竞争性抑制酶联反应在量热式农残生物传感器中的试验研究

以量热式农残生物传感器为研究对象,借鉴免疫分析方法,进行竞争性抑制酶联反应在量热式农残生物传感器中的试验研究。结果表明,在甲胺磷浓度为0~0.004 mg.kg-1范围内,甲胺磷含量和放热量之间的线性较好,竞争性抑制酶联反应分析法测农药残留的最低检测限为0.0011 mg.kg-1,每次测定时间为20 min。

量子点标记链霉亲和素及其生物活性检测

选用无机盐为前驱体,在水相中合成CdTe量子点,并用此量子点标记链霉亲和素,通过SephadexG-100层析分离纯化量子点标记的链霉亲和素,采用磁颗粒标记的链霉亲和素与量子点标记的链霉亲和素竞争结合辣根过氧化酶标记的生物素,即酶联免疫竞争抑制分析法检测链霉亲和素标记量子点后的生物活性,计算约70.3%的链霉亲和素标记到量子点上,且具有生物活性。每毫克量子点大约可偶联0.14 mg的链霉亲和素。采用荧光光谱研究量子点标记前后的荧光变化,标记后量子点的最大发射波长蓝移了8 nm,而发射光谱的半峰宽基本不变,说明量子点与链霉亲和素结合后粒子没有团聚,分散性好。

桃拉综合征病毒VP1高变区蛋白抗体制备及初步特性分析

目的:制备高效价的桃拉综合征病毒主要结构蛋白VP1高变区蛋白抗体,分析其免疫特性,为研究免疫诊断试剂做参考。方法:将p ET-VP1重组载体转化入大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达。重组VP1蛋白纯化后免疫新西兰家兔,用琼脂扩散试验及ELISA检测抗体效价,用与VP1纯化蛋白特异性结合的单克隆噬菌体做竞争抑制试验。结果:p ETVP1重组蛋白在大肠杆菌BL21中呈可溶性高效表达。抗血清经琼扩试验鉴定效价达1∶26,ELISA效价达1∶217。与VP1蛋白特异结合的单克隆噬菌体能阻断部分抗血清与VP1蛋白的结合活性,但不影响最终检测阳性的判断。结论:制备的VP1高变区蛋白抗体效价高,VP1蛋白少数区域的位点变异并不影响多克隆抗体的结合活性,可用作免疫检测诊断试剂。

磁性分离用于小分子物质生物素标记后的快速纯化

根据生物素标记反应的不可逆性,设计了一种基于磁性分离的快速纯化方法.该方法使用固定在磁性粒子上的牛血清白蛋白(BSA)与生物素标记甲状腺素(T4)反应后过量的活性生物素试剂继续反应,形成磁性粒子-BSA-生物素复合物,再通过磁性分离可快速除去复合物.实验中用酶免疫分析方法检测过量的活性生物素试剂和磁性粒子的反应程度,并用竞争抑制反应证明了经磁性分离得到的上清液为高纯度生物素标记的T4.该纯化方法解决了小分子物质生物素标记后难以用传统方法纯化的问题,操作快速、简单,特别适用于小分子生物物质进行生物素标记后的纯化.