皮层突触膜谷氨酸受体结合的影响

为研究溴氰菊酯对大鼠大脑皮层突触膜谷氨酸受体结合功能的影响，应用放射配基受体结合法进行了观察。结果显示，在１×１０－８～１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ剂量下，溴氰菊酯明显增加突触膜与３Ｈ－谷氨酸的结合量，而且具有剂量效应关系。与二甲基亚砜溶剂对照比较，谷氨酸结合率增加３．２％～１３．５％。受体－配基结合动力学分析呈现正协同作用，表明溴氰菊酯神经兴奋毒作用可能与中枢谷氨酸递质系统紊乱有关。

溴氰菊酯对不同品系家蝇脑突触体膜蛋白磷酸化及ATP酶活性的影响

以敏感品系家蝇和溴氰菊酯抗性品系家蝇（ＭｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａＬ．）为材料，研究和比较了神经毒剂溴氰菊酯对其脑突触体蛋白磷酸化作用的影响。结果表明，浓度为１０－５ｍｏｌ／Ｌ溴氰菊酯抑制了敏感品系家蝇脑突触体蛋白磷酸化作用，而对抗性品系家蝇脑突触体蛋白磷酸化作用无明显影响。若反应体系中加入２５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的ｃＡＭＰ显著激活了敏感品系家蝇脑突触体蛋白磷酸化水平，但是当０６ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋或０６ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋加１０－５ｍｏｌ／Ｌ钙调蛋白时明显增强了抗性品系家蝇脑突触体蛋白磷酸化水平，甚至超过了其对敏感品系的作用水平。此外，还发现不同浓度的溴氰菊酯可抑制突触膜上的Ｎａ／ＫＡＴＰ酶和ＣａＡＴＰ酶活力，浓度越高抑制作用也越大。

康复训练对脑梗死大鼠大脑皮质突触膜糖蛋白表达的影响

目的 研究康复训练对脑梗死大鼠大脑皮质中突触膜糖蛋白 (synaptophysin ,p38)表达的影响。方法 大鼠脑梗死 2 4h后随机分为康复训练组和制动组 ,康复训练组每天进行水迷宫、转棒、滚笼训练 ,制动组网状笼内固定。在 2 4h和 1、2、3、4周时采用免疫组织化学和图像分析技术观察大脑皮质p38的表达。结果 正常大鼠大脑皮质中可见到点状的p38免疫阳性物质 ,梗死后 2 4h及第 1周时在梗死灶周围皮质及对侧相应皮质中免疫阳性产物的灰度值无明显变化 ,2、3、4周时 ,梗死大鼠较正常大鼠灰度值明显增加 ;康复训练组与制动组比较 ,第 3、4周时前者的增加更为明显。结论 脑损伤后神经组织中存在突触发生 ,并且康复训练可促进这种过程。

剥夺异相睡眠对大鼠海马结构突触囊泡膜蛋白表达的影响

目的 :观察剥夺异相睡眠对大鼠海马结构突触囊泡膜蛋白表达的影响 .方法 :34只雄性Wistar大鼠随机分为 4组 :①剥夺异相睡眠组 (PSD ,n =9) ,采用“小平台水环境法”(FlowerPotTechnique)剥夺大鼠异相睡眠 ;②大平台对照组(TC ,n =8)置于“平台水环境” ,平台直径为 2 0 ;③普通鼠笼对照组 (CC ,n =9) ;④非游泳对照组 (NC ,n =8) .除NC组外 ,其余 3组大鼠在Morris水迷宫中进行游泳训练对比 ,水迷宫记录分析系统自动记录游泳速度、游泳距离、逃避潜伏期等相关参数 .通过免疫组织化学方法检测大鼠海马结构突触囊泡膜蛋白 (synaptophysin ,SYN)的表达 .结果 :从第 2日开始到第 4日 ,PSD组大鼠游泳距离大于CC组和TC组 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) .PSD组和NC组大鼠海马结构突触囊泡膜蛋白阳性产物的光密度值较CC组和TC组低 (P <0 .0 5 ) .结论

神经突触中枢神经突触膜相关鸟甘酸激酶锚定蛋白参与疼痛调节的研究进展

背景中枢神经突触膜相关鸟苷酸激酶（membrane-associatedguanylatekinase，MAGUK）蛋白家族包含4种突触相关蛋白：PED-93、PSD-95、SAP-102、SAP-97，它们参与调节谷氨酸突触信号传递，与学习记忆和疼痛等有关。目的综述神经突触MAGUK锚定蛋白与疼痛相关受体和分子之间的相互作用及其在疼痛信号调节及传递中的作用。内容神经突触MAGUK锚定蛋白可通过与N．甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate，NMDA）受体、神经元型一氧化氮合酶（neuronalnitricoxidesynthase，nNOS）、使君子酸（a-amino-3-hydroxy-5．nlethy4_isoxazolepropionate，AMPA）受体以及突触细胞黏附分子（synaptiecell-adhesionmolecules，SynCAM）等相互作用参与调节疼痛信号在突触的传递，影响突触传递强度。趋向干扰神经突触MAGUK锚定蛋白与疼痛相关受体和重要分子间的相互作用可影响疼痛信号在突触的传递，是疼痛治疗的新靶点。

兔脑缺血后脑微血管和突触膜Na^+,K^+-ATP酶活性变化

建立兔大脑中动脉阻断(MCAO)局灶脑缺血实验模型。通过不连续梯度超速离心脑微血管(CMV)和突触膜(SPM),用生化法分别测其Na^+,K^+-ATP 酶活性。结果发现CMV Na^+,K^+-ATP酶活性在MCAO后先升后降,而SPM的Na^+,K^+-ATP酶活性则随时相递降,且两者与脑水含量变化均有密切关系,提示CMV和SPM Na^+,K^+-ATP酶活性变化参与了脑缺血后早期脑水肿的发生发展。

重症肌无力患者血清抗乙酰胆碱受体抗体和抗突触前膜抗体检测

目的：探讨重症肌无力（MG）患者血清抗乙酰胆碱受体抗体（AchRab）和抗突触前膜抗体（Psmab）水平与其临床特征之间的关系。方法：采用ABC—ELISA法检测186例MG患者及35例正常人血清AchRab和Psmab。结果：MG患者血清AchRab和Psmab水平及阳性率均高于对照组（P〈0．01），且2抗体水平高度相关（r=0．72，P〈0．001）。2抗体水平与MG患者的性别无关；1～14岁患者2抗体水平较低；胸腺瘤患者2抗体水平高于胸腺增生者；危象型患者高于轻型和混合型患者；手术摘除胸腺后，2抗体水平较术前下降（P均〈0．05）。结论：AchRab和Psmab与MG患者病情程度及病理类型有关，可用于MG的病情监测。

Tau蛋白过度磷酸化对突触后膜AMPA受体数量及功能的影响

目的 探讨大鼠Tau蛋白过度磷酸化对突触后膜AMPA受体数量及功能的影响.方法 原代培养新生SD大鼠海马神经元,将编码红色荧光蛋白DsRed的质粒（标记树突棘）和绿色荧光蛋白GFP标记的P301L突变的人类Tau蛋白基因共转染到5～7d的原代培养大鼠海马神经元内持续培养,编码DsRed的质粒和野生型GFP-Tau共转染为对照.以神经活细胞实时图像成像分析Tau蛋白易位过程.以免疫组化分别检测各组Tau蛋白的表达及AMPA受体数量改变.结果 野生型GFP-Tau蛋白组只出现在树突上,GFP-P301L突变组Tau蛋白广泛出现于树突棘上;与野生型组相比,GFP-P301L突变组Tau蛋白表达水平显著增加（P＜0.01）,AMPA受体数量显著减少（P＜0.01）.结论 Tau蛋白过度磷酸化可能通过显著减少AMPA受体数量,导致AMPA受体在突触后膜上的运输失常,造成认知功能的障碍.

叶酸缺乏与学习记忆及海马突触体膜流动性相关性研究

目的 : 探索叶酸缺乏对离乳大鼠学习记忆能力与海马突触体膜流动性的影响。方法 : 5 4只刚离乳的健康雄性 SD大鼠 ,随机分成三组 :实验组 (FD)、对饲组 (PF)和对照组 (AL)。实验组饲去叶酸的 RHAA配方饲料 ,另二组饲以添加叶酸 8mg/ kg的 RHAA饲料 ,对饲组按实验组的进食量加以控制 ,对照组不控制进食。分别于饲养第 2和第 6 w末测定血清叶酸 (SFA)浓度和进行 Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力 ,记录平均逃避潜伏期和分析原平台象限游泳距离占游泳总距离的百分比 ,分离海马突触体 ,透射电镜作形态学证实 ,用荧光物质 DPH标记突触体后测定荧光强度 ,后者反映突触体膜流动性。结果 : 实验第 2 w FD血清叶酸浓度降低 (P<0 .0 1 )。FD及 PF第 6 w时 SFA浓度明显低于 AL和 PF(P<0 .0 1 ) ,平均逃避潜伏期明显延长 ,原平台象限游泳距离百分比及海马组织突触体膜流动性均明显下降。与对照组比较 ,对饲组上述指标的改变不明显 (P>0 .0 5 )。相关分析结果 :海马结构分离突触体膜 r值与血清叶酸浓度、平均逃避潜伏期及原平台象限游泳距离百分比显著相关 (r=- 0 .5 2 7,P<0 .0 5 ;r=- 0 .45 1 ,P<0 .0 5 ;r=- 0 .5 79,P<0 .0 5 )。结论 : 1 .叶酸缺乏可损害离乳大鼠的空间学习记忆能力和降低海马突触体膜?

重症肌无力病人血清中IgM型乙酰胆碱受体、突触前膜抗体检测及临床意义

应用ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测了９６例重症肌无力（ＭＧ）病人血清中ＩｇＭ－ＡｃｈＲ、Ｐｓｍａｂ。发现ＭＧ组中，有１８例（１８．７％）ＩｇＭ－ＡｃｈＲａｂ阳性；１０例（１０．４％）ＩｇＭ－Ｐｓｍａｂ阳性。ＩｇＭ－Ｐｓｍａｂ阳性频见于病程＜２年的ＭＧ病人；而与ＭＧ组病人的年龄和临床分型均无显著的相关性（Ｐ＞０．０５）。结果提示ＩｇＭ型抗体也与ＩｇＧ型抗体共同参与了ＭＧ的发病机制，且提示有神经肌肉接头突触前膜的体液免疫学异常。

缺氧预适应小鼠脑匀浆去蛋白液对缺氧突触体膜的保护作用

用酚氯仿去除重复缺氧鼠脑匀浆液中的蛋白质等大分子物质 ,以乳酸脱氢酶 (LDH)透出率为指标 ,观察去蛋白匀浆提取液对缺氧突触体的保护作用。重复缺氧 2 ,3次特别是 4次动物的去蛋白提取液显著降低缺氧突触体的LDH透出率 ;重复缺氧 4次组去蛋白匀浆提取液的LDH透出率亦显著低于纯氧对照组。结果提示通过缺氧预适应 ,鼠脑产生一种小分子活性物质 。