硫酸化胆汁酸水解酶基因BSSH1克隆、表达及活性

目的从铜绿假单胞菌克隆出硫酸化胆汁酸水解酶(BSS)基因,并表达蛋白产物、研究其活性。方法通过序列比对确定铜绿假单胞菌中的目的序列BSS H1;通过PCR扩增获得BSS H1基因全序列,将其插入pET30b(+)载体,并将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过优化诱导表达条件,实现重组蛋白BSS H1的高效表达;通过BSS-HSD酶联法初步研究其酶活性质。结果工程菌扩大培养3 h、以终浓度为1 mmol/L IPTG诱导5 h时蛋白表达量最高;研究发现BSS H1能催化底物生成3α和3β两种构型的羟基胆汁酸,在pH 8.5时,其活性分别是(632±65)U/L和(52±4)U/L。结论成功构建BSS H1高效表达菌株。BSS H1能催化生成两种立体异构体的特性在其他BSS中未见报道,其机制尚不明确,值得深入研究。