基于竞争性互补介导核酸恒温扩增技术快速检测沙门氏菌

食源性致病菌污染是食品安全问题的重要隐患之一,沙门氏菌是食品中最常见的食源性致病菌。为快速检测食品中的沙门氏菌,满足食品生产过程中实时检测监控的需要,基于竞争性互补介导核酸恒温扩增(competitive annealing mediated isothermal amplification,CAMP)技术,建立一种操作简便、准确性高、灵敏度高的沙门氏菌快速检测方法。以沙门氏菌invA基因保守区域片段为靶序列,利用DNAMAN设计特异性引物,并在己筛选获得沙门氏菌的CAMP引物基础上,应用CAMP引物设计推荐规则及作用位点,进行加速引物的设计和筛选,评估加速引物对扩增反应的影响;并且对建立的方法进行特异性及灵敏性的检测评估。同时与PCR方法进行比较。结果表明:以沙门氏菌invA基因为目标核酸所设计的一对CAMP引物可以实现对沙门氏菌的快速检测,而且在反应体系中引入加速引物可以将检测时间缩短15min;PCR方法的检测限为103CFU·mL-1,而本研究所建立的方法在65℃恒温条件下80min内检出沙门氏菌,检测限为10CFU·mL-1,检测效率和灵敏度均优于传统PCR方法,而且操作简便,无需精密、复杂的变温仪器;对3株沙门氏菌和10株非沙门氏菌进行特异性检测,3株阳性对照株检测全部为阳性,10株阴性对照菌检测全部为阴性,说明本试验所建立沙门氏菌快速检测方法具有良好的特异性,而且对沙门氏菌无漏检,具有较好的通用性。

利用逆转录环介导恒温扩增技术建立新型冠状病毒核酸快速检测方法

目的利用逆转录环介导恒温扩增技术建立新型冠状病毒核酸快速检测方法。方法针对新型冠状病毒的特征核壳蛋白N基因和开放阅读框1ab(ORF1ab)基因序列保守区设计引物,获得了RT-LAMP检测体系,并评价该体系的特异性、最低检测限、抗干扰能力和最佳反应时间。结果经检测新型冠状病毒核酸标准物质,其结果与预期相符,证实了该检测体系的可行性。结论利用逆转录环介导恒温扩增技术快速检测新型冠状病毒核酸的反应体系特异性好、灵敏度高,适用于边境条件有限地区。

环介导的核酸恒温扩增技术概述

环介导的恒温扩增技术是一种新的核酸扩增技术。本文介绍了该技术的原理、引物设计要点、反应体系的配制和产物的检测以及当前该技术在生命科学各领域的应用。

环介导恒温核酸扩增法的研究和技术方法

核酸扩增是生命科学领域最具价值的工具之一,在临床微生物检测、传染性疾病以及基因诊断方面具有独特的应用价值。传统的检测方法均存在一定的局限性,因此基于核酸扩增的检测方法具有广阔的应用前景。环介导恒温核酸扩增法(loop-mediatedisothermalamplificationofDNA,简称LAMP)是一种新型的核酸扩增方法,由于其特异性和灵敏度高、简便快捷且成本低廉,因此在可预见的将来,LAMP技术将在核酸扩增领域逐渐取代PCR反应,推动检测技术向更快捷简便,更精确廉价的方向发展。

新型恒温核酸扩增法快速检测副溶血性弧菌的研究

利用DNA环介导恒温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,LAMP)设计一对外引物和一对内引物,通过引物特异性识别tlh基因上的六个独立区域来快速检测副溶血弧菌。同时将检测结果与PCR方法进行比较。结果表明,LAMP反应在65℃恒温条件60min内完成,凝胶电泳呈现梯型条带;肉眼观察阳性结果出现白色混浊现象,添加1×SYBRGreenI荧光染料后,绿色的阳性结果很明显区别于橙色阴性结果;LAMP方法的最低检出限为10CFU/ml,PCR方法为103CFU/ml,LAMP方法检测灵敏度是PCR方法的100倍。因此,LAMP方法用于快速检测副溶血弧菌具有检测过程简单、反应结果肉眼即辨别并且灵敏度高特异性强的特点。实验装置简便,能够提供稳定热源即可,所以LAMP方法特别适合于现场快速诊断。

核酸恒温扩增技术研究进展

核酸恒温扩增技术在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。我们对核酸恒温扩增技术的最新进展作一简要综述,包括环介导恒温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列的扩增、滚环扩增、切口酶核酸恒温扩增、依赖解旋酶的恒温扩增、转录依赖的扩增、杂交捕获法、转录介导的扩增等的原理、优缺点及应用。

环介导恒温扩增技术在植物病原物检测中的应用

环介导恒温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型的核酸扩增方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简单且适合于多种检测环境等优点,自开发以来,其作为一种分子生物学检测技术,被广泛应用于许多领域。简要介绍了该技术的原理,综述了其在植物病原物检测方面的应用,讨论了其在应用中出现的问题,并针对这些问题提出了相应的解决办法,最后展望了其应用前景。

环介导恒温扩增技术(LAMP)及其在植物病毒检测中的研究进展

环介导恒温扩增技术是一种特异、灵敏、简单的新型核酸扩增技术,目前,该技术已经被广泛应用于疾病诊断、食品安全检测及基因芯片等领域。本研究简要介绍了该技术的原理、操作技术及特点,归纳了近些年来该技术在植物病毒(DNA病毒、RNA病毒)、类病毒检测中的应用,并指出了其在应用中呈现的问题及解决办法,最后展望了该技术在植物病害综合防控中的应用前景。

微流控芯片环介导等温扩增技术检测3种猪圆环病毒

为建立快速区分3种猪圆环病毒(PCV2、PCV3和PCV4)的现场检测方法,采用微流控芯片环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),收集3种猪圆环病毒临床阳性样本进行核酸提取,与市场上3种猪圆环病毒荧光探针法检测试剂盒进行灵敏度、特异性和重复性同步比对。结果显示:微流控芯片LAMP法在3种猪圆环病毒联检测试中具有非常高的灵敏度,可以在30 min内,实现不低于荧光定量PCR法的敏感性;与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒临床阳性样本均无交叉反应,特异性好;测试3种猪圆环病毒重复性Ct值变异系数(CV)均在2%以下,稳定性好。结果表明:3种猪圆环病毒微流控芯片快速联检技术特异性好、灵敏度高、重复性强,检测速度快,环境要求低,可以满足现场检测的要求,适用于养猪场等场所的猪圆环病毒现场快速检测。本方法的建立为猪相关病原体的现场快速核酸检测提供了有力工具。

环介导的恒温扩增技术及其在病毒性疾病诊断中的应用

环介导的恒温扩增(LAMP)是近年来新兴的一种快速DNA扩增技术,其基本原理在于利用4个特殊设计的引物和具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件下对靶序列进行扩增。LAMP技术具有特异性强、敏感性高、反应迅速、设备简单等特点,在人类病毒性疾病的诊断领域有着广泛的应用。

呼吸道病原体核酸恒温扩增芯片十三联检在肺炎患者中的应用

目的:研究呼吸道病原体核酸环介导恒温扩增芯片法(LAMP)十三联检在肺炎患者中的应用,为临床诊断肺炎患者合理用药提供依据。方法:回顾性分析我院2019年1月至2019年11月期间,收治的肺炎患者269例,留取患者痰标本,分别进行细菌培养和LAMP十三联检,对比两种检测方法检出病原体种类、阳性率、一致性差异。结果:通过McNemar检验发现,流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌、鲍曼不动杆菌及嗜麦芽窄食单胞菌,LAMP十三联检检出率高于痰培养,差异有统计学意义(P<0.05);Kappa检验显示,两种检测方法在大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌的检出率具有一致性(κ>0.4),对于肺炎链球菌两种检测方法的一致性较高(κ>0.7),而其他病原体两种检测方法一致性较差(κ<0.4)。结论:LAMP十三联检比细菌培养的检出率更高,在肺炎链球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌中检出结果基本一致,且具有敏感性高、检测迅速、准确性好的优点,有助于肺炎患者的早期诊断和治疗,对临床治疗策略的选择具有指导意义,值得推广应用。

环介导恒温扩增法检测痰液标本中肺炎链球菌

目的建立环介导恒温扩增(LAMP)技术快速检测痰标本肺炎链球菌的方法。方法根据基因序列数据库(GenBank)的肺炎链球菌R6株lytA基因序列(AE008540)设计特异LAMP引物,对痰液标本进行LAMP法检测,同时进行传统微生物检测和PCR检测。结果传统微生物检测肺炎链球菌阳性的27例标本,LAMP法检测和PCR检测也为阳性;在传统微生物检测肺炎链球菌阴性的27例标本中,LAMP法有9例检出阳性,PCR法有4例阳性,统计分析表明三种方法的阳性率无显著性差异。结论三种方法检测的阳性率无显著性差异,但LAMP法能够更快速、简便地检出肺炎链球菌感染。

环介导恒温扩增技术及其在昆虫学领域的应用前景

环介导恒温扩增技术是一种新颖的核酸扩增技术。本文介绍了环介导恒温扩增(LAMP)技术的原理、引物设计、扩增机制、产物检测等方面的内容,归纳了LAMP技术与常规PCR方法的优缺点;并对LAMP技术在病毒、细菌、寄生虫检测中的应用现状进行了阐述,展望了LAMP技术在昆虫检测鉴定领域的应用前景。

环介导恒温扩增技术快速检测幽门螺杆菌方法的建立及评价

目的建立基于DNA环介导恒温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)的快速检测幽门螺杆菌的方法,并对该方法的灵敏度及特异度加以验证。方法以幽门螺杆菌尿素酶B基因(Ure B基因)为靶序列设计5套特异性引物,通过比较各引物的扩增效率筛选出最佳引物组合用以快速检测幽门螺杆菌;收集临床标本,以13C呼气试验为金标准验证LAMP法检测胃液中幽门螺杆菌的灵敏度及特异度。结果幽门螺杆菌反应最佳引物组合为HPUB3,反应均在60 min内完成;应用LAMP法对80例胃液样本中幽门螺杆菌进行检测,其准确率为98.75%,灵敏度为97.06%,特异度为100%,与13C呼气试验结果无统计学差异(P>0.05)。结论 LAMP法检测幽门螺杆菌用时少且灵敏度、特异度均较高。本研究为实现胃镜下同步、无创、快速检测幽门螺杆菌奠定了基础。

环介导恒温扩增法检测肉制品中致病微生物

目的:建立一种食品中微生物核酸快速检测技术,在此基础上开发的简便、快速、灵敏,不依赖仪器适合基层应用的核酸快速检测试剂盒;并探索该试剂盒在肉及肉制品微生物检测中的应用。方法:根据单核细胞增生李斯特氏菌特有的靶序列vir R基因设计引物,采用环介导恒温扩增技术构建检测体系,优化、验证检测的特异度、检出限等指标,并与传统分离培养法比较。结果:本研究中的检测方法及试剂盒能专一的检出肉制品中的单增李斯特菌,对其他近源菌株检测呈阴性结果,检出限达1.81×103CFU/mL,与传统方法具有相同的灵敏度;检测操作简便快速,极少的设备依赖,适合规模推广。

环介导扩增与石英晶体微天平快速检测核酸

建立环介导恒温扩增(LAMP)-石英晶体微天平(QCM)原位快速检测核酸的方法。将环介导恒温核酸扩增(LAMP)技术与石英晶体微天平(QCM)技术相结合,采用巯基化试剂分子组装方法,将LAMP反应体系中的4个引物之一固定于QCM电极上,在安装所述电极的QCM检测池中配置LAMP反应体系并进行环介导恒温核酸扩增,用QCM仪器在线原位检测频率变化,判断LAMP反应是否发生,进而判断体系中是否存在目标核酸特异基因。该方法检测核酸特异性强、灵敏度高,并且操作简便,有望发展成为快速筛查检测核酸的有效手段。

恒温荧光扩增法快速检测食品中金黄色葡萄球菌

目的建立恒温荧光扩增法快速检测食品中的金黄色葡萄球菌.方法基于重组酶介导链替换核酸扩增技术针对金黄色葡萄球菌nuc基因的保守区域设计特异性引物和探针,建立了检测金黄色葡萄球菌的恒温荧光扩增检测方法,并评价其敏感性、特异性、重复性和符合率.结果该方法可在常温(37~42℃)实现核酸快速扩增,20 min即可完成反应;敏感性较高,金黄色葡萄球菌的检出限为9.12×10^(2) CFU/mL;特异性强,与大肠埃希氏菌O157∶H7、大肠埃希氏菌、单核细胞增生李斯特菌、鼠伤寒沙门氏菌、副溶血性弧菌的核酸均无交叉反应;不同稀释度菌液检测阈值时间的变异系数为5.78%~5.93%,重复性较好;采用该方法与荧光聚合酶链反应方法同时对50份临床样品进行检测,总符合率均为100%,差异不显著(P>0.05).结论本研究建立的金黄色葡萄球菌恒温荧光扩增检测方法具有敏感性高、特异性强、时间短的特点,可用于金黄色葡萄球菌的快速检测.

重组酶扩增技术概述及应用研究进展

重组酶扩增技术是近几年快速发展起来的一类等温扩增技术,相对于传统的核酸检测方法,具有设备要求低、操作简单等优势,在现场快速检测方面有着广阔的应用前景。本文简要介绍了重组酶扩增技术的技术原理、优点和难点,重点阐述了其在病毒、细菌、寄生虫及其他微生物检测领域的应用研究进展,旨在为重组酶扩增技术的进一步发展与应用提供参考。

环介导恒温核酸扩增法在病原微生物快速检测领域的应用

环介导恒温核酸扩增法(loop-mediated isothermal amplification of DNA,简称LAMP)是一种新型的核酸扩增方法,可以针对靶基因的目标区域形成多种片段的扩增产物。目前对于LAMP产物的检测主要有沉淀法,荧光法和电泳法。与PCR相比,LAMP不需要模板的热变性、长时间的温度循环、繁琐的电泳等,其扩增与检测过程可以实现一步完成。因此LAMP技术具有快速、简单、高特异性、高灵敏度和成本低廉的优点。随着LAMP技术的不断完善,在可预见的将来,其将在核酸扩增领域逐渐取代PCR反应,推动检测技术向更快捷简便、更精确廉价的方向发展。目前LAMP技术已应用于致病微生物和胚胎性别鉴定等检测,其中致病微生物包括致病细菌、真菌、病毒及寄生虫等。该检测技术在食品安全、临床医疗及水产等主要领域也受到广泛应用。本文主要介绍LAMP反应的特点及其在细菌、病毒、寄生虫和水产动物病原微生物快速检测领域中的应用。