用两种ELISA方法快速检测大菱鲆细菌性出血性败血症的病原菌

以大菱鲆Scophthalmus maxinzoa出血性败血症病原菌迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda为抗原，从免疫家兔体内获得高免疫血清，建立快速检测大菱鲆出血性败血症病原迟钝爱德华氏菌的间接ELISA技术。采用棋盘滴定法确定间接ELISA抗原和抗血清的最适工作浓度分别为10^7个／mL和1：20000；最低检测菌浓度为10^4个／mL；抗血清与其他细菌标准菌株的交叉反应结果均为阴性，表明该方法具有较高的特异性。将该方法优化后检测了19尾人工感染出血性败血症并发病的大菱鲆和19尾健康的大菱鲆，阳性检测率分别为89．5％和的10．5％。同时在间接ELISA方法的基础上建立竞争ELISA检测技术，结果表明：理想的包被抗原浓度为10^7个／mL，兔抗血清的工作浓度为1：20000，酶标抗体工作浓度为1：1000，可测最适范围为2×10^5～2×10^8个／mL，最低检测菌浓度为2×10^5个／mL，得到回归方程y=-0．3811x＋2．2335，R^2=0．992。