牛膝活性提取物对大鼠海马神经元生长的促进作用

目的：研究牛膝活性提取物（ABPPk）对体外培养的大鼠海马神经元生长的促进作用.方法：以体外原代培养的胎鼠海马神经元为模型,通过微管蛋白（β-tubulinⅢ）免疫荧光染色,采用Leica Qwin软件测量不同浓度ABPPk处理24 h对海马神经元突起延伸和突起分支的影响;通过突触结合蛋白（SYN）和突触后致密蛋白（PSD95）双标免疫荧光染色,采用LeicaQwin软件测量ABPPk（250 ng/ml）处理7d对海马神经元突触形成的影响;通过免疫印迹定量分析不同浓度ABPPk作用24 h对海马神经元生长相关蛋白（GAP-43）表达水平的影响,作用7d对PSD-95表达水平的影响,以及ABPPk（250 ng/ml）作用不同时间对磷酸化胞外信号调节激酶（ERK1/2）水平的调节.分析ABPPk对海马神经元的作用与ERK通路的关系.结果：ABPPk可有效促进海马神经元的突起延伸和突触形成,免疫印迹结果显示,ABPPk能显著增加海马神经元GAP-43和PSD-95蛋白表达,作用5 min即能显著上调ERK磷酸化水平,作用15 min ERK磷酸化水平达到峰值,PD98059可抑制该过程.结论：ABPPk能促进体外培养的海马神经元突起生长和突触形成,上调GAP-43和PSD-95蛋白水平,其作用可能与ERK通路的激活有关.

结合基因本体论和计算机模式识别技术筛选应答神经损伤的重要效应基因

目的利用基因本体论(gene ontology,GO)方法结合计算机模式识别技术从基因芯片的海量数据中筛选出应答神经损伤的重要基因,并选择一种可能的关键基因Cd44对生物信息学结果进行验证。方法利用MATLAB软件对基因芯片数据(GSE26350)进行数据挖掘和GO分析,利用不同功能模块的基因在主成分得分图上的位置分布,从得出的核心基因分子谱中选择Cd44。干扰Cd44与其配体硫酸软骨素C(chondroitin sulfate C,CSC)的正常结合,观察其对神经突起延伸的影响。结果 GO分析结果显示,主成分得分图上红色*标记的第1类基因在分子功能方面主要与信号传递、受体活动和蛋白结合等相关。Cd44是此类基因6个外围效应蛋白基因之一,其功能多样。向培养的神经元培养基中添加不同试剂干扰CSC与Cd44的正常结合可不同程度缓解CSC对神经突起延伸的抑制作用。结论本实验初步证明CSC与筛选出的神经元表面分子Cd44的结合可抑制神经突起的延伸,这说明利用GO分析基因芯片可筛选出特定生理过程中的重要分子。