检测T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法的研究

目的 本研究在自制T-2毒素酶标半抗原的基础上，结合市售抗T-2毒素单克隆抗体，建立了检测谷物中T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法粮食样品经70％甲醇-水溶液提取，用滤纸过滤并稀释后。再用0．45μm滤器过滤净化，该滤液用于ELISA检测。结果本方法最低检出量为0．125ng／ml，添加70-280ng／g T-2毒素的大米样品和面粉样品的平均回收率分别为85～117．5％和98．1～102．5％。结论结果表明，该方法简化了粮样提取步骤。可用于谷物及加工产品中T-2毒素的检测。

纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度

酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。

间接竞争酶联免疫吸附测定法快速筛查药酒中双氯芬酸

目的建立间接竞争酶联免疫吸附测定法快速筛查药酒中双氯芬酸(diclofenac,DCF)。方法采用活性酯法和混合酸酐法分别将DCF与载体蛋白耦合,得到DCF的免疫原和检测抗原。采用DCF-牛血清白蛋白免疫BALB/c小鼠,随后用杂交瘤等技术制备抗DCF单克隆抗体(monoclon alantibody,mAb),基于DCFmAb建立了间接竞争酶联免疫吸附测定法,对该检测方法的性能(准确度、精密度和特异性)进行鉴定。结果紫外扫描结果表明DCF已成功与载体蛋白偶联;获得最优株抗DCF的杂交瘤细胞株(4B9),其IC50值为0.61ng/mL;该检测方法在药酒中的DCF平均添加回收率为85.9%,其批间变异系数(coefficient of variation,CV)(5.3%~9.7%)均大于批内CV(4.9%~9.1%),与类似物(酮洛芬、阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、舒林酸、萘普生、罗非昔布)没有交叉反应。结论本研究建立的间接竞争ELISA法为DCF在药酒中的残留提供了一种新的筛查手段。

加工食品中花生蛋白夹心酶联免疫吸附测定的前处理方法探究与改进

目的构建一种可配合花生蛋白夹心酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒实现对于加工食品中花生成分可靠检测的高质量样品前处理方法。方法对9种不同pH的提取缓冲液提取未处理、湿热处理、干热处理花生蛋白效果进行比较分析以确定最优提取缓冲液类型。而后,将吐温-20、二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)以单独或组合添加的方式加入上一步获得的最优提取缓冲液中,提取3组花生蛋白,并对提取效果与夹心ELISA试剂盒检测花生蛋白回收率进行比较分析以确定最优添加剂配方。结果最终确定添加0.2%SDS和0.1%吐温-20的碳酸盐缓冲液(50 mmol/L,pH 9.6)为最优提取缓冲液。向碳酸盐缓冲液中加入SDS、吐温-20较好地提升了花生蛋白的提取率和回收率,将湿热处理花生蛋白回收率提高了2倍以上。结论本研究实现了对商业加工食品中花生成分的可靠检测,为推动过敏原信息在食品标签的准确标注提供了技术支撑,也为相关研究提供了参考。

研究电化学发光法和酶联免疫吸附测定法在检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物中的应用效果

目的:探讨电化学发光法(ECLIA)和酶联免疫吸附测定(ELISA)法在检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物中的应用效果。方法:选取2021年5月至2022年11月本院接收的检验科进行血清学检验的乙肝患者76例纳入研究,使用ECLIA和ELISA法,对乙型肝炎病毒感染血清学标志物进行检测,比较检验效果。结果:ECLIA法检验的准确率,比ELISA法高(P<0.05);ECLIA法检测的乙型肝炎e抗原阳性率为97.37%、乙型肝炎表面抗原的阳性率为96.05%、乙型肝炎e抗体阳性率92.11%,与ELISA法的86.84%、84.21%、77.63%相比,明显更高(P<0.05);而乙型肝炎表面抗体、乙肝核心抗体阳性率89.47%、92.11%、ELISA法为82.89%、85.53%,相比无统计学意义(P>0.05);乙肝炎e抗原、乙肝炎表面抗原、乙肝炎e抗体,ECLIA法检测,要高于ELISA法(P<0.05);而乙型肝炎表面抗体、乙肝核心抗体两种方法比较无差异(P>0.05)。结论:在乙肝病毒的血清学检验中,ECLIA阳性检出率更高。

酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量PCR法对乙型肝炎的诊断价值比较

目的比较酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法在乙型肝炎诊断中的应用价值。方法选取120例疑似乙型肝炎患者作为本次研究对象,分别进行酶联免疫吸附测定法以及实时荧光定量PCR法检验。以病理检查为金标准,分析酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量PCR法的检查结果,对比两种检查方法的诊断效能,包括特异度、灵敏度以及准确度。结果120例疑似患者经病理检查确诊75例为乙型肝炎。酶联免疫吸附测定法检出阳性74例,阴性46例;实时荧光定量PCR法检出阳性75例,阴性45例。实时荧光定量PCR法检测乙型肝炎的特异度、灵敏度以及准确度分别为93.33%、96.00%、95.00%,均明显高于酶联免疫吸附测定法的73.33%、82.67%、79.17%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.4800、6.9963、13.3724,P<0.05)。结论采用实时荧光定量PCR法进行乙型肝炎的检测具有较高的准确率,可以为医生诊断和治疗方案的制定及调整提供良好的依据。

电化学发光免疫分析与酶联免疫吸附测定法应用于乙型肝炎病毒血清学检验中的效果分析

目的对比乙型肝炎病毒血清学检验过程中采用电化学发光免疫分析(ECLIA)与酶联免疫吸附测定法(ELISA)的效果。方法90例乙型肝炎患者,分别以电化学发光免疫分析、酶联免疫吸附测定法进行病毒血清学检验。对比两种诊断方法对乙型肝炎病毒[乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)]阳性检出率以及不同浓度下两种检验方法HBsAg重复性。结果电化学发光免疫分析对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg、HBeAb的阳性检出率分别为85.56%、33.33%、48.89%、31.11%、64.44%;酶联免疫吸附测定法对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg、HBeAb的阳性检出率分别为83.33%、32.22%、45.56%、27.78%、44.44%。两种检验方法对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg的阳性检出率对比无统计学差异(P>0.05),电化学发光免疫分析对HBeAb的阳性检出率明显高于酶联免疫吸附测定法(P<0.05)。两种检验方法在高浓度HBsAg批次间重复性相近,而电化学发光免疫分析在高浓度HBsAg批次内及中、低浓度HBsAg批次间、批次内重复性均明显低于酶联免疫吸附测定法。结论乙型肝炎患者接受病毒血清学检验可首选电化学发光免疫分析,其具有检出率高、结果准确等优点,值得临床运用并推广。

化学发光法与酶联免疫吸附测定法在乙型肝炎病毒感染血清标志物检验中的应用效果比较

目的比较化学发光法与酶联免疫吸附测定法(ELISA)在乙型肝炎病毒(HBV)感染血清标志物检测中的应用效果。方法选取2018年6月至2021年3月本院收治的82例疑似乙型肝炎患者作为研究对象,所有患者均采取化学发光法及ELISA检测,以实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法作为金标准,比较两种检测方法的诊断价值、阳性检出率、重复性。结果PCR共检出阳性53例,阴性29例;化学发光法阳性52例,阴性30例;ELISA检出阳性51例,阴性31例。化学发光法检测HBV感染血清标志物的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05)。化学发光法HBeAb、HBeAg、HBsAg阳性检出率均明显高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与ELISA比较,化学发光法检测HBV感染血清标志物效果更好,诊断价值、阳性检出率均较高,值得临床推广应用。

酶联免疫吸附测定法与甲苯胺红不加热血清试验在梅毒检测中的价值分析

目的探讨酶联免疫吸附测定法(ELISA)与甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)在梅毒检测中的价值。方法选取2019年1月至2022年12月于我中心检查的1500例梅毒高危患者,所有入选者均进行ELISA、TRUST、TPPA检查。以TPPA为金标准,分析ELISA、TRUST诊断效能。结果1500例梅毒高危患者,TPPA确诊42例为梅毒患者。ELISA诊断梅毒的灵敏度95.24%(40/42)、特异度99.59%(1452/1458)、准确度99.47%(1492/1500)、阳性预测值86.96%(40/46)、阴性预测值99.86%(1452/1454)均高于TRUST(78.57%、98.63%、98.07%、62.26%、99.38%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论梅毒筛查中使用ELISA诊断效能高于TRUST,能够更有效地检出梅毒抗体,提升临床诊断准确率,值得临床广泛应用。

间接竞争酶联免疫吸附测定水产品中的组胺残留

本文通过制备特异性识别组胺衍生物的多克隆抗体,建立了针对水产品中组胺的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。以组胺等为反应原料经三步化学反应合成组胺半抗原,采用活泼酯法将组胺半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联作为包被原和免疫原,用紫外扫描法进行鉴定,结果显示组胺半抗原与载体蛋白偶联成功。通过免疫新西兰大白兔制备组胺抗血清,采用辛酸-硫酸铵方法纯化血清获得了相应的特异性多克隆抗体。通过对icELISA系列反应条件的摸索,确定了各组分的最适工作条件。试验结果表明:该方法对于组胺的IC50为0.91 ng/mL,与组氨酸、N-酰基组氨酸、3-甲基组胺等多种类似物及其衍生物均无交叉反应,方法特异性良好;线性检测范围为0.1~8.1 ng/mL,检出限为0.10 ng/mL;按照10、20、30 ng/g的添加量添加组胺至鱼、虾和贝类样品中,测得其回收率为98.9%~130.1%。方法检测的准确性好灵敏度高,适用于实际水产样品中组胺的检测。

鲀毒鱼类中河鲀毒素直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法的研究

为检测毒鱼类中的河毒素 ,建立了用抗河毒素单克隆抗体检测河样品中河毒素的直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法。结果表明 ,直接ELISA法较间接ELISA法灵敏 ,最低检出浓度为 0 1ng mL(每检测孔 0 0 1ng) ,线性范围为 5～ 5 0 0ng mL ,方法的加标回收率为73 0 %～ 118 0 %。本法与传统的小鼠生物试验相比 ,两种方法的测定结果之间在统计学上差异无显著性 (配对t检验 ,P >0 1) ,并具有良好的相关性 (r =0 94 4)。对来自江苏省东海和长江水域的河样品的毒力进行了测定 ,结果表明本方法简单、快速、灵敏 。

应用竞争性酶联免疫吸附试验检测鸡产蛋下降综合症抗体

用鸡产蛋下降综合症(Egg Drop Syndrome-76,EDS-76)灭活油佐剂苗,免疫30周龄产蛋鸡,获取高免血清。提取特异性免疫球蛋白后,用辣根过氧化酶标记,制备成酶标抗体,建立了竞争性酶联免疫吸附试验。该法与血凝抑制试验的平行测定的比较结果为,前者的阳性检出率为71.8%,而后者为59.0%,所以前者明显地优于后者。而且该试验敏感性高,特异性强,具有快速、准确的优点,适用于大规模的检测和检疫。

血站实验室梅毒抗体酶联免疫吸附测定检测试剂的应用效果分析

探究血站实验室梅毒抗体(抗-TP)酶联免疫吸附(ELISA)测定检测试剂的应用效果。方法 于2020年1月~2021年9月我站采集的18254份无偿献血标本为研究对象,应用ELISA进行检测,分析检测结果。结果 18254例血液样品中,ELISA检测抗-TP反应性为112例,其中85例被TPPA确证为真阳性,ELISA检测敏感度43.15%、特异度100.00%、准确度99.39%;通过ELISA确诊112例具有抗-TP,其中108例为金豪TP-ELISA反应,TPPA确认数为105例,灵敏度为 97.22% ,特异度为100.00% ,漏诊率为 2.78%;英科创新TP-ELISA反应104例,TPPA确认数为102例,灵敏度为 98.08% ,特异度为100.0% ,漏诊率为 1.92%。结论 ELISA法测试抗-TP酶假阳性率较高,建议报废相应血液,献血者归队并再次献血。

竞争法酶联免疫吸附分析测定人类血浆载脂蛋白M监测方法的建立及应用

目的:建立人类血浆载脂蛋白M(ApoM)竞争法酶联免疫吸附分析检测方法。方法:建立人类血浆ApoM蛋白竞争法酶联免疫吸附分析(ELISA)检测方法,与人类重组ApoM蛋白标准含量进行对照,并利用该方法对932份健康人群血浆ApoM蛋白进行检测。结果:竞争法ELISA能准确测定人类血浆ApoM的浓度,健康人群血浆ApoM的中位数值为20.58mg/L。结论:竞争法ELISA操作方便、准确,可用于人类血浆ApoM蛋白的检测,为人类血浆ApoM的基础和临床研究提供了科学基础。健康人群血浆ApoM蛋白浓度为20.58mg/L。

中国利用异源竞争性抗原提高原料乳中恩诺沙星的酶联免疫吸附测定灵敏度

利用异源竞争策略已成为提高酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测灵敏度的重要手段。中国研究人员以抗恩诺沙星(antienrofloxacin,ENR)-牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)为免疫原,制备ENR单克隆抗体,然后利用喹诺酮类物质的分子描述符筛选异源性包膜抗原,用于ENR的检测,基于集成学习方法,提高ELISA实验的检测灵敏度。结果表明:7种外源竞争抗原中有6种能提高ELISA实验的灵敏度;与ENR-BSA作为同源包被抗原相比,以抗沙拉沙星-BSA作为异源包被抗原时的检测灵敏度提高10倍(PBS中)和6倍(牛乳中)。

间接竞争酶联免疫吸附分析法测定土壤和面粉中的异丙隆

采用自制的抗异丙隆多克隆抗体建立了测定异丙隆残留的间接竞争酶联免疫分析方法,优化的包被抗原和抗体的浓度分别为0.1和0.016mg·L-1。结果表明,6种常用的与异丙隆结构相似的脲类除草剂的交叉反应都小于0.6%,标准曲线的线性范围为3.42～121.33ng·mL-1,线性相关系数r2=0.9410,方法的检测限为3.42ng·mL-1。利用建立的间接竞争ELISA方法检测土壤和面粉样品中的异丙隆,测得土壤中异丙隆的加标回收率为100%～108%,变异系数为3%～6%;面粉中异丙隆的加标回收率为81%～84%,变异系数为5%～7%。

环鸟苷酸兔单克隆抗体的制备和竞争酶联免疫吸附测定方法的建立

目的：研制环鸟苷酸（cGMP）兔单克隆抗体，并建立测定cGMP浓度的竞争ELISA方法。方法：用人工合成的环鸟苷酸一钥孔血蓝蛋白（cGMP-KLH）免疫新西兰大白兔，采用Epitomics公司的兔单克隆抗体技术制备针对cGMP的兔单克隆抗体；应用cGMP兔单克隆抗体建立竞争ELISA方法，并对该方法的特异性、精密度和回收率进行测定。结果：所制备的cGMP兔单克隆抗体的效价为3．1．g／mL，50％抑制浓度（IC50）为12．57ng／mL。与环磷酸肌苷的交叉反应率为33．1％，与其他结构类似的化合物无交叉反应。所建立的cGMP竞争ELISA方法的检测范围为0～120ng／mL，最低检测限为1．95ng／mL，回收率为89％～103％，批次内和批次间的精密度分别小于11．68％和13．85％。结论：成功制备高效价、高特异性的cGMP兔单克隆抗体，并建立了测定cGMP浓度的竞争ELISA方法。

间接竞争酶联免疫吸附法测定花生中的乙草胺

乙草胺属于酰胺类除草剂，英文名为Acetoclor，化学名为2-乙基-6-甲基-N-（乙氧甲基）-2-氯代乙酰替苯胺，广泛应用于大豆、棉花、花生、玉米等多种作物。乙草胺具有较长的降解周期，对人和动植物有一定的毒害作用，已经被美国环境保护局定为B-2类致癌物，规定其在地下水中的残留量不得超过0．1μg/L。试验应用乙草胺抗体、包被原和过氧化氢酶标记的羊抗兔抗体建立间接竞争酶联免疫吸附（ELISA）法试剂盒检测花生中的乙草胺残留量，现报道如下。

间接竞争酶联免疫吸附法测定黄原胶

目的建立间接竞争酶联免疫吸附法测定食品中的黄原胶。方法应用黄原胶抗原免疫的绵羊多克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫吸附方法,对黄原胶进行检测分析。结果黄原胶的检测限为0.1ng/ml,有效检测区间为0.1～1×103ng/ml。组间及组内差异均小于10%。烧烤酱和凯撒沙拉酱中的黄原胶检测限为50ng/ml,有效检测区间为50～5×103ng/ml。烧烤酱和凯撒沙拉酱中黄原胶回收率分别为72.0%～89.8%和102.6%～119.0%。结论本方法简单、快速、成本低,重现性好,适合检测食品中的黄原胶。

竞争酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的研究

介绍了竞争酶联免疫吸附法测定猪肉中的盐酸克伦特罗的方法。利用盐酸克伦特罗试剂盒,对猪肉组织中的盐酸克伦特罗残留经抽提、竞争后,用酶标仪进行检测分析。此法较适用于现场检验,检测速度快灵敏度高,是保证肉品卫生安全的较好监控方法。