竞争性RT-PCR法定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因的表达

目的 :建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,以研究GPI PLD与白血病等疾病的关系。方法 :首先用PCR定点诱变法构建GPI PLD的竞争性cDNA模板 ,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区 ,但在长度上要比靶cDNA少 2 0个碱基。把该竞争性cD NA模板在体外转录出的竞争性RNA作为RT PCR的内标准 ,与白血病细胞株K5 6 2细胞的总RNA在同一体系内进行逆转录和PCR扩增 ,二者的PCR产物因长度不同可经电泳区分开 ,然后对电泳图像进行光密度扫描 ,根据已知的竞争性RNA模板的量计算出GPI PLDmRNA的量 ,从而得到GPI PLD基因的绝对表达量。结果 :构建和制备了长度为 198bp的GPI PLD竞争性RNA模板 ,该模板与靶模板呈明显的竞争性RT PCR反应 ;测得K5 6 2细胞GPI PLD基因的表达水平为每纳克 (44 0± 2 0 )拷贝。结论 :成功地建立了一种定量检测GPI PLD基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,该方法具有灵敏、准确等优点。

改进竞争性RT-PCR法在定量PER1基因表达中的应用

目的研究使用不同样品稀释液及变性高效液相色谱(DHPLC)梯度条件对定量检测PER1基因表达的影响。方法竞争性RT-PCR与DHPLC结合定量检测基因表达。结果样品稀释液中含有载体可极大提高实验的重复性、准确性;不同DHPLC梯度条件对定量结果无明显影响。结论建立定量PER1基因mRNA表达水平的竞争性RT-PCR系统有助于精确检测微量标本中节律基因表达的变化,探寻生物节律与疾病状态间的关系。

竞争性RT-PCR法及对大肠杆菌acrA基因mRNA表达水平的定量研究

建立了用于检测大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC25922的acrA基因mRNA表达水平的定量竞争性RT-PCR(QC-RT-PCR)体系。PCR合成目标片段的突变型片段(321bp)作为内标准模板(Internal standard,IS),与目标片段一致的片段(389bp)作为目标模板(Target standard,TS),优化两种模板共扩增体系;梯度稀释IS与等量大肠杆菌cDNA样本共扩增,扫描电泳条带,软件分析数据。结果表明,引物设计合适,以IS和TS为模板实现共扩增,产物(321bp和389bp)通过1.5%琼脂糖凝胶电泳有效分离;梯度稀释IS与cDNA共扩增产物出现亮度梯度电泳条带;获得一元回归曲线y=-0.345+0.097x(相关系数r=0.959,标准差s=0.05997)。该研究成功构建内标准模板,优化的共扩增PCR体系实现了对大肠杆菌ATCC25922中acrA基因mRNA表达水平的检测,具有简便、高效、敏感度高等优点。

竞争性RT-PCR法定量分析骨巨细胞瘤中TGFβ-1 mRNA的表达水平

目的 用竞争性PCR法检测骨巨细胞瘤（GCT）中TGFβ- 1mRNA，分析其对肿瘤预后的意义。方法 通过RT- PCR法制备内标和外标，将等量的内标和等比稀释的外标进行竞争性共扩增，得到标准曲线，然后将等量的内标和cDNA标本共扩增，通过标准曲线求出标本中TGFβ- 1mRNA的水平，并与GCT分级进行对比。结果 内标和外标在共扩增中表现出很强的竞争性。GCT中TGFβ- 1 mRNA的表达水平随着肿瘤分级的上升明显增加，局部复发和肺转移的标本中TGFβ- 1mRNA表达水平较未复发的标本高。结论 竞争性RT- PCR是一种灵敏，简便、快速检测GCT中TGFβ- 1mRNA表达水平的方法。应用该方法和肿瘤病理分级标准来综合判断肿瘤的预后，有着重要的临床意义。

竞争性决断:一个无共识决策模式——以慈善法中税收政策的制定为例

虽然共识模式很好地体现了中国决策过程的制度特征,但仍存在类型代表不足以及概念模糊等问题。本文基于中国政治体制和治理机制提出了“竞争性决断”这一概念,该概念有效地融合了决策过程的民主性和高效性。文章以慈善法中税收政策的制定为例,从权力运行过程中纵向的决断和横向的博弈两个维度构建决策分析框架。通过打开决策“黑箱”分析了在无共识情况下各行动者之间的互动过程。研究发现,税收政策的制定本质上是各行动者基于自身的资源禀赋和权力进行竞争的结果。在慈善法的起草阶段,各部门在协商无果的情况下选择搁置争议;在审议阶段,各方开展权力博弈,在无法有效达成共识的情况下,基于行动者不同的权力对比,搁置争议或寻求上级决策成为主要策略,上级决断有效保障了决策的效率。因此,从权力的分配和行使出发才能更好地理解中国特色的决策过程,也有助于更好地理解全过程人民民主的实践过程。这一概念有效涵盖“共识决策”等类型,增加了对决策过程的解释力。

含非竞争性内标四重荧光RT-PCR方法检测手足口肠道病毒方法的研究

旨在了解手足口病的流行和感染情况,并进行快速准确的检测。建立了含非竞争性内标的同时检测肠道病毒通用型、肠道病毒EV71型及柯萨奇病毒CA16型的四重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评价,并对多份临床样本进行应用检测。结果表明,该检测方法特异性强,对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行检测,显示了良好的特异性;该检测方法对EV71型和CA16型的检测灵敏度分别达到31.25 TCID50和1.25×102TCID50;将浓度为1×104TCID50及5×102TCID50的EV71样本进行重复性试验,其变异系数均小于1.5%;将浓度为5×102-5×105TCID50的EV71和CA16样本进行线性试验,其相关系数R2值在0.982-0.998之间。采用本研究建立的方法检测40份疑似临床样本,最后检出31份肠道病毒阳性样本,其中8例EV71型阳性,13例CA16阳性。另外,试验数据表明,内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用。本方法能同时快速检测所有肠道病毒并进行EV71型及CA16型的分型,并且灵敏度高、特异性好、扩增效率高,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测。

竞争性采购装备合同监管创新方法体系之(九)负面清单法

针对竞争性采购合同监管中承制单位资格监督不全面的问题,为有效掌握承制单位经营信用状况,本文提出负面清单法,阐述了其方法背景、设计思路、实施流程、需注意的问题,对创新开展竞争性采购合同监管工作有一定参考价值。

竞争性采购装备合同监管创新方法体系之(五)动态更替法

针对竞争性采购合同监管中因竞标进度滞后导致型号装备配套单位迟迟不能确定的问题,为推动合同监管体系工作顺利开展,本文提出动态更替法,阐述了其方法背景、设计思路、实施流程、需注意的问题,对创新开展竞争性采购合同监管工作有一定参考价值。

竞争性采购装备合同监管创新方法体系之(十三)用户告知法

针对竞争性采购装备用户对装备特殊点及特殊情况不了解的问题,为有效发挥装备使用效能,本文提出用户告知法,阐述了其方法背景、设计思路、实施流程、需注意的问题,对创新开展竞争性采购合同监管工作有一定参考价值。

竞争性采购装备合同监管创新方法体系之(六)多项选择法

针对竞争性采购合同监管中监管实施方案形式化、可执行性不强的问题,为有效应对合同监管风险,本文提出多项选择法,阐述了其方法背景、设计思路、实施流程、需注意的问题,对创新开展竞争性采购合同监管工作有一定参考价值。

竞争性自适应重加权算法和相关系数法提取特征波长检测番茄叶片真菌病害

基于竞争性自适应重加权算法(CARS)和相关系数法(CA)特征波长选择方法,提出了利用可见-近红外高光谱成像技术检测番茄叶片灰霉病的方法。首先获取380~1 023nm波段范围内80个染病和80个健康番茄叶片的高光谱图像,然后提取染病和健康叶片感兴趣区域(ROI)的光谱反射率值,作为番茄叶片灰霉病鉴别模型的输入来建立支持向量机(SVM)鉴别模型,训练集和验证集的鉴别率都是100%。研究进一步通过CARS和CA提取特征波长,分别得到5个(554,694,696,738和880nm)和4个(527,555,571和633nm)特征波长,然后分别建立CARS-SVM和CA-SVM鉴别模型。结果显示,CARS-SVM模型中训练集和验证集的鉴别率都是100%,CA-SVM模型中训练集和验证集的鉴别率分别是91.59%和92.45%。以上结果说明了从可见-近红外高光谱图像中提取的光谱反射率值用于检测番茄叶片的灰霉病是可行的。

应用内含子法构建PC基因mRNA竞争RT-PCR内参照

运用PC基因mRNA与PC基因DNA相比缺少1个81bp内含子序列的基本原理,应用PCR技术和生物工程原理,通过1对引物,进行1次克隆,成功构建了PC基因mRNA的466bp竞争DNA模板重组质粒,PC基因mRNA与PC基因DNA可以互为内参照。为应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测糖代谢过程中PC基因mRNA水平奠定方法学基础。

一种简单快速测定竞争性等温线的新方法——前流速度分析法

以间二酚和对苯二酚二元体系为例,以甲醇－水(体积比２０:８０)为流动相,采用前流速度分析法测定了该体系在Ｃ１８－硅胶固定相上的竞争性等温线．在相同实验条件下与传统的矩型脉冲法对该体系测定结果进行比较,结果表明,该法不仅能够准确测定二组分竞争性等温线,而且具有简单、快速等优点．

论数据集合的反不正当竞争法保护

公开、非独创性数据集合具有显著的商业价值,承载着经营者的竞争性权益。数据集合的法律保护存在权利赋予路径和行为规制路径两种模式,基于数据集合法律保护实践和平衡数据保护与利用的需要,我国目前宜选择行为规制路径,运用《反不正当竞争法》对数据集合进行保护。由于《反不正当竞争法》“互联网条款”的适用出现失灵,“一般条款”的适用具有不确定性,《反不正当竞争法》修订时应增设数据集合保护条款。针对这一专门条款进行设计,一方面要明确数据集合不正当竞争行为的构成要件,另一方面要以“适用除外”的方式划定数据集合法律保护的限度。

竞争性RT-PCR检测哮喘患者IL-8表达水平

利用反向ＰＣＲ法，缺失人ＩＬ－８ｃＤＮＡ内部ｂｐ序列，构建得到ＩＬ－８突变内标分子．用 已知量的该内标分子，通过竞争性ＲＴ－ＰＣＲ法、检测支气管哮喘患者外周血ＩＬ－８基因的表达情 况，发现患者ＩＬ－８ｍＲＮＡ的表达水平明显高于正常人对照组．这一结果初步表明，利用竞争 性ＲＴ－ＰＣＲ技术对支气管哮喘息者进行早期基因诊断，具有一定的可行性。

论军事情报分析中竞争性假设分析法的应用

由于军事情报分析人员认知偏见和思维定势的存在,长期困扰着军事情报分析的科学性和有效性。针对这一现状,介绍了竞争性假设分析法(ACH)在军事情报分析中的应用。

结构化改进竞争性假设分析法

竞争性假设分析法是当今美国情报界使用最为广泛的情报分析方法之一,经过不断改进完善,已成为一种成熟的分析方法,但该方法存在对证据准确性信赖度高、分析过程耗时长,处理复杂事件时操作不便等缺点,本文拟提出进行结构化改进,辅以自动化技术支持的设想,以使该方法能为更多分析员接受并广泛投入工作实践,提高分析效率和分析质量。

中国足球超级职业联赛的竞争性平衡分析——基于相对积分率标准差法

对国内外职业体育竞争性平衡的概念、测量方法进行综述、分析和整合,发现一些具体的衡量方法在实际运用中存在各种问题,如胜率标准差法只能运用于或胜或负的比赛中,无法运用于衡量像足球这样具有平局情况的赛事。从而提出相对比较优化的"相对积分率标准差法",以具体量化的方式衡量各赛季中超联赛各俱乐部之间的竞争性平衡程度。结果发现:(1)相对积分率标准差法在一些具有平局情况的赛事中能够科学量化其竞争性平衡程度;(2)中超联赛与英超联赛相比,自2004赛季以来各俱乐部(运动队)在竞技能力竞争性上一直处于高度不平衡状态。并从中超联赛的内外部各方面的因素进行分析,提出若干建议。

竞争性假设分析法在大型突发性事件分析中的应用研究——以“马航MH370失联事件”为例

随着大数据时代的来临,信息与数据的作用也越来越明显。面对如此海量的,甚至掺杂着虚假信息的数据,分析人员在分析的过程中不可避免的会受思维定势以及认知偏好的影响。针对此状况,引入竞争性假设分析法(ACH),通过对马航失联事件的分析,介绍ACH方法及其在大型突发性事件中的应用,以此推动ACH在实际应用中的进一步发展。

基于网络分析法的R&V非竞争性战略联盟伙伴选择:以文化购物网联姻幸运甜饼为例

R&V非竞争性战略联盟为现实资源与虚拟资源的整合提供了创新性的商业模式。根据其非竞争性、用户共享、闲置资源互换等特征以及已有文献,R&V非竞争性战略联盟伙伴选择应包含4个因素,即兼容性、能力、互补性及其他,并可细分为19个评价指标,可以此构建出R&V非竞争性战略联盟伙伴选择的分析结构。