端粒酶调节相关基因TRAP与肿瘤生物学特性的关系

目的 :研究TRAP基因在人肿瘤组织中的表达及其与人端粒酶逆转录酶 (hTERT)的作用相关性 ,探讨其在人肿瘤发生中的作用。方法 :通过原核表达TRAP蛋白免疫新西兰白兔 ,制备特异性多克隆抗体 ;免疫组化检测TRAP及hTERT在人肿瘤组织中的表达 ;通过构建TRAP真核表达载体、基因转染 ,观察TRAP对细胞hTERT转录、端粒酶活性和癌细胞生长及成瘤性的影响。结果 :通过大肠杆菌表达的TRAP蛋白免疫、制备多克隆抗体 ,经Westernblot鉴定与TRAP具有特异结合性 ;免疫组化显示 2 4 7例恶性肿瘤中有 2 13例TRAP阳性 ,表达率为 86 .2 % ,而在所有癌旁组织中TRAP为阴性。另外 ,交界性及癌前病变与良性病变组织中TRAP表达差异也有显著性。进一步检测卵巢生发上皮肿瘤、乳腺癌、肝癌及中枢神经系统肿瘤组织hTERT表达 ,显示hTERT与TRAP表达的结果相一致。TRAP正义转染使hTERT及端粒酶活性升高 ,细胞增殖加快 ;而反义转染时 ,两者均下降 ,细胞增殖受抑。裸鼠成瘤性实验表明 :正义TRAP使癌细胞成瘤性增强 ,而反义则抑制移植瘤的生长。结论 :TRAP表达存在于人癌组织及部分癌前病变 ,与癌细胞恶性表型相关 ,并与hTERT表达一致。TRAP基因参与对端粒酶的调节作用 ,可能与人肿瘤发生有关。

靶向端粒酶调节相关基因TRAP siRNA表达载体的构建

目的构建靶向端粒酶调节相关基因TRAP的siRNA表达载体。方法根据siRNA设计原则,设计并化学合成2段编码短发夹RNA序列、靶向端粒酶调节相关基因TRAP的寡核苷酸,各64个碱基,退火,克隆到线性化的pSilencerTM21u6neo质粒U6启动子下游重组构建RNAi质粒。结果重组质粒pSilencerTM21u6neoTRAP经过插入片段基因序列分析,结果表明64个碱基成功插入到预定位子,并且序列完全一致。结论成功构建靶向TRAP基因的siRNA表达载体,为进一步研究TRAP在调控hTERT的表达、降低端粒酶活性和肿瘤的基因治疗方面的作用做了基础。

端粒酶活性调节的研究进展

端粒是真核细胞线性染色体末端6bp重复序列及相关蛋白质组成的特殊结构,端粒酶是合成端粒DNA重复序列的逆转录酶。普遍认为端粒酶在肿瘤的发生发展中具有重要作用。端粒酶在体内是如何被调节的,目前还知之甚少。对端粒酶活性调节的研究包括激活与抑制两个方面,抑制端粒酶以治疗肿瘤,激活端粒酶以延缓衰老。

端粒酶的调节基因TRAP在皮肤基底细胞癌中的表达及意义

目的:探讨端粒酶的调节基因TRAP在皮肤基底细胞癌中的表达情况。方法:用免疫组化S-P法检测TRAP在38例皮肤基底细胞癌、15例正常皮肤中的表达。结果:TRAP在皮肤基底细胞癌的表达高于正常皮肤(P<0.01);在未分化型与分化型基底细胞癌表达的差异无统计学意义。结论:TRAP的异常高表达可能与皮肤基底细胞癌的发病有关。TRAP的表达与基底细胞癌的病理分型无关。

端粒酶转录酶及其调节相关蛋白与增殖细胞核抗原在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义

目的 探讨端粒酶转录酶 (hTERT)及端粒酶调节相关蛋白 (TRAP)与增殖细胞核抗原(PCNA)在卵巢上皮性肿瘤中的表达和临床意义。方法 收集 10 6例卵巢上皮性肿瘤 (恶性 5 4例 ,交界性 33例 ,良性 19例 )的临床资料 ,行hTERT、TRAP和PCNA 3种抗体的免疫组织化学标记链霉素卵白素生物素 (LSAB)法染色。对 87例恶性和交界性患者进行了随访 ,4 5例获结果 ,随访时间为 2～6 0个月。结果 hTERT蛋白的表达在良性 (4/ 19)和交界性 (90 9% ,30 / 33)以及良性和恶性(94 4 % ,5 1/ 5 4 )间的差异均有显著性 (P均 <0 0 0 1) ,TRAP蛋白的表达在良性 (4/ 15 )和恶性(77 8% ,2 8/ 36 )间的差异有显著性 (P <0 0 0 1) ;hTERT和TRAP蛋白的表达在卵巢癌Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期两组病例中的差异均无显著性 (P >0 0 5 ,P >0 3)。PCNA的表达在良性 (6 9± 5 9) %和交界性 (2 6 4± 17 8) %、良性和恶性 (5 1 8± 2 2 1) %以及交界性和恶性间的差异均有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 0 1,P <0 0 5 )。 33例交界性患者全部存活 ,5 4例恶性患者中 35例 (6 4 8% )有转移 (包括 5例淋巴结转移 ) ,4例 (7 4 % )死亡。结论 hTERT和TRAP蛋白的表达与卵巢上皮性肿瘤的良恶性有关 ,但与其临床分期无关 ;

稳定转染ShRNA-TRAP对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响

目的探讨稳定转染靶向端粒酶调节相关基因TRAP的小发夹RNA对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响。方法构建特异性作用于TRAPmRNA的小发夹RNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选的阳性克隆细胞继续压力培养3个月,采用RT-PCR法检测TRAPmRNA的表达,MTT法检测细胞生长,同时检测细胞凋亡、hTERTmRNA、端粒酶活性。结果稳定转染ShRNA-TRAP后,SGC-7901细胞的TRAPmRNA表达明显下降,hTERTmRNA和端粒酶活性降低;细胞增殖能力降低,细胞凋亡率增加。结论ShRNA-TRAP能长效的抑制TRAPmRNA的表达,下调hTERTmRNA转录及端粒酶活性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,可作为抑制端粒酶的肿瘤基因治疗策略的补充。

皮肤鳞状细胞癌组织中TRAP的表达分析

目的：探讨端粒酶的调节基因TRAP在皮肤鳞癌中的表达情况。方法：用免疫组化s—P法检测TRAP在58例皮肤鳞癌、15例正常皮肤中的表达。结果：TRAP在皮肤鳞癌的表达明显高于正常皮肤（P〈0．01），在高、中、低三组不同分化的皮肤鳞癌的差异有统计学意义（P〈0．01），在高分化鳞癌与中分化鳞癌间的差异无统计学意义，而低分化鳞癌分别与高分化鳞癌和中分化鳞癌间的差异有统计学意义。结论：TRAP的异常高表达可能与皮肤鳞癌的发病有关，也与皮肤鳞癌的分化程度、恶性程度有关。

端粒长度调节酶1在脑胶质瘤中的研究进展

脑胶质瘤是颅内最常见且最难治愈的肿瘤之一,目前尚缺乏特异性的诊断和预后生物学标志,因此,胶质瘤的诊断与治疗一直都是神经肿瘤领域的研究难点。端粒酶历来与肿瘤的研究密切相关,近几年研究发现端粒长度调节酶1(RTEL1)的基因突变,使其在脑胶质瘤中表达明显减少,可能与脑胶质瘤发生、发展以及预后密切相关,而在部分非颅脑肿瘤的研究中却发现RTEL1的表达结果与胶质瘤截然相反。现结合相关文献,就RTEL1的结构特性及在脑胶质瘤中的研究进展进行综述,希望对其在颅内肿瘤的诊断、鉴别诊断及预后中等提供一定的参考意义。

联合干扰人端粒酶催化亚基对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的探讨基因的联合干扰对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。方法将转染细胞分为共四组:psi-control对照组(A组)、psi-端粒酶催化亚基(hTERT)1组(B组)、psi-hTERT1和psi-hTERT2共转染组(C组)、psi-hTERT1和psi-端粒酶调节相关蛋白(TRAP)1共转染组(D组)。采用RT-PCR及Western blot分别检测hTERT mRNA和蛋白表达,端粒重复序列扩增-PCR法检测端粒酶活性,MTT法检测SGC-7901细胞增殖。结果与A组相比,B组、C组hTERT mRNA和蛋白表达、端粒酶活性降低(P<0.05),细胞增殖减慢,细胞凋亡增加;而D组各指标与A组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合干扰的效果可能与剂量和目的基因有关。

溴结构域蛋白4的结构和功能及其抑制剂在肿瘤研究中的应用

溴结构域和超末端结构域(bromodomain and extraterminal domain,Bet)家族是表观基因组的调节因子,也是肿瘤细胞生存所依赖的肿瘤相关基因表达的关键驱动因子。溴结构域蛋白4(bromodomain-containing protein 4,Brd4)是溴域和端外蛋白家族中的一员,通常识别乙酰化组蛋白,并定位于目的基因的启动子或增强子区域,启动并维持肿瘤相关基因的表达。Brd4与多种转录因子调控和染色质修饰密切相关,并参与DNA损伤修复、维持端粒功能,从而维持肿瘤细胞的存活。本文围绕Brd4蛋白的结构、功能及其抑制剂在肿瘤研究中的应用进行综述。

WHOⅡ级脑胶质瘤患者无进展生存期的影响因素分析

目的分析世界卫生组织(WHO)Ⅱ级脑胶质瘤患者无进展生存期的影响因素。方法回顾性纳入2008年1月至2015年12月首都医科大学三博脑科医院神经外科收治的72例成人WHOⅡ级脑胶质瘤患者,对患者行手术切除肿瘤。术后对组织样本采用免疫组织化学染色方法检测异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)R132H、α地中海贫血或精神发育迟滞综合征X染色体相关基因(ATRX)及端粒延长酶调节因子1(RTEL1)的突变情况。采用Kaplan-Meier生存曲线分析IDH1 R132H、ATRX及RTEL1表达不同的患者无进展生存期的差异。采用单因素和多因素Cox回归分析方法进一步评价影响患者预后的各临床因素。结果72例脑胶质瘤患者免疫组织化学染色结果为,39例(54.2%)IDH1 R132H染色阳性,33例(45.8%)阴性;56例(77.8%)ATRX染色阴性,16例(22.2%)阳性;29例(40.3%)RTEL1染色阳性,43例(59.7%)阴性。生存期分析结果显示,IDH1 R132H阴性患者的累积无进展生存率低于IDH1 R132H阳性者(P<0.05),ATRX阳性与阴性患者累积无进展生存率间的差异无统计学意义(P>0.05),RTEL1阳性患者的累积无进展生存率低于RTEL1阴性患者(P<0.05)。单因素和多因素Cox回归分析结果显示,年龄>40岁(OR=3.618,95%CI:1.688~7.753,P=0.001)、肿瘤部分切除(OR=0.204,95%CI:0.064~0.656,P=0.008)、IDH1R132H表达阴性(OR=2.867,95%CI:1.129~7.282,P=0.027)及RTEL1表达阳性(OR=0.354,95%CI:0.151~0.827,P=0.016)为胶质瘤患者无进展生存期的独立影响因素,可独立用于患者的预后判断。结论年龄>40岁、肿瘤部分切除、IDH1R132H表达阴性及RTEL1表达阳性是影响WHOⅡ级脑胶质瘤患者无进展生存期的独立危险因素。