鱼露中章鱼胺含量分析及衍生化产物结构推断

利用衍生化法建立了准确的鱼露中章鱼胺分析方法,同时结合高分辨质谱对其衍生产物准确定性。鱼露试样以1,7-二氨基庚烷为内标,采用丹磺酰氯衍生法使章鱼胺及其内标在碱性条件下与丹磺酰氯生成衍生物,乙醚提取,产物经C_(18)色谱柱分离,高效液相色谱-紫外检测器检测,内标法定量。章鱼胺在线性1~20mg/L范围内线性关系良好,检出限为0.3mg/L,定量限为1.0mg/L,回收率介于70.6~104.7%之间,精密度小于9%。在此基础上运用超高效液相色谱-二极管阵列检测器-四极杆飞行时间串联质谱仪(UHPLC-PDA-Q-TOF-MS)对产物结构进行推断,进一步明确产物的色谱峰峰位及衍生化产物形成机理,并将所开发的方法应用于市售鱼露样品中章鱼胺的定量定性分析。该方法定性定量准确,可避免假阳性事件的发生。

巴氏新小绥螨章鱼胺受体基因鉴定与表达模式分析

为明确巴氏新小绥螨(Neoseiulus barkeri)章鱼胺受体基因的分子特征,探明其药理学和生理功能,运用转录组数据和生物信息学软件分析并鉴定章鱼胺受体基因的cDNA全长,利用qRT-PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction)比较章鱼胺受体基因在巴氏新小绥螨不同发育阶段、不同温度及饥饿胁迫条件下的表达模式.结果表明:于转录组数据库筛选鉴定到6个章鱼胺受体基因,分别命名为NbOctα1R1,NbOctα1R2,NbOctTyrR,NbOctβ2R1,NbOctβ2R2,NbOctβ3R,其完整开放阅读框为936~1 983 bp,编码312~661个氨基酸,在进化关系上与西方静走螨(Galendromus occidentalis)最为接近.NbOctα1R1,NbOctα1R2,NbOctTyrR,NbOctβ2R1,NbOctβ3R都具备G蛋白偶联受体的典型特征.6个章鱼胺受体基因在巴氏新小绥螨不同螨态均有表达,且在幼螨和若螨中表达水平较高.在不同温度胁迫条件下,不同章鱼胺受体基因在成螨和幼螨中受低温、高温影响后,仅有NbOctβ2R1,NbOctβ2R2在高温时表达量上调,低温时表达量下调.饥饿胁迫诱导时,除NbOctβ3R表达量随饥饿时间延长而降低外,其余章鱼胺受体基因表达量在饥饿开始的不同时间段出现不同程度的增加,最终随饥饿时间进一步增加而下降.从巴氏新小绥螨转录组中鉴定到的6个章鱼胺受体基因,在不同发育阶段、不同温度和饥饿胁迫下其表达量存在差异,推测巴氏新小绥螨章鱼胺受体基因在不同发育阶段和逆境胁迫中承担着不同的生理功能.

昆虫体内章鱼胺和酪胺的研究进展

章鱼胺(octopamine,OA)和酪胺(tyramine,TA)在昆虫体内扮演着各种重要的生理角色。它们协调控制着昆虫的各种器官和行为,如调节外周淋巴器官功能和影响昆虫的学习与记忆、昼夜节律等,使得昆虫能够以合理的方式来应对外界刺激,并被认为在功能上对应于脊椎动物体内的肾上腺素和去甲肾上腺素。虽然都是酪氨酸脱羧基产物,且酪胺是章鱼胺的生物合成前体,但它们都通过不同的G蛋白偶联受体在昆虫体内发挥不同的神经调控作用。近年来,对昆虫体内章鱼胺和酪胺,尤其是它们与对应受体作用的研究,日益受到关注。本文对昆虫体内章鱼胺和酪胺的生物合成,在神经和非神经组织中的分布,被突触前结构的再摄取以及它们在昆虫体内的不同生理功能等方面的研究进展进行了综述,特别对章鱼胺和酪胺受体基因的克隆、信号转导途径以及药理作用特性等相关研究的最新进展进行了详细评述。

鱼露中肾上腺素受体激动剂-章鱼胺分析方法的研究

目的建立测定鱼露中章鱼胺含量的高效液相色谱学方法。方法采用phenomenex luna C18柱,以0.02mol.L-1柠檬酸-0.02mol.L-1磷酸二氢钠(7:3)为流动相,检测波长λ=274nm。结果章鱼胺在0.0057～50μg.mL-1范围内,浓度与峰面积线性关系良好(r=0.9991),平均加样回收率为104.4%,RSD为1.53%。最低检出浓度为5.7ng.mL-1。结论本法操作简便,结果可靠,可用于鱼露中章鱼胺及相关物质含量的测定,鳀鱼鱼露含章鱼胺1055μg.mL-1。

昆虫体内章鱼胺的分布、功能及其研究进展

章鱼胺是无脊椎动物神经系统中普遍存在的多种微量生物胺之一。章鱼胺的分布及含量变化对于昆虫的生长、取食、代谢等多种生理、生物效应具有重要的作用。文章对昆虫体内章鱼胺的功能性、昆虫体内章鱼胺的分布及其主要功能、章鱼胺痕量测定方法、生存环境的改变及化学药剂的作用对章鱼胺含量的影响以及外界刺激对章鱼胺含量影响的生理及生物化学机理研究进行了综述。

鱼露中章鱼胺分离方法的研究及对风味的影响

目的研究从鱼露中提取章鱼胺的有效方法,为天然章鱼胺的工业化生产提供实验依据。方法以章鱼胺的吸附量和洗脱率为指标筛选树脂,研究树脂对章鱼胺的吸附性能和洗脱参数。结果H103大孔吸附树脂对鱼露中章鱼胺有较好的吸附分离效果,该树脂对鱼露中章鱼胺的静态饱和吸附量达2.925mg.g-1(干树脂),用30%乙醇作洗脱液,洗脱率达98.04%。结论H103大孔吸附树脂处理后,能有效地分离章鱼胺,改善了鱼露的风味,适用于从鱼露中提取章鱼胺的工业应用。

章鱼胺的作用机理及其受体的研究进展

章鱼胺在无脊椎动物神经组织中可作为神经递质、神经激素或神经调节剂 ,它对昆虫的取食、迁飞和繁殖等生理过程起调节作用。章鱼胺受体作用机制是通过刺激腺苷酸环化酶系统和其它第二信使 ,从而产生各种生理效应。因此它们是高效、强选择性农药开发中生物合理设计的理想靶标。对章鱼胺的生物影响、作用机制、药理分类以及章鱼胺受体的生物学研究进展进行了综述 。

人血清肾上腺素能受体激动剂章鱼胺测定方法的研究

目的建立测定人血清中章鱼胺含量的高效液相色谱学方法。方法采用phenomenex luna C18柱,以0.02 mol.L^-1柠檬酸与0.02 mol.L^-1磷酸二氢钠（7∶3）为流动相,流速为0.8 ml.min^-1;柱温为30℃;检测波长λ=220 nm。结果章鱼胺在0.006-50μg.ml^-1范围内线性关系良好,相关系数为0.999 9,平均加样回收率为105.6%,RSD为0.93%。最低检出浓度为0.006μg.ml^-1。结论该法操作简便,结果可靠,可用于人血清中章鱼胺含量的测定。初步检测,健康青少年血清章鱼胺含量为（4.03±0.75）μg.ml^-1,成年人为（4.50±1.10）μg.ml^-1。

昆虫神经活性物质章鱼胺受体激动剂的设计、合成及其构效关系研究

以章鱼胺能系统为靶标,设计并合成了72个取代苄基亚胺基-2-(口恶)唑烷和取代苯胺基2-(口恶)唑啉化合物。测定了目标化合物对美州大蠊神经索腺苷酸环化酶的活化作用。结果发现配体取代基的变化可引起对章鱼胺受体活性的较大幅度改变。邻氯苄基亚胺基-4-苯基-2-(口恶)唑啉显示与 OA 受体的较高亲和力(V_(max)=33.39,Km=0.33μmol·L^(-1)。应用 Hansch-Fujita 方法、RSA、MFA、药效团分析和分子模型技术等计算机辅助设计方法对它们的结构活性关系进行剖析并建立了一些可信度高的模型。

气相色谱电子捕获检测器检测蟑螂头部痕量章鱼胺的衍生物

章鱼胺（OA）是昆虫体内的痕量神经活性物质。本实验研究了蟑螂头部基质中OA的提取、章鱼胺与五氟丙酸酐的衍生化反应，优化了最佳衍生反应条件。建立了适合于昆虫样本中OA痕量测定的衍生化气相色谱．电子捕获检测方法。昆虫头部匀浆样本在10ng/g OA添加浓度时回收率在89％～118％；该方法的最低检出浓度为1．7ng／g。采用CC-MS对衍生化产物进行了定性确证分析。

叉角厉蝽2个章鱼胺受体的基因克隆及化学农药对其表达的影响

章鱼胺(OA)是无脊椎动物中一种非常重要的生物单体胺,作为神经递质与其受体结合共同参与调节昆虫的嗅觉、产卵、运动、学习、记忆和免疫反应等多种生理功能。为了探究叉角厉蝽章鱼胺受体功能,为捕食性天敌昆虫叉角厉蝽应对逆境胁迫响应机制的研究提供参考,利用转录组测序结果和RACE技术获得2个OctβRs基因,在对其序列特征进行生物信息学分析之后,通过RT-qPCR技术分析2个OctβRs基因的发育模式以及在亚致死剂量的高效氯氟氢菊酯和毒死蜱处理后的表达变化。结果表明扩增得到EfOctβ1R和EfOctβ2R的基因开放阅读框长度为1245和1230 bp,分别编码414和409个氨基酸,均属于疏水性蛋白,蛋白序列包含有7个跨膜结构域,序列中存在半胱氨酸残基位点、蛋白激酶C、配体结合位点和糖基化位点等高度保守结构域,属于典型的G蛋白偶联受体超家族成员。同源性分析结果显示,2个EfOctβRs基因分属于Octβ1R和Octβ2R两个明显分支。在叉角厉蝽整个发育周期的不同发育阶段中,均可检测到2个EfOctβRs基因,但二者在不同发育阶段的表达水平有所差异,在叉角厉蝽成虫期均有较高量表达,其中EfOctβ2R在卵期表达要高于若虫期,而EfOctβ1R则相反。亚致死剂量高效氯氟氢菊酯和毒死蜱处理后,2个EfOctβRs基因响应强烈,均呈现不同程度的表达上升变化,分别在2种药剂处理后24 h和36 h时,EfOctβ1R和EfOctβ2R表达上升高达12倍以上。本研究结果表明,EfOctβRs可能参与叉角厉蝽在杀虫剂肋迫下的应激过程。

以章鱼胺系统为靶标的选择性杀虫杀螨剂

本文概述了以章鱼胺系统为靶标的杀虫杀螨剂的种类、作用机理、构效关系。

章鱼胺及其衍生物的抗氧化性研究

章鱼胺是一种天然的β3-肾上腺素能受体激动剂,关于其生物活性,文献报道大多为肥胖症的治疗和II型糖尿病防治方面的研究。既往研究指出,章鱼胺的前体化合物酪胺具有较高的抗氧化活性,且与其浓度呈正相关。本文以章鱼胺为原料合成十种衍生物。为比较章鱼胺、酪胺及章鱼胺衍生物的抗氧化活性,本文测定了这些物质对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除率。研究结果表明,章鱼胺及其两种衍生物OA07和OA08清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力均高于酪胺;另一章鱼胺衍生物OA05具有较高的超氧阴离子自由基清除能力,值得进一步关注和研究。

酪胺生物转化生成章鱼胺的研究

【目的】以酪胺为原料生物转化生成章鱼胺.【方法】参照生物体中章鱼胺的生成路径,以含有细胞色素P450酶的草鱼肝脏S-9部位为酶源,维生素C为氢载体,异烟肼为单胺氧化酶抑制剂,以酪胺为底物,37℃保温反应.【结果】提取得到的S-9部位冷藏在4℃条件下,其中的细胞色素P450酶活性只能保持4h左右,而-25℃冷藏条件下其活性可保持8-10d.生物合成试验的结果显示氢载体对生物合成章鱼胺是必需的,反应1h产生的章鱼胺为879.66μg/4.5mL反应液,章鱼胺的生物合成率为21.4%,酪胺代谢率为90.0%.【结论】以草鱼肝脏S-9部位为酶源生物转化生成章鱼胺是可行的.

章鱼胺对营养性肥胖小鼠减肥作用的研究

采用高脂饲料建立小鼠肥胖模型,以小鼠体重、Lee’s指数、脂肪湿重、脂肪系数、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)等指标的变化,研究章鱼胺对小鼠的减肥作用。结果表明,肥胖对照组小鼠较普通对照组小鼠的体重、脂肪湿重、脂肪系数、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)含量均显著增加(P<0.05),表明营养肥胖模型构建成功;章鱼胺各剂量组及阳性对照组中小鼠的体重、脂肪湿重、脂肪系数、血清总胆固醇(TC)与模型组存在显著性差异(P<0.05),其中Lee’s指数和甘油三脂(TG)的中、高剂量组与模型组存在显著性差异(P<0.05);章鱼胺对营养性肥胖小鼠有一定的减肥降脂作用。

鱼露中章鱼胺的分离提取研究

本文采用静态吸附和动态吸附相结合的方法，综合考虑吸附量、解吸率等因素，研究硅胶分离提取鱼露中章鱼胺的吸附性能和洗脱参数。结果表明：60～100目硅胶对鱼露中章鱼胺有较好的吸附分离效果，静态饱和吸附量达3．837mg·g^-1（千硅胶），30％的乙醇水溶液为最佳洗脱剂，洗脱率达90．48％；60-100目硅胶对鱼露中章鱼胺动态吸附的最佳上样量为4BV，用1．1BV洗脱液可基本洗脱完全。得到的洗出液采用HPLC分离系统进行精制，真空冷冻干燥后得到白色粉末状固体。将此白色固体与标准品章鱼胺在同样的条件下进行质谱分析，可证明得到的白色粉末状固体为纯度较高的天然辛鱼胺。

章鱼胺的研究进展

简要介绍了章鱼胺的的结构、分布、功能、提取及检测方法。章鱼胺是天然的β3-肾上腺素能受体激动剂,在II型糖尿病和肥胖症的治疗上有潜在的应用价值。从水产品中分离提取章鱼胺,制成减肥药物和健康食品,是提升水产品附加值的有益尝试。

酪胺生物转化生成章鱼胺的研究

本研究以酪胺为原料，用高速冷冻离心机提取含有细胞色素P450的草鱼肝脏S-9部位并以之为酶源，以维生素C为氢载体，异烟肼为单胺氧化酶抑制剂，生物转化生成章鱼胺。提取得到的S-9部位冷藏在4℃条件下，其中的细胞色素P450活性只能保持4h左右，而-25℃冷藏条件下其活性可保持8—10d。生物合成实验的结果显示氢载体对生物合成章鱼胺是必需的，反应1h产生的章鱼胺为879．7μg／4．5mL反应液。这表明以草鱼肝脏S-9部位为酶源生物合成章鱼胺是可行的。

合浦珠母贝章鱼胺受体(OAR)基因的克隆与表达分析

章鱼胺受体(octopamine receptor,OAR)广泛存在于无脊椎动物中,具有调节神经肌源性节奏收缩、调节c AMP水平、参与磷酸化途径等多种重要功能,但其在贝类中的研究却很少。该研究克隆了合浦珠母贝(Pinctada fucata)OAR基因(pf OAR)的c DNA全长序列,比较分析了氨基酸序列的同源性,并采用荧光定量PCR技术检测了该基因在不同组织和幼体不同发育阶段的表达差异以及贝壳损伤后该基因在外套膜中表达水平的变化。结果显示:pf OAR的c DNA全长1 890 bp,开放阅读框1 659 bp,编码552个氨基酸,有7个跨膜结构域,具有G蛋白偶联受体的共性。pf OAR在6个被检测的组织中均有表达,且在外套膜中的表达水平显著高于其他组织;幼体发育过程中pf OAR表达水平逐渐升高,变态期的表达水平显著高于其他时期;人为损伤贝壳36 h后,pf OAR的表达水平显著升高。这些结果表明pf OAR在合浦珠母贝中可能具有多样化的功能,参与了贝壳的形成和修复,为进一步开展pf OAR的功能研究奠定了重要基础。

赤拟谷盗章鱼胺受体3(TcOctβR3)cDNA克隆、表达及功能

【目的】章鱼胺信号系统在调节昆虫行为和生理过程中具有至关重要的作用。赤拟谷盗(Tribolium castaneum)作为一种模式昆虫,被广泛用于解析昆虫生长发育及生理等调控机制的研究工作。本研究以赤拟谷盗为对象,旨在明确章鱼胺受体在调节赤拟谷盗行为和生理方面的功能。【方法】根据Gen Bank登录的相关序列信息(XP_008198078),利用RT-PCR技术克隆赤拟谷盗章鱼胺受体基因Tc OctβR3的c DNA序列。利用在线生物信息学分析软件预测该基因的开放阅读框、编码的氨基酸序列以及跨膜结构域等信息,基于邻接法构建该基因与其他昆虫相关序列的系统发育树,明确系统进化关系。分别提取赤拟谷盗各发育阶段(卵、幼虫、蛹和成虫)、不同组织(中枢神经系统、脂肪体、中肠、后肠、马氏管、精巢和卵巢)以及饥饿胁迫后的RNA,以赤拟谷盗核糖体蛋白S3(Tc RPS3)为内参基因,采用实时定量PCR技术分析该基因在赤拟谷盗不同发育阶段、不同组织以及在饥饿胁迫下的表达模式。运用哺乳动物异源表达系统在人胚胎肾细胞HEK293中瞬时表达Tc OctβR3,进而利用第二信使c AMP含量测定技术分析Tc OctβR3与配体的结合能力。最后,通过体外合成赤拟谷盗Tc OctβR3的双链RNA,利用RNA干扰以及轨迹球行为分析等技术探究该基因的生理功能。【结果】序列分析结果表明,赤拟谷盗Tc OctβR3开放阅读框全长1 305 bp,编码434个氨基酸,序列中含有G蛋白偶联受体典型的7个跨膜结构域。基于邻接法构建的系统发育树表明,该基因编码的蛋白质与小蜂甲(Aethina tumida)的OctβR3亲缘关系最近。实时定量PCR分析结果表明,Tc OctβR3在赤拟谷盗各发育阶段均有表达,尤其在低龄幼虫期转录水平最高,而在其他发育阶段表达量无显著差异;在赤拟谷盗不同组织中,Tc OctβR3在中枢神经系统的表达量显著高于其他组织;赤拟谷盗幼虫在经饥饿处理24 h的过程中,Tc OctβR3的表达量呈先下降后上升的趋势,且在处理6 h的表达量最低,为对照的0.47倍,在16 h表达量最高,为对照的1.80倍,最后恢复到正常水平。通过HEK293细胞异源表达Tc OctβR3后,c AMP测定结果表明章鱼胺(OA)呈浓度依赖性地激活Tc OctβR3,其EC50为8.68×10-7 mol·L-1,萘甲唑啉(NA)的激动活性最高,其有效中浓度EC50为8.56×10-8 mol·L-1。4种供试生物胺激动剂活性强弱为:萘甲唑啉>酪胺(TA)>章鱼胺>多巴胺(DA)。进一步采用RNA干扰技术的分析结果表明,注射ds RNA能有效抑制Tc OctβR3的表达,沉默效率高达61.5%,但干扰该基因表达后不会影响赤拟谷盗成虫的爬行速度和产卵量。【结论】Tc OctβR3在赤拟谷盗中枢神经系统可能发挥重要作用,能调节幼虫对饥饿胁迫的响应。明确了Tc OctβR3的分子生物学特性,可为将来以其为靶标筛选高效激动剂和抑制剂提供理论依据。