一叶萩碱的高效毛细管电泳手性分离及其大鼠体内立体选择性代谢研究

目的 建立一叶碱 (SE)的高效毛细管电泳手性分离方法。方法 以羟丙基 β 环糊精 (HP β CD)为手性选择剂 ,测定条件为 :分离介质 3 2mmol·L- 1 HP β CD的Tris H3PO4 缓冲液 ( 4 0mmol·L- 1 ,H3PO4 调至pH 6 0 ) ;分离电压 15kV ,柱温 16℃ ,压力进样 6s ,检测波长 2 5 4nm ;大鼠各生物样品碱化后乙酸乙酯萃取。结果 测定条件下SE基本达到基线分离 ,大鼠生物样品测定不受内源及代谢物干扰。大鼠ipSE经胆汁、尿和粪排泄以d型为主 ,具有立体选择性。结论 本法简便可靠 ,可适用于SE在大鼠体内立体选择性代谢研究。

普萘洛尔对映体人体葡醛酸化立体选择性代谢研究

目的 测定健康志愿者口服一定量消旋普萘洛尔后尿中两种不同构型普萘洛尔葡醛酸苷的排泄量 ,研究普萘洛尔对映体人体葡醛酸化代谢的立体选择性。方法 用生物合成法合成R (+) 普萘洛尔葡醛酸苷 ,并经C18固相萃取柱纯化、浓集 ,得到标准储备液 ,用于尿中普萘洛尔葡醛苷含量测定 ,计算药动学参数。结果 R (+) 普萘洛尔葡醛酸苷与S(- ) 普萘洛尔葡醛酸苷的消除速率常数 (K)分别为 (0 2 833± 0 0 5 8)与 (0 194 6± 0 0 4 0 )h-1,达峰时 (tmax)分别为 (1 75± 0 33)与 (2 2 1±0 4 5 )h ,2 4h累积尿药量 (Xu)分别为 (2 95 2± 0 6 15 )与 (5 6 4 8± 0 977) μmol。 结论 人体葡萄糖醛酸转移酶对普萘洛尔光学异构体葡醛酸结合反应的催化作用有立体选择性。

大鼠肝微粒体细胞色素P4502B和P4503A参与吡喹酮对映异构体的立体选择性代谢

在细胞色素P4502B（CYP2B）和细胞色素P4503A（CYP3A）诱导剂苯巴比妥（PB）诱导的大鼠肝微粒体内,左旋吡喹酮（（-）-PZQ）代谢生成D环一羟化物（Ring D-OH）和A环一羟化物（Ring A-OH）;右旋吡喹酮（（+）-PZQ）代谢生成Ring D-OH,B环一羟化物（Ring B-OH）和Ring A-OH。用CYP2

重组人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶的克隆表达及应用

克隆、表达人和大鼠醇脱氢酶(ADH)、醛-酮还原酶(AKR)基因全长cDNA,研究扁桃酸(MA)代谢机制。设计引物,利用RT-PCR克隆人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶基因全长cDNA。测序正确的cDNA被克隆到表达载体pET-28a(+)上并在大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达。利用亲和色谱纯化相应的酶,通过检测其在340 nm吸收度值的变化进行酶活性测定。获得的醇脱氢酶与扁桃酸,醛-酮还原酶与苯乙酮酸(PGA)共孵育,采用HPLC分析其代谢和转化情况。通过测序,目的蛋白的cDNA序列完全正确,在宿主菌中获得良好的可溶性表达,经Ni2+亲和柱纯化后目的蛋白达到了电泳纯,具有较好的催化活性。人ADH2对扁桃酸的代谢具有立体选择性,优先代谢S-MA,对S-MA的代谢能力较强。大鼠ADH1对扁桃酸无代谢活性,人和大鼠AKR对苯乙酮酸均无代谢。成功构建人和大鼠醇脱氢酶、醛-酮还原酶的表达质粒,获得高活性的蛋白。这些重组酶模型可以用于由醇脱氢酶和醛-酮还原酶介导的药物代谢研究。