全硫代反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞生长及端粒酶活性的影响

目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(ASODN)对骨肉瘤细胞HOS细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于骨肉瘤细胞HOS细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法检测骨肉瘤细胞HOS细胞的端粒酶活性、细胞形态改变。结果端粒酶PS-ASODN作用骨肉瘤细胞HOS细胞72h后端粒酶活性表达为阴性。PS-ASODN作用的骨肉瘤细胞HOS细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩。结论 PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大。

全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用

目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸(Phosphorathioatesense oligodeoxy nucleotides,PS-SODN)组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸(Phosphorat-hioate an-tisense oligodeoxy nucleotides,PS-ASODN)组;②脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性,说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性;②吖啶橙染色观察细胞形态:PS-ASODN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩,说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡;③MTT实验:PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖(P<0.0l),并呈一定剂量和时间依赖关系;④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期:与空白对照组比较,PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多,差异显著(P<0.01);在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰,表明细胞被阻止在G1/S期。结论PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后,卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制,并出现凋亡;②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大;③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。

反义寡聚脱氧核苷酸（ODN）衍生物抑制乙肝病毒抗原表达的研究

为比较针对中不同基因的ＯＤＮ硫代衍生物阻断乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的抗原表达，合成了与核心蛋白编码基因起始码上游序列（＃１８９３－１９０７），多聚酶蛋白编码基因起始码上游及内部序列（＃２２９７－２３１３，＃２７９７－２８１３）３．５ｋｂＲＮＡ３′端起始负链ＤＮＡ合成序列（＃ｌ８１７－１８３１）互补的寡聚脱氧核苷酸硫代衍生物［Ｃ－ＯＤＮ，Ｐ－ＯＤＮ，ＰＭ－ＯＤＮ，ＰＢＳ－ＯＤＮ］，分别在ＨＢＶ短暂表达和稳定表达细胞培养系统中观察其抑制ＨＢＶ抗原表达的作用。结果发现，当培养液中ＯＤＮ浓度为２０μｍｏｌ／Ｌ时，四种ＯＤＮ均能抑制ＨｅｐＧ２２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ（乙肝表面抗原）的产生（抑制率分别为：Ｃ－ＯＤＮ，２４．５％；ＰＯＤＮ，１３．４％；ＰＭ－ＯＤＮ，３８．４％；ＰＢＳ－ＯＤＮ，２８．４％）；与ＨＢＶＤＮＡ双体质粒共转染ＨｅｐＧ２细胞后部分ＯＤＮ可明显抑制ＨＢＶＤＮＡ在细胞内表达（ＨＢｅａｇ分泌抑制率分别为：Ｃ－ＯＤＮ，５２％；ＰＭ－ＯＤＮ，７０％；Ｐ－ＯＤＮ，４８％；ＰＢＳ－ＯＤＮ，１８％）。用测定上清中人白蛋白的结果证明，Ｃ－ＯＤＮ的细胞毒作用最低。对Ｃ－ＯＤＮ的作用机理及进一步发展ＯＤＮ的应用也进行了?

特异性阻断MecR1-MecI-MecA通路逆转耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性

目的:研究互补于MRSA的耐药基因mecR1mRNA的PSODNs6088对MRSA耐药性的影响.方法:利用电穿孔的方法将PSODNs6088导入MRSA内,平板克隆形成实验计数菌落数(CFU);微量法测定细菌的生长曲线;RTPCR法检测目的基因mecR1和mecA的表达变化.结果:PSODNs6088能明显抑制MRSA的生长,PSODNs6088各剂量组MRSA的CFU与空白对照组比较明显减少(P<0.05),且具有剂量依赖性,而随机对照组的菌落数却无明显减少;PSODNs6088能显著抑制MRSAmecR1和mecA的表达.结论:反义硫代寡核苷酸能特异的与mecR1mRNA结合并阻断其表达,从而阻断了MRSA耐药基因表达信号通路,减少MRSA的菌落数,抑制其生长,提示反义寡核苷酸能有效的逆转MRSA对β内酰胺类抗生素的耐药性.利用反义技术阻断细菌的耐药信号通路可能成为解决细菌耐药问题的一种新策略.