大鼠脑突触质膜糖皮质激素受体的结合特性

本文的研究目的旨在鉴定突触质膜上的糖皮质激素特异膜结合位点（ＧＣＭＢ），并研究其配体结台特性和理化性质。放射配体结合分析表明，［３Ｈ］皮质酮能与ＧＣＭＢ作饱和结合，呈正协同方式。其最大结合容量（Ｒ０）为４６．６７±４．６２ｆｍｏｌ／Ｌ，平衡解离常数（Ｋｄ）为９７．４８±１８．８５ｎｍｏｌ／Ｌ，Ｈｉｌｌ系数为１．６３３±０．０８２。不同甾体与ＧＣＭＢ的亲和力依次为：ＲＵ２６７５２，醛固酮＞皮质酮，皮质醇＞ＲＵ２６９８８，孕酮，Ｒ５０２０，去炎松缩酮＞睾酮，雌二醇＞ＲＵ３８４８６＞地塞米松。ＧＣＭＢ具有温度稳定性，并可被去垢剂ＴｒｉｔｏｎＸ—１００溶脱，被胰蛋白酶水解，易受巯基乙醇影响。二价阳离子（Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋）有助于ＧＢＭＢ与配体结合。我们的实验结果强烈提示：ＧＢＭＢ满足作为受体的基本判据是一个与胞内糖皮质激素不相同的新型糖皮质激素受体，或肾上腺皮质激素受体。

大鼠脑突触质膜糖皮质激素受体样抗原的免疫电镜研究

本文利用ABC金标记法(受体-抗受体中的单克隆抗体-生物素化马抗鼠IgG-金标链霉亲和素),首次在电镜下观察到大鼠脑突触质膜的外表面存在有糖皮质激素受体样抗原,为神经细胞膜上可能存在有糖皮质激素受体提供了形态学依据。

大鼠脑突触质膜糖皮质激素结合位点的等电点测定

利用离子交换层析法测定了大鼠脑突触质膜糖皮质激素结合位点的等电点,结果表明,膜糖皮质激素结合位点的等电点为5.5,与细胞内糖皮质激素受体的等电点(pⅠ6.7)不同。

大鼠脑突触质膜糖皮质激素受体的纯化

本文利用抗大鼠肝细胞内糖皮质激素受体的单克隆抗体制备的免疫亲和层析柱,将大鼠脑突触质膜糖皮质激素受体纯化了约1150倍,SDS聚丙烯酰胺簿层梯度凝胶电泳显示,在约67kD处有一较明显的染色条带。

猪小脑突触质膜糖皮质激素结合位点测定及特异性分析

随着对甾体激素作用机理研究的深入发展,越来越多的实验结果表明,甾体激素不仅能通过与细胞内的受体结合,进而影响 DNA 转录而发挥甾体激素重要的调节功能,它还能与位于细胞膜上的特导结合位点(膜受体?)结合,产生某些潜伏期极短的快效应。迄今为止,已有少量文献报道在大鼠脑。

大鼠脑突触质膜甘氨酸受体的研究

本文用放射配体受体结合法对大鼠脑突触质膜上甘氨酸受体进行了测定，同时也研究了两型甘氨酸受体在脑内的不同分布。结果显示，甘氨酸受体（士的宁不敏感型）结合容量民为２６±４Ｐｍｏｌ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ，平衡解离常数Ｋｄ值为１７３±１５ｎＭ，ＩＣ５０值为１０－６Ｍ。除脑干部甘氨酸受体为土的了敏感型外，余脑部主要为土的宁不敏感型。

甾体激素对大鼠脑突触质膜上甘氨酸受体结合的影响

制备大鼠脑突触质膜，排除胞液污染，用放射配体结合的方法，以［３Ｈ］甘氨酸为标记配体。结果测得甘氨酸受体结合的饱和曲线，Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图为一条直线，结合容量Ｂｍａｘ为每ｍｇ蛋白（２６±４）ｐｍｏｌ，平衡解离常数Ｋｄ为（１７３±１５）ｎｍｏｌ／Ｌ；士的宁取代实验显示：脑干部甘氨酸受体为士的宁敏感型，余脑部为士的宁不敏感型。甾体激素取代实验提示：孕酮对甘氨酸受体的结合有快速的抑制作用。

大鼠脑突触质膜糖皮质激素受体的研究

用改进的蔗糖密度梯度超速离心法从大鼠脑匀浆物中制备出突触质膜，其中不含胞液成份，用放射配体结合法，以［￣３Ｈ］皮质酮作为标记配体测得突触质膜上有皮质酮特异结合部位，其结合的饱和曲线呈“Ｓ”形，用Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图呈一条向上凸的曲线，表明受体结合过程中有正协同作用，蛋白的结合容量（Ｒ０）为（４５０．２０±５８．６０）ｐｍｏｌ／ｇ，平衡解离常数（ｋｄ）为（１６０．２５±２８．２０）ｎｍｏｌ／Ｌ。取代结合实验表明，［￣３Ｈ］皮质酮结合部位有相当显著的配体结合特异性。按结合力大小排列为：醛固酮＞皮质酮≈皮质醇＞孕酮＞睾酮≈雌二醇＞地塞米松。结果提示脑突触质膜上存在糖皮质激素膜受体。

U72099E可以与大鼠脑实触质膜的糖皮质激素结合位点结合

７２０９９Ｅ是２１－氨基甾体类化合物之一，它缺乏已知的糖皮质激素（ＧＣ）及盐皮质激素的生理活性。本工作用放射配基结合法比较了Ｕ７２０９９Ｅ对于放射标记ＧＣ与大鼠脑胞液及突触质膜制备相结合的替代能力。结果表明：胞液与［３Ｈ］ＧＣ的结合不能被Ｕ７２０９９ｋ所替代，而突触质膜与［３Ｈ］ＧＣ的结合则可以被替代。后者其抑制常数（Ｋｉ）为３２．１６＋１．６５μｍｏｌ／Ｌ；这表明质膜上有与Ｕ７２０９９Ｅ相结合的位点，很可能即为糖皮质激素膜受体（ＧＣＭＲ）。由于Ｕ７２０９９Ｅ的Ｋｉ值与保护脑损伤所需的浓度相接近，这提示ＧＣＭＲ可能介导Ｕ７２０９９Ｅ的有益作用。

山莨菪碱对经有限蛋白水解后的脑突触膜Ca^(2+)-ATPase的影响

从猪脑中提取钙调蛋白和突触质膜,我们研究了山莨菪碱对经有限蛋白水解和磷脂酶A_2处理后的突触膜Ca^(2+)-ATPase活性影响。发现药物对不同预处理后的Ca^(2+)-ATPase表现出不同影响并调节钙调蛋白对它的激活作用。

脑部糖皮质激素膜受体的实验研究

目的探讨脑部糖皮质激素膜受体的结合特性。方法用改进的蔗糖密度梯度超速离心法从大鼠脑匀浆物中制备出突触质膜,其中不含胞液成分,用放射配体结合法,以[3H]皮质酮作为标记配体。结果测得突触质膜上有皮质酮特异结合部位,其结合的饱和曲线呈“S”形,用Scatchard作图呈一条向上凸的曲线,表明受体结合过程中有正协同作用,蛋白的结合容量(R0)为(450.20±58.60)pmol/g,平衡解离常数(kd)为(160.25+28.20)nmol.L-1。取代结合实验表明,[3H]皮质酮结合部位有相当显著的配体结合特异性。按结合力大小排列为:醛固酮>皮质酮≈皮质醇>孕酮>睾酮≈雌二醇>地塞米松。结论提示脑突触质膜上存在糖皮质激素膜受体。

脑内Glycine受体的结合特性与甾体激素相关性研究

目的研究甾体激素对脑内Glycine受体结合的影响。方法制备大鼠脑突触质膜,排除胞液污染,用放射配体结合的方法,以[3H]甘氨酸为标记配体。结果测出甘氨酸受体结合的饱和曲线,Scatchard作图为一条直线,结合容量Bmax为每毫克蛋白(26±4)pmol,平衡解离常数Kd为(173±15)nmol.L-1,士的宁取代实验显示:脑干部甘氨酸受体为士的宁敏感型,其余脑部为士的宁不敏感型。甾体激素取代实验显示:孕酮对甘氨酸受体的结合有快速的抑制作用。结论孕激素对甘氨酸受体的结合有影响。