潜立体异构现象

自从Lebel和Vant Hoff在1874年提出四面体碳原子假说之后,立体化学就成了引入注目的研究领域.不少化学家如:R. S. Cahn,C. K. Inglold,V. prelog,Hanson,Hcrmalln Kolbe,Johannes Adolf Wislicenus等均为此作了卓越的贡献。而今,它已经渗透到化学的各方面——无机、有机…….潜立体异构学说乃是立体化学又一新的研究领域,因为它与酶化学有直接的利害关系而受到重视.

p53异构体和MDM2、PTEN在胃癌组织中表达的相关性

目的探讨p53的选择性剪接异构体与双微基因2(MDM2)、同源性磷酸酶张力蛋白(PTEN)在胃癌组织中的表达及其相关性。方法分别应用巢式逆转录多聚酶链反应(NT-PCR)和免疫组织化学(PV-9000两步法)方法检测p53的五种选择性剪接异构体和MDM2、PTEN在胃癌组织和癌旁胃组织中的表达,并进行统计学分析。结果在30例胃癌患者癌组织和癌旁胃组织中均未检测到三种p53异构体p53γ、Δ133p53β、Δ133p53γ的mRNA表达。与癌旁组织比较,胃癌组织中Δ133p53表达阳性率高,p53β表达阳性率低,MDM2蛋白表达阳性率高,PTEN蛋白表达阳性率低(P均<0.01)。Spearman’s相关性分析显示,Δ133p53和MDM2,p53β和PTEN在胃癌中表达均呈正相关关系(r=0.408,P=0.025;r=0.413,P=0.02);Δ133p53和PTEN,p53β和MDM2在胃癌中表达呈负相关关系(r=-0.467,P=0.009;r=-0.480,P=0.007)。结论Δ133p53、p53β通过调节p53活性,并以p53为中介,影响了PTEN-MDM2-p53网络环路中PTEN、MDM2蛋白的表达。

毛细管电泳法检查瑞格列奈片中左旋异构体杂质

目的：建立毛细管电泳法检测瑞格列奈片中左旋异构体杂质。方法：采用未涂层熔融石英毛细管柱（50μm ×50 cm，有效长度41 cm）为分离通道，运行缓冲液为pH 3．5，30 mmol/L的磷酸二氢钠缓冲溶液，含5 mg/ml CM-β-CD。结果：左旋瑞格列奈在浓度为2．00～80．00μg/ml 范围内线性关系良好（ r ＝0．9993），方法回收率为92．5％～105．0％。结论：本实验建立的方法简单、准确、灵敏，可用于瑞格列奈片中左旋异构体杂质的检测。

毛细管电泳法检查盐酸左西替利嗪片中右旋异构体杂质

目的：建立毛细管电泳法检查盐酸左西替利嗪片中右旋异构体杂质。方法：用磺酸化-β-环糊精（ S-β-CD）作为手性选择剂，考察了S-β-CD浓度、pH值和缓冲盐浓度对分离的影响。结果：在30 mmol/L磷酸盐运行缓冲液（含20 g/L S-β-CD，pH 7．0）中，西替利嗪对映体在分离电压为15 kV的条件下得到良好分离，并满足对盐酸左西替利嗪片检查右旋异构体杂质所需要的条件。结论：本实验建立的方法灵敏、可靠，可用于左旋西替利嗪中右旋异构体杂质的检查。

苯巴比妥诱导对普罗帕酮体外Ⅰ相代谢的立体选择性影响

目的 :观察苯巴比妥对 S(+ ) -和 R(-) -普罗帕酮 (PPF)体外 相代谢有无立体选择性的影响。方法 :将消旋普罗帕酮与对照或苯巴比妥诱导的大鼠肝微粒体孵育后 ,采用手性衍生化反相高效液相色谱法 ,测定对映体的经时孵育曲线和酶动力学参数 (最大反应速度、米氏常数、内在清除率 )。结果 :在对照大鼠肝微粒体中 ,PPF的 相代谢无立体选择性。经苯巴比妥诱导处理后 ,在 5mg/ L 底物浓度时 R(-) -PPF的代谢快于 S(+ ) -PPF,两对映体的米氏常数和内在清除率有显著性差异。结论 :苯巴比妥选择性地诱导了大鼠肝微粒体对 PPF的

盐酸氮芥及其异构体抗肿瘤研究

目的:研究盐酸氮芥、氮芥异构体对K_(562)及L_(1210)细胞增殖的影响。方法:采用克隆形成法、MTT比色法及活细胞计数法。结果:盐酸氮芥及其异构体能抑制K_(562)及L_(1210)细胞增殖,与对照组相比有显著性差异(P<0.01),抑制作用与剂量呈显著性正相关。结论:盐酸氮芥及其异构体对K_(562)和L_(1210)细胞有明显抑制作用,且异构体作用明显优于盐酸氮芥。

p53异构体Δ133p53在不同胃组织中的表达及意义

目的探讨p53选择性剪接异构体Δ133p53的mRNA在胃癌、慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎组织中的表达及意义。方法采用巢式逆转录多聚酶链反应检测Δ133p53在30例胃癌、30例慢性萎缩性胃炎和20例慢性浅表性胃炎组织中的表达。结果Δ133p53在胃癌、慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎组织中的阳性表达率分别为70.0%、50.0%和25.0%,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论①Δ133p53的表达在胃癌、慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎组织中呈逐渐明显下降趋势。②Δ133p53异构体可能对胃癌的发生发展及其诊断、治疗具有重要作用。

手性固定相法和手性衍生化法拆分β-受体阻断剂类药物及其结构类似物

目的 :建立一些 β-受体阻断剂类药物及其结构类似物的手性高效液相色谱拆分方法。方法 :利用 Chiral-cel OD和 Chiralpak AD两种手性固定相及 GITC手性衍生化试剂 ,对 11种药物进行手性拆分研究。结果 :普萘洛尔、阿替洛尔、比索洛尔、美托洛尔、塞利洛尔、卡维地洛、索他洛尔、普罗帕酮、麻黄碱和佐米曲普坦都在一种或几种色谱条件下得到了较好的分离。柱温对 Chiralcel OD的拆分因子影响较大 ,相同条件下柱温越低 ,药物拆分因子越大。结论 :用 OD和 AD两种手性固定相和 GITC手性衍生化法拆分 β-受体阻断剂等

RR-福莫特罗和rac-福莫特罗对人支气管舒张作用的比较

目的 :比较 RR-福莫特罗和 rac-福莫特罗对人支气管舒张作用。方法 :将内径 2～ 4 mm、长 15 mm的人支气管螺旋条置入持续供氧的浴槽内 ,静息张力为 1g,以蓄积给药法测定 RR-福莫特罗 (10 pmol·L-1～ 3.2 μmol·L-1)和 rac-福莫特罗 (10 pmol·L-1～ 3.2 μmol·L-1)在静息情况下 ,及氨甲酰胆碱 (10 μmol· L-1)或组胺 (10 0μmol·L-1)引起收缩情况下的张力改变。结果 :RR-福莫特罗在静息状况下支气管舒张作用强于 rac-福莫特罗 (P<0 .0 5 )。 RR-福莫特罗和 rac-福莫特罗对抗由氨甲酰胆碱和组胺引起的收缩 ,且 RR-福莫特罗的对抗作用强于rac-福莫特罗 (P<0 .0 5 )。结论 :RR-福莫特罗对人支气管的舒张作用强于 rac-福莫特罗。

A549/MTX对映体耐药细胞的裸鼠荷瘤模型的建立

目的利用L型和D型氨甲喋呤(MTX)对映体分别建立人肺腺癌A549细胞株裸鼠耐药模型,为进一步揭示MTX对映体体内活性差异的原因提供实验平台。方法裸鼠皮下分别接种A549、耐药细胞株A549/L-MTX、A549/D-MTX各6×106个/0.2ml,观察肿瘤生长特性;瘤体原代培养后四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测耐药指数(resistance index RI);免疫组化(IHC)检测ki-67、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein1,MRP1)、survivin变化。结果从肿瘤生长曲线上看瘤体积三者差异有统计学意义(P<0.05),A549/L-MTX/nude组体积更小。A549/L-MTX/nude移植瘤RI为4.9,为低度耐药,A549/D-MTX/nude移植瘤RI为14.5,为中度耐药。A549/L-MTX/nude相关蛋白总体表达低于A549/D-MTX/nude,两者表达差异有统计学意义(P均<0.05)。结论成功建立对MTX两种对映体耐药的A549细胞株裸鼠肿瘤模型,且两种耐药细胞具有不同耐药特性,为研究MTX对映体体内抗肿瘤活性差异提供了较好的实验平台。

二维核磁共振技术确定法尼基丙酮的几何构型

目的 (5E,9E)-法尼基丙酮是制备替普瑞酮的关键中间体,研究目的是确立一种方法,简单有效地区分法尼基丙酮5位顺式和反式异构体,为合成替普瑞酮药物提供合格的中间体原料。方法本研究利用一维~1H-NMR图谱和二维~1H-~1H NOESY图谱对其不同构型进行分析,根据18位甲基氢和3,4位氢相关峰的有无和强弱,区分法尼基丙酮5位的顺反异构体。结果采用核磁共振方法可以区分顺反法尼基丙酮。结论核磁共振方法可以简单有效地应用于区分法尼基丙酮5位的顺反异构体,为法尼基丙酮5位几何异构体的构型确认和分离提供了依据,也为此类几何异构体结构分析和构型确认提供了一个有效的方法。

手性固定相法在手性药物拆分中的应用研究

手性是用来表达化合物分子结构不对称性的术语。人的手是不对称性的，左手和右手相互不能叠合，彼此是实物和镜像的关系［1］。这种关系在化学中称为“对映关系”，具有对映关系的两个物体互为“对映体”。手性高效液相色谱技术是20世纪70年代后期发展起来的，特别适用于极性强、热稳定性差的手性药物的分析。高效液相色谱法（HPLC）拆分对映体有直接法和间接法两种［2］，其中直接法又分为手性固定相法（CSP ）和手性流动相添加剂法（CMPA）；间接法即手性衍生化试剂法（CDR）。手性固定相根据其化学类型可分类为：①“刷型”手性固定相；②手性聚合物固定相；③环糊精类手性固定相；④大环抗生素类手性固定相；⑤蛋白质手性固定相；⑥配体交换手性固定相；⑦冠醚手性固定相等，本文将对手性固定相法的分类及其应用综述如下。

原肌球蛋白分子生物学特征及其与肌病发生相关性的研究(英文)

目的:明确哺乳动物的4个原肌球蛋白(TM)基因及其突变时与骨骼肌无力、肥大性心肌病的关系,以期为预防性措施和康复干预提供支持。资料来源:应用计算机检索Medline、万方数据库1987-01/2004-08期间有关TM的实验及临床研究的研究原著,英文检索词“tropomyosin,gene,mutation”;中文检索词“原肌球蛋白、基因、突变”,限定语言种类为英文和中文。资料选择:对检索到的文献进行初审,排除题目含“个案、经验、体会”等综述及非研究原著类的文章,然后对剩余文献查找原文,以是否为随机对照临床试验(RCT)作为纳入标准。资料提炼:共收集到30篇关于原肌球蛋白分子生物学的研究与进展的随机和非随机试验。其中21篇符合纳入标准,排除9篇。资料综合:研究提示,原肌球蛋白(TM)是肌肉收缩过程中重要的调节蛋白质,它以大量异构体形式广泛分布于各种真核细胞中。哺乳动物中的4个TM基因已被确认,至少可表达出20种TM异构体。不同的TM基因突变分别可引起不同的疾病。结论:4个已被确认的TM基因分别命名为TPM1,TPM2,TPM3,TPM4。其中TPM1基因突变与家族性肥大性心肌病有关;而TPM3基因突变与线状肌病和骨骼肌无力有关。目前,对TM的研究已不仅仅局限在肌肉收缩过程中。

原发性肝细胞癌中DNMT3b基因剪接变异体的表达分析

目的:研究原发性肝癌中DNMT3b基因剪接变异体的表达情况及其在肝癌发生发展中的作用。方法:通过RT-PCR的方法对30例肝癌、30例癌旁组织中DNMT3b基因的剪接变异体进行检测,并将结果与肝癌患者临床指标进行统计学分析。结果:RT-PCR结果显示DNMT3b基因以四种剪接变异体(DNMT3b1、DNMT3b3、DNMT3b4和DNMT3b5)的形式表达,其总的表达率肝癌组为93.3%(28/30),癌旁组为93.3%(28/30)。其中DNMT3b4在肝癌组中的表达高于癌旁组(P<0.05),与肝癌病理分化和CLIP评分无相关性(P>0.05)。结论:DNMT3b基因剪接变异体DNMT3b4可能参与肝癌的发生演变。

使用手性冠醚的高效毛细管电泳法研究伯胺类药物的手性分离

目的 采用HPCE法拆分伯胺类药物对映异构体。方法 缓冲液 2 0mmol/LTris 0 .1%H3 PO4(v/v)(pH 2 .0 6 ) +18 冠 6 四甲酸 (18C6H4) ;检测波长 2 10nm。结果 8种伯胺类药物得以拆分。结论 缓冲液中添加手性冠醚的HPCE法能较好地拆分伯胺类药物。

非索非那定对映体柱前手性衍生化反相高效液相色谱分析方法的建立

目的：建立适用于体外细胞模型的OATP1 B1手性底物非索非那定柱前手性衍生化分析方法，为测定细胞中非索非那定对映体提供分析手段。方法：选择R-（＋）-苯乙基异氰酸酯作为手性衍生化试剂，与非索非那定生成氨基甲酸酯衍生物，应用液相色谱-串联质谱法确定对映体衍生物色谱峰，通过反相高效液相色谱法实现对映体的分离分析。结果：在建立的手性分离条件下，成功实现非索非那定对映体分离分析，非索非那定两个对映体衍生物在25～100 ng/ml浓度范围内线性关系良好（R2＝0．9992，0．9989），日内、日间精密度均小于10％。结论：本实验建立的非索非那定对映体柱前手性衍生化反相高效液相色谱分析方法灵敏、准确，可用于体外细胞模型中盐酸非索非那定立体选择性分析。

马来酸噻吗洛尔原料和滴眼剂中对映体杂质的含量测定

目的：了解国内生产的马来酸噻吗洛尔及其滴眼液中对映体杂质含量，为我国药典制订手性药物杂质限量提供参考数据。方法：应用手性高效液相色谱法，色谱条件为：Chiralcel OD 手性柱（4．6 mm ×150 mm，5μm）；检测器波长297 nm；流动相为正己烷-异丙醇-二乙胺（480∶20∶1）；柱温25℃；流速1．0 ml/min，进样量5μl。结果：两个对映体的色谱分离度为4．3。不同厂家的两批马来酸噻吗洛尔原料药中的对映体杂质平均含量小于0．67％，3批马来酸噻吗洛尔滴眼液中的对映体杂质平均含量小于0．31％。结论：各批马来酸噻吗洛尔产品中对映体杂质含量均符合欧洲药典标准，我国药典可以参照此数据。

盐酸伐昔洛韦的手性分离及其对映体杂质的含量测定

目的：了解国产盐酸伐昔洛韦中L-对映体杂质的含量，为我国药典制订手性药物杂质限量提供参考数据。方法：应用手性高效液相色谱法。色谱条件：CROWNPAK？ CR（＋）手性柱（4 mm ×150 mm，5μm）；检测器波长254 nm；流动相为水-甲醇-高氯酸（19∶1∶0．1）；流速0．75 ml/min，进样量10μl。结果：D-伐昔洛韦与L-伐昔洛韦完全分离，分离度为12。不同厂家的8批盐酸伐昔洛韦中L-对映体杂质的平均含量为0．65％～2．62％。结论：各批产品中L-对映体杂质含量均符合美国药典标准，我国药典可以参照此数据。

体外细胞模型中氟伐他汀对映体的手性分离和含量测定方法学研究

目的:建立手性固定相(CSP)正相高效液相色谱法分离细胞裂解液中氟伐他汀对映体的分析方法。方法:采用直链淀粉-三[3,5-二甲基氨基甲酸酯]衍生物(Chiralpak AD)手性色谱柱(4.6 mm×250 mm),流动相:正己烷-无水乙醇-三氟乙酸(90∶10∶0.1),流速0.5 ml/min,检测波长:239 nm。结果:在建立的手性分离方法下,氟伐他汀消旋体在20μmol/L^300μmol/L浓度范围内线性关系良好,两个对映异构体的相关系数r2分别为0.9993、0.9997,方法回收率为(99.4±0.8)%,日内、日间精密度(RSD)均小于10%。结论:建立的正相手性固定相高效液相色谱法分离和测定细胞裂解液中氟伐他汀对映体的方法准确、可靠,可用于体外细胞模型中氟伐他汀的立体选择性研究。