窦房结细胞裂解液对大鼠骨髓间充质干细胞的诱导分化作用

目的:观察不同浓度的窦房结细胞裂解液对骨髓间充质干细胞(MSCs)的诱导分化作用。方法:体外分离乳鼠窦房结细胞并制备窦房结细胞裂解液。密度梯度离心法分离成年SD大鼠骨髓MSCs,分别加入含1、2、4和8倍浓度的窦房结细胞裂解液培养基诱导培养,普通培养基培养作对照,观察细胞形态变化,并通过免疫荧光染色法检测MSCs心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)的表达,免疫细胞化学染色检测超极化激活的环核苷酸门控的离子通道蛋白HCN2和HCN4的表达。结果:经1、2、4和8倍浓度窦房结细胞裂解液诱导1周后的骨髓MSCs均表达cTnI和HCN2;5组间HCN2阳性细胞率比较,差异有统计学意义(F=93.113,P<0.001),且在一定浓度下随着裂解液浓度的升高而增高(P<0.05)。结论:窦房结细胞裂解液能够体外诱导骨髓MSCs分化为具有起搏功能的心肌样细胞。

不同浓度的窦房结细胞裂解液对兔骨髓间充质干细胞的诱导分化作用

目的探索不同浓度的窦房结细胞裂解液对兔骨髓间充质干细胞的诱导分化作用。方法体外分离兔窦房结细胞并制备窦房结细胞裂解液。全骨髓贴壁法分离纯化兔骨髓间充质干细胞,分别加入含1、5、10倍浓度的窦房结细胞裂解液作为诱导培养基,普通培养基培养作对照,观察细胞形态变化,通过免疫荧光染色法检测超极化激活的环核苷酸门控的离子通道蛋白HCN4的表达,免疫细胞化学染色检测心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果经1、5、10倍浓度窦房结细胞裂解液诱导后的细胞均表达cTnT和HCN4;4组间HCN4阳性细胞率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。随着细胞裂解液浓度的提高,所诱导成的阳性细胞数再逐步增加,但增加至5倍浓度以上,效果并不明显。结论在一定范围内,不同浓度的窦房结细胞裂解液能够体外诱导骨髓间充质干细胞分化为起搏细胞,但并不遵从剂量效应关系。

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为具有起搏功能的心肌细胞

目的寻求体外诱导骨髓间充质干细胞分化为具有起搏功能的心肌细胞的方法和途径。方法分离大鼠骨髓间充质干细胞,在体外分别用5-氮胞苷(5AZA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)+内皮细胞生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)、干细胞因子(SCF)和窦房结心肌细胞(SAN CMs)裂解液进行诱导。观察细胞形态,用免疫组化和流式细胞技术测定心脏特异性肌钙蛋白T(cTnT)、连接蛋白43以及超极化激活的核酸环化酶门控的离子通道(HCN)2/4的表达,并测定细胞起搏电流If。结果上述方法均能在体外将干细胞诱导为表达心肌细胞特异性蛋白的心肌样细胞,并且均有HCN2表达。5-AZA、bFGF+EGF和SAN CMs组表达HCN2比例较高(22.9%、22.3%和11%),且均能测到起搏电流(If)的存在。结论窦房结裂解液是体外诱导骨髓间质干细胞分化为具有起搏功能的心肌细胞的理想方法,HCN是很有前景的分选具有起搏功能的心肌细胞的标志蛋白。