黑麦B染色体端粒相关序列的克隆

利用显微切割技术，分离了黑麦（ＳｅｃａｌｅｃｅｒｅａｌＬ．）１０个Ｂ染色体短臂端部片段，并利用寡核苷酸引物（ＣＣＣＴＡＡＡ）３及新建立的二级单引物序列ＰＣＲ扩增法，扩增了黑麦Ｂ染色体端粒相关序列。染色体原位杂交实验将ＰＣＲ产物定位于Ｂ染色体短臂末端，多数Ａ染色体末端也显示清晰的杂交信号。部分ＰＣＲ产物克隆到ｐＵＣ１９载体中，对其中一个克隆子ｐｐ３的序列分析结果表明，它与玉米亚端部克隆子ｐＢＦ２６６部分区域的同源性为９２％。就目前资料检索，黑麦、玉米端粒相关序列具有高度同源性还未见报道。

鸡组织细胞端粒相关序列的克隆及序列分析

根据真核细胞端粒DNA序列的共同特点 ,设计了一条引物 (TELO0 2 ) ( 2 4nt)。按照TaKala克隆试剂盒的介绍方法 ,染色体基因组DNA经 HaeⅢ 和 HinfⅠ 两种限制性内切酶酶切后 ,先进行初级PCR(C1和TELO0 2 )扩增 ,得到的产物为模板再经过次级PCR(C2和TELO2 )扩增 ,得到的产物用试剂盒回收 ,并连接到PMD_1 8_T载体上 ,转化到JM1 0 9受体菌中。从阳性克隆中提取质粒DNA进行PCR和酶切鉴定 ,确认后进行序列测定 ,获得了一段 2 43sbp的鸡端粒相关序列。此序列与人第 7条染色体基因组末端序列的同源性为 63 .5 % ;与鼠端粒旁序列同源性为 63 .2 % ;而与MDV基因组序列的BamHⅠ酶切片段 76.6%同源。

应用荧光原位杂交技术定位水稻的端粒相关序列和BAC克隆

用ＰＣＲ扩增得到的水稻端粒相关序列（ＴＡＳ）Ｔａｓ３和一个ＢＡＣ克隆（ＢａｃｔｅｒｉａｌＡｒｔｉ－ｆｉｃｉａｌＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ＢＡＣ）为探针，与间期核和中期细胞染色体进行荧光原位杂交（Ｆｌｕｏ－ｒｅｓｃｅｎｃｅＩｎＳｉｔｕＨｙｂｒｉｄａｔｉｏｎ，ＦＩＳＨ），确定了其在染色体上的位置。

栽培大豆端粒相关序列的克隆及定位

以拟南芥的端粒重复序列(TR)为引物(TTTAGGG)3,在栽培大豆中扩增并克隆了1个574bp的DNA片段。序列分析表明:该片段与大豆端粒相关序列的相似度高达92%～99%,与白玉草TR-TAS的间隔区的相似度为79%,与大麦和玉米等其它植物的TAS的相似度在16%～35%之间;这一片段含有14个拷贝的拟南芥类型端粒重复单元,并且还有30个重复单元发生了碱基突变(缺失、替换与插入)。该端粒相关序列具有1个25bp的保守重复单元,串联重复13个拷贝,且该序列的A+T含量高于60%,体现了卫星DNA的特征。该序列被定位在大豆3号染色体的近末端。

水稻端粒相关序列的克隆及鉴定

端粒不仅包括简单的端粒重复序列 ,也包括较复杂的端粒相关序列 .参照拟南芥菜的端粒重复序列 (TTTAGGG) n,设计了 2个引物 :(TTTAGGG) 3 和 (CCC TAAA) 3 CCC .利用单引物采取 2种方法在水稻中进行PCR圹增 ,得到了 8个片段 .然后用Bal31酶解和RFLP图谱定位的方法检测了它们的亚端粒特性 .用此方法鉴定了 6个端粒相关序列 ,分别定位于水稻第 5 ,6 ,7,9号染色体 .

筛选和定位含水稻端粒相关序列的BAC克隆

根据水稻的端粒重复序列 ,设计了 2个引物 :(TTTAGGG) 3 和 (CCC TAAA) 3 CCC ,利用单引物在水稻总DNA中进行PCR扩增 ,分别得到Tas1和Tas2 .这 2个片段在定位亲本间均无多态性 .Tas1的原位杂交表明该序列位于 2对染色体端部 .以Tas1为探针在所构建的水稻基因组BAC文库中筛选到 1个克隆 ,South ern杂交证明此克隆也包含序列Tas2 ,取该克隆中的单拷贝序列利用ZYQ/JX1 7DH群体将其定位在第 6号染色体的端部 .

2个水稻端粒相关序列的克隆和特性分析

端粒,位于真核生物染色体端部,是DNA和蛋白的复合物,对染色体的复制和稳定起着重要作用.端粒DNA由短重复序列组成,大多数高等植物,这一序列是5′TTTAGGG.相邻于端粒重复序列的是端粒相关序列,往往由中等重复序列组成.与端粒比较,端粒相关序列的显著特点是它的高度多态性,不同物种,甚至同一亚种内不同植物都能给出很高的多态性.因此在基因组RFLP框架图和物理图谱的构建中,端粒相关序列的克隆和分析有重要意义.本文根据水稻端粒重复序列中无限制性内切酶位点。

一个含端粒序列的水稻BAC克隆的分析和定位

对一个含 (TTTAGGG) n 同源序列的水稻BAC克隆 (BAC2 )进行了分析 ,揭示出水稻近端区DNA的组成 .BAC2的插入片段中除含有大量的以串联形式存在的称之为TA35 2序列的卫星DNA外 ,还含有TTTAGGG或其变体组成的简单重复 .荧光原位杂交 (FISH)将含 (TTTAGGG) n 序列的 0 .8kbPstⅠ片段定位在至少 5对染色体的端粒区 .通过对BAC2中低拷贝序列的RFLP分析 ,BAC2被定位在水稻第 6号染色体端部 .这些结果说明水稻的端粒序列可能也是TTTAGGG或其变体构成的简单重复 ,而与其相连的卫星DNATA35 2则属于端粒相关序列 .