竞争抑制ELISA法检测植物中豌豆胰岛素PA1b

为研究豌豆胰岛素PA1b在植物生长发育中的作用,利用竞争抑制ELISA法,检测PA1b在豌豆、芋头、姜、西红柿、苦瓜、蒜头、洋葱、丝瓜、黄瓜等植物中的分布,以及PA1b在豌豆种子发芽过程中的含量变化。结果显示PA1b在豌豆中含量最高,且随着豌豆种子发芽时间的增加含量逐渐减少,PA1b可能对植物生长发育起调控作用。

猪瘟病毒中和抗体竞争抑制ELISA检测方法的建立

利用杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经筛选确定,CI-ELISA的抗原最佳包被浓度为3μg/mL,酶标竞争抗体的最佳稀释度为1∶4 000,阴性血清临界值为33%,阳性血清临界值为40%。CI-ELISA的检出下限为1∶44(中和抗体效价),与进口阻断ELISA试剂盒的符合率为85.00%,高于间接ELISA与进口阻断ELISA试剂盒的符合率(81.25%),CI-ELISA与其他主要病毒的阳性血清均无交叉反应。对采自我国4个省份的290份现地血清进行CI-ELISA检测,结果273份(94.1%)为CSFV抗体阳性。

加样间隔时间对ELISA竞争抑制法检测结果的影响

目的:探讨“加样间隔时间”对酶联免疫吸附试验(ELISA)竞争抑制法检测人血清HBeAb、HBcAb结果的影响。方法:随机检测91份HBeAb、HBcAb阴性的血清样本,加样后室温25℃分别放置0min、5min、10min、15min、20min、30min[1]再加入酶标抗体(HBeAb组先加中和试剂),其后严格按试剂盒说明操作。结果:0min、5min、10min、15min、20min、30min时,HBeAb组阳性率为0、3.3%、10.9%、16.5%、24.2%、37.3%;HBcAb组阳性率分别为0、4.3%、12%、18.6%、26.3%、40.6%;与加入酶结合物0min组标本A值比较,HBeAb、HBcAb均5min、10min组P>0.05,其余各组P<0.01。结论:随着加入样本与酶标抗体间隔时间的延长,HBeAb、HBcAb测定的假阳性率逐渐增加,应在加样后10min内加入酶标抗体,避免标本先与固相抗原结合引起的假阳性。

竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖的含量

目的采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的含量,以替代小鼠免疫力试验方法。方法用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,并分析与小鼠免疫力试验检测结果的一致性。结果霍乱灭活疫苗中LPS的含量与疫苗保护力呈正相关。结论采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,能够反映疫苗的保护力,为进一步替代小鼠免疫力试验方法奠定了基础。

葡聚糖多克隆抗体竞争抑制ELISA检测方法的建立

采用广州甘蔗糖业研究所和厦门大学共同研制的抗葡聚糖多克隆抗体和DEX-OVA交联的免疫原,确定了最佳的抗原包被浓度为5ug/ml,最佳的多抗工作浓度为1:8000。建立了竞争抑制ELISA定量检测葡聚糖的方法,并尝试了对原糖样本的检测。

ELISA竞争抑制法检测Anti-HBe试剂盒共系统检测HBeAg结果分析

目的探讨用竞争抑制法检测Anti-HBeEIA[预包被纯化乙肝e抗原]商品试剂盒共系统检测HBeAg的可行性及结果判定方法。方法用竞争抑制法检测Anti-HBeELISA试剂盒共系统检测1000份随机血清(浆)标本Anti-HBe与HBeAg,并与常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒检测HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测HBeAg,其阳性检测孔显色较Anti-HBe阴性对照孔(或HBeAg阴性参比对照孔)明显加深,易于目测;其比色COV易于设定(或使用HBeAg临界值血清),与常规ELISA检测HBeAg比色判定无显著性差异[配对计数资料比较的χ2检验:相关检验均为P<0.005,υ=1,a=0.05;优劣检验依次为HBeAg临界值血清(1)P>0.9000,υ=1,a=0.05、中和(竞争)抑制法检测Anti-HBeEIA商品试剂盒中Anti-HBe阴性对照(2)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05、ELISA共系统检测HBeAgCOV(3)0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05,但χ21<χ22<χ23]。结论用竞争抑制法检测Anti-HBeELISA商品试剂盒能够兼测HBeAg,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA双Ab夹心法检测HBeAg试剂盒,实用价廉,值得推广。

ELISA中和(竞争)抑制法检测HBeAb试剂盒共系统检测HBeAg结果分析

目的探讨用中和(竞争)抑制法检测HBeAbEIA[(预包被纯化乙肝e抗体(HBeAb]商品试剂盒共系统检测乙肝e抗原(HBeAg)的可行性及结果判定方法。方法用中和(竞争)抑制法检测HBeAbELISA试剂盒共系统检测1000份随机血清(浆)标本HBeAb与HBeAg,并与常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒检测HBeAg作平行对照。结果ELISA共系统检测HBeAg,其阳性检测孔显色较HBeAg阴性参比对照孔明显加深,甚至比HBeAb阴性对照孔还深(或明显加深),易于目测;其比色判定临界值(COV)易于设定(或使用HBeAg临界值血清或HBeAb阴性对照),与常规ELISA检测HBeAg比色判定无显著性差异(配对计数资料比较的χ2检验:相关检验均为P<0.005,υ=1,a=0.05;优劣检验依次为HBeAg临界值血清①P>0.900,υ=1,a=0.05;HBeAb阴性对照②0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05;ELISA共系统检测HBeAgCOV③0.100>P>0.050,υ=1,a=0.05;但χ12<χ22<χ32)。结论用中和(竞争)抑制法检测HBeAbELISA商品试剂盒能够兼测HBeAg,在有优质现代酶标仪的实验室,可以省去常规ELISA双抗体夹心法检测HBeAg试剂盒,实用价廉,值得推广。

检测牛边缘无浆体抗体的竞争抑制ELISA方法的建立

为建立检测牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)抗体的方法,本研究以牛A.marginale膜表面重组MSP5蛋白作为包被抗原,抗MSP5单克隆抗体(MAb)作为竞争抗体,建立一种用于检测牛A.marginale抗体的重组MSP5蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经优化确定CI-ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为2μg/孔,封闭液为2%脱脂乳,MAb的稀释度为1∶400,酶标二抗的稀释度为1∶1000,阴性和阳性血清临界值分别为33%和40%;该方法具有良好的特异性和重复性;2348份临床血清样品的检测结果表明,217份为阳性,阳性率为9.2%,与IDEXX A.marginale抗体检测试剂盒的阳性符合率为95.3%,阴性符合率为100%。本实验建立的ELISA方法具有较高的特异性和重复性,可用于流行病学调查研究。

间接竞争ELISA法测定稻田土壤中除草剂毒莠定的残留量

通过对反应体系中酶标二抗（辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG）和抗体的最佳稀释浓度等条件的筛选和确定,最终建立了一种快速灵敏地测定污染稻田土壤中毒莠定残留量的方法--间接竞争ELISA分析方法.结果表明,酶标二抗和抗体的最佳稀释度均为1：500（体积比）,毒莠定的检出下限达到5 ng·mL^-1,在0.07～0.7μg·mL^-1浓度范围内有良好的线性;土壤浸出液加样的平均回收率为104.11%,变异系数在3.13%～11.13%之间,符合农药残留分析的要求;样品基质对检测结果没有干扰.

间接竞争ELISA法检测牛乳中β-乳球蛋白含量的准确性评价

研究建立了以β-乳球蛋白标准品为包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG:HRP为二抗、邻苯二胺为底物的间接竞争酶联免疫检测法(indirect competitive enzyme-linked immu nosorbent,ELISA)。同时以反相高效液相色谱法定量检测相同样品中β-乳球蛋白含量,采用t检验方法来评价间接竞争ELISA的方法定量检测β-乳球蛋白的准确性。t检验方法结果显示:在显著水平α=0.05下,该间接竞争ELISA法检测β-乳球蛋白的测量值较为准确。

应用ELISA竞争法检测疫苗制品中残余的牛血清白蛋白

目的 应用ELISA 竞争（cELISA）法检测残余牛血清白蛋白（ESA）。方法 以BSA免疫家兔，获得高滴度的抗BSA血清；以BSA包被酶标板作为固相抗原，以梯度稀释的BSA为游离抗原，二者竞争结合抗体，以游离抗原浓度对数作为横坐标，相应吸收值为纵坐标作标准曲线，由对应样品的吸收值，可以求得样品中BSA含量。结果 当检测200、50、20和5ng/ml样品时，其试验内变异系数分别为4．5％、7．8％、5．8％和 14％，试验间变异系数分别为3．4％、8．8％、3.3％和30％。本试验还证明人血清白蛋白与牛血清白蛋白的交叉反应较低。结论cELISA可初步用于疫苗中残余BSA含量的检测。

固相抗体直接竞争ELISA法测定氯黄隆在土壤中的残留动态

采用包被抗体直接竞争 EL ISA法测定了氯黄隆在盆土中的残留动态和农田土壤中氯黄隆的残留量。结果表明 :EL ISA法测定土壤中氯黄隆的检测限 <0 .1ng/ g,标准添加回收率为 85.4 %～ 118% ,变异系数为 8.95%～ 16 .14% ,符合残留分析的要求。在本实验条件下 ,氯黄隆在土壤中的半衰期为 2 2～ 2 6 d,6 0 d降解 80 %以上。麦茬大田连续两年使用氯黄隆2 2 .5g/ hm2 、4 5g/ hm2 ,第一年麦收时中性沙质土壤和弱碱性沙壤土中氯黄隆的残留量分别为0 .2 4、0 .56 ng/ g和 0 .30、0 .96 ng/ g,第二年分别为 0 .2 8、0 .6 7ng/ g和 0 .38、1.0 9ng/ g,与平行进行的高效液相色谱法、生物测定法测定结果基本一致。

一步竞争ELISA法检测HBcAb影响因素的探讨

目的:研究操作因素对一步竞争ELISA法检测HBcAb的影响。方法:改变加入酶结合物的量,提供不同的孵育方式和孵育时间,延迟不同的加入酶结合物的时间,研究加样因素﹑孵育因素和延迟加入酶结合物时间因素对一步竞争ELISA法检测HBcAb的影响。结果:随加酶结合物量的增加样本S/cutoff值升高;实验中严格做到阴、阳性及空白对照和样本同时处理,则孵育方式和时间对样本S/cutoff值影响不大;延长加入酶结合物的时间,导致样本S/cutoff值下降。结论:操作因素严重影响一步竞争ELISA法检测HBcAb,规范操作规程可以减少操作因素对结果的影响。

基于竞争ELISA法研制CEA胶体金快速检测试纸条

为了对肿瘤进行临床快速早期诊断,基于竞争ELISA法,结合胶体金免疫层析技术,研究CEA胶体金检测方法。优化检测阈值等相关数据,使优化后的特异性达95%以上、稳定性达100%、敏感度达85%以上,可在5 min内对CEA进行检测,具有临床推广应用价值。

7F型肺炎链球菌多糖竞争ELISA检测方法的建立

目的：建立检测7F型肺炎链球菌荚膜多糖的方法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）,检测发酵过程中多糖的浓度.方法：包被物为7F型肺炎链球菌多糖,竞争物为待测多糖,建立间接竞争ELISA方法,并验证其准确性和精密度.结果：最佳多糖包被质量浓度为2.5ug/ml,多糖抗体血清稀释度为1：8×104.在检测范围为2.5～30μg/mL时呈线性相关,7F的最低检测限为1.5μg/mL.回归方程为B/B0=-0.4075 Pn7F＋0.7632,R2=0.9952.样品加标回收率为95.13%-105%.结论：本研究新建的ELISA方法准确性和精密度较好,能特异性地检测7F型肺炎球菌多糖.

同位素标记示踪法测定G蛋白竞争性抑制肽-27在动物体内的分布与排泄

目的:利用同位素标记示踪法研究G蛋白竞争性抑制肽(GCIP)-27在动物体内的分布和排泄。方法:125I-GCIP采用Iodogen法标记,按组织器官直接测定法和TCA沉淀法进行体内分布实验,以每毫克组织器官的125I-GCIP放射性计数表示GCIP在小鼠体内的分布;以不同时间段大鼠胆汁、尿、粪及小鼠的尿、粪放射性总排泄量占给药量放射性的百分比表示其在体内的排泄。结果:GCIP-27在小鼠体内分布广泛,其中肾、血管、胃、肺、心、小肠等组织分布较高,肌肉、脂肪等组织相对较低,脑最低。大鼠72h粪、尿、胆汁原形药物排泄量分别为给药量的26.13%,0.95%和4.12%。小鼠72h粪、尿原形药物排泄量分别为给药量的27.92%,0.84%。结论:GCIP-27在小鼠体内广泛分布,主要经尿液排泄,肾为主要排泄器官。

洛美沙星间接竞争ELISA检测方法的初步研究

为了初步研究洛关沙星的间接竞争ELISA检测方法，试验采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将洛美沙星（LOM）分别与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）耦联制备免疫原（LOM—BSA）和包被原（LOM—OVA），并将免疫原免疫Balb／c小鼠，制备了血清多克隆抗体（LOMpAb），并对其血清抗体效价、半数抑制浓度进行了测定。结果表明：小鼠血清抗体的效价为1：12800，间接竞争ELISA的线性检测范围为1．33—120ng／mL，半数抑制浓度（IC50）为10．87ng／mL。说明制备的小鼠血清抗体可用于动物性食品中洛美沙星的检测。