端粒酶卡扎尔体蛋白1和PIN2/TERF1相互作用端粒酶抑制剂1在乳腺浸润性导管癌患者中的表达及临床意义

目的 探讨端粒酶卡扎尔体蛋白1(TCAB1)和PIN2/TERF1相互作用端粒酶抑制剂1(PINX1)在乳腺浸润性导管癌患者中的表达及临床意义。方法 选取45例乳腺浸润性导管癌患者和45例乳腺纤维腺瘤患者,收集乳腺浸润性导管癌组织和乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化染色法检测TCAB1和PINX1的表达情况。比较乳腺浸润性导管癌组织与乳腺纤维腺瘤组织中TCAB1和PINX1的表达情况,比较不同临床特征乳腺浸润性导管癌患者乳腺浸润性导管癌组织中TCAB1和PINX1的表达情况,采用Spearman相关分析法分析乳腺浸润性导管癌组织中TCAB1与PINX1表达的相关性。结果 乳腺浸润性导管癌组织中TCAB1高表达率明显高于乳腺纤维腺瘤组织,PINX1高表达率明显低于乳腺纤维腺瘤组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。无淋巴结转移、组织学分级为Ⅱ级的乳腺浸润性导管癌患者乳腺浸润性导管癌组织中PINX1高表达率分别明显高于淋巴结转移、组织学分级为Ⅲ级的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。乳腺浸润性导管癌组织中TCAB1与PINX1的表达呈负相关(r=-0.328,P=0.028)。结论 乳腺浸润性导管癌患者中TCAB1高表达率较高,PINX1高表达率较低,二者的表达呈负相关,且PINX1表达与淋巴结转移情况和组织学分级密切相关。

甲状腺乳头状癌患者TCAB1、lncRNA DLEU2表达与临床病理参数及预后的相关性

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)患者组织中端粒酶卡哈尔体蛋白1(TCAB1)、长链非编码RNA DLEU2(lncRNA DLEU2)表达与临床病理参数及预后的相关性。方法前瞻性选取陕西省肿瘤医院2018年1月至2021年1月收治的80例PTC患者。其中,男35例,女45例;年龄38~78(54.65±4.75)岁。取所有受检者术后癌组织及癌旁正常组织进行免疫组化检验。采用免疫组织化学染色方法检测癌组织及癌旁正常组织TCAB1、lncRNA DLEU2的表达水平,分析不同病理参数患者TCAB1、lncRNA DLEU2表达情况,采用Spearman相关性分析TCAB1、lncRNA DLEU2与PTC临床病理参数的相关性。对所有患者进行3年随访,将发生新的转移灶、复发灶及死亡的患者分为预后不良组(20例),其余患者为预后良好组(60例)。分析两组患者TCAB1、lncRNA DLEU2表达水平,采用logistic回归分析模型分析TCAB1、lncRNA DLEU2对PTC的预后预测价值。行t检验、χ^(2)检验。结果癌组织lncRNA DLEU2相对表达量与TCAB1阳性率均高于癌旁组织[(1.44±0.27)比(0.75±0.12),72.78%(49/80)比14.79%(22/80)],差异均有统计学意义(t=16.14,χ^(2)=18.46,均P<0.05);不同TNM分期、淋巴结转移情况患者lncRNA DLEU2相对表达量、TCAB1阳性率对比差异均有统计学意义(均P<0.05);Spearman相关分析结果显示TCAB1与临床分期、淋巴结转移呈正相关(r=0.428,0.353;均P<0.05),lncRNA DLEU2与临床分期、淋巴结转移呈正相关(r=0.430,0.401;均P<0.05);预后不良组lncRNA DLEU2相对表达量与TCAB1阳性率均高于预后良好组[(1.68±0.25)比(1.25±0.13),85.00%(17/20)比53.33%(32/60)],差异均有统计学意义(t=8.48,χ^(2)=6.34,均P<0.05);TCAB1阳性表达、lncRNA DLEU2相对表达量增加为PTC预后独立影响因素(OR=2.791,95%CI 1.457~5.745;OR=2.146,95%CI 1.525~6.795),均P<0.001)。结论PTC患者TCAB1、lncRNA DLEU2表达水平与PTC的发生与发展密切相关,可通过检测TCAB1、lncRNA DLEU2表达来预测患者预后情况。

TCAB1在宫颈鳞癌中的表达及其与患者术后临床病理特征及复发转移的关系

目的探讨端粒酶卡哈尔体蛋白1(TCAB1)在宫颈鳞癌患者中的表达,分析其与术后临床病理特征及复发转移的关系。方法选取2013年1月至2018年8月在海南医学院第二附属医院病理学确诊的104例宫颈鳞癌患者作为研究对象,采用免疫组化法检测TCAB1蛋白表达情况。结果与TCAB1蛋白阴性组比较,TCAB1蛋白阳性组Ki-67表达水平更高,差异具有统计学意义(P<0.05)。TCAB1蛋白阳性患者的中位无进展生存(PFS)时间为36个月,5年PFS为78.7%;TCAB1蛋白阴性患者的中位PFS时间为52个月,5年PFS为97.1%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论TCAB1蛋白可能促进宫颈鳞癌增殖,是宫颈鳞状细胞癌复发转移的不良预测因子,可望成为减少宫颈鳞癌复发转移的治疗靶点。

喉鳞癌EBV感染危险因素及其对TCAB1、c-myc基因表达的影响

目的分析喉鳞癌爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)感染的危险因素,并评估其对端粒酶卡扎尔体蛋白1(TCAB1)、c-myc基因表达的影响。方法回顾性分析2016年1月-2021年8月日照市中心医院收治的92例行手术治疗的喉鳞癌患者临床资料,根据患者癌组织及癌旁组织EBV感染情况,分为EBV阳性组55例和EBV阴性组37例,比较两组临床特征差异,分析影响喉鳞癌患者EBV感染的危险因素;并比较EBV阳性组与EBV阴性组癌组织TCAB1及c-myc基因表达水平及外周血EBV-DNA水平,评估喉鳞癌患者外周血EBV-DNA水平与TCAB1及c-myc基因表达水平的相关性。结果两组性别、年龄、肿瘤部位、临床分期、分化程度及吸烟史比较,无统计学差异,但EBV阳性组淋巴结转移率高于EBV阴性组(P<0.05),Logistic回归分析显示,淋巴结转移是影响喉鳞癌患者EBV感染的危险因素(P<0.05)。EBV阳性组癌组织TCAB1及c-myc mRNA相对表达量、外周血EBV-DNA水平均高于EBV阴性组(P<0.05),Pearson相关性分析显示,喉鳞癌患者外周血EBV-DNA水平与癌组织TCAB1及c-myc mRNA相对表达量呈正相关(P<0.05)。结论EBV感染可能参与喉鳞癌的发生发展,其作用机制可能与上调TCAB1、c-myc的表达有关。

双特异性启动子调控条件复制腺病毒载体的构建

目的 构建并鉴定既能在人端粒酶反转录酶（hTERT）启动子调控腺病毒早期区域1A（E1A）基因,又能在胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子引导入钠碘转染体（hNIS）基因的腺病毒载体.方法 采用免疫印迹分析检测人脑星形胶质母细胞瘤细胞U87、人神经胶质瘤细胞U251和人胚肺成纤维细胞MRC-5细胞感染病毒前自身GFAP和端粒酶蛋白的表达情况.通过PCR扩增获得hTERT启动子、GFAP启动子及hNIS基因,采用基因合成腺病毒E1A基因.采用hTERT和GFAP启动子重组质粒转染MRC-5、U251、U87细胞,转染24 h后应用荧光分析法检测hTERT启动子及GFAP启动子的启动活性.再将上述特异性启动子分别与E1A基因和hNIS基因连接,最后插入穿梭质粒pDC311中,构建重组质粒pDC311-Tp-E1A-Gp-NIS,并应用EcoR Ⅰ及Sal Ⅰ双酶切及测序鉴定.将pDC311-Tp-E1A-Gp-NIS与骨架腺病毒质粒pBHGlox△E1-3Cre共转染人胚肾293细胞,得到条件复制腺病毒Ad-Tp-E1A-Gp-NIS后,分别感染293、MRC-5、U87和U251细胞,利用病毒空斑形成实验检测条件复制腺病毒的复制能力.使用重组腺病毒Ad-Tp-E1A-Gp-NIS及Ad-CMV-EGFP（对照）感染U251、U87及MRC-5细胞后,采用γ计数器测定由hNIS基因介导的摄125I能力.结果 在U87和U251细胞中,均有相对分子质量120000的端粒酶和49000的GFAP蛋白的表达,在MRC-5中,则无表达.GFAP启动子和hTERT启动子能引导目标基因胶质瘤靶向性表达,启动效率分别为U87细胞中（62.10±6.26）％和（49.24±1.73）％,U251细胞中（59.75±34.36）％和（37.31±16.86）％.限制性内切酶能将质粒pDC311-Tp-E1A-Gp-NIS酶切成3252、5500 bp的片段,经测序鉴定后与预计序列一致.成功构建的Ad-Tp-E1A-Gp-NIS条件复制腺病毒,在U87和U251细胞能很好的产生病毒颗粒,在293细胞也能实现复制,但是在MRC-5细胞中则无病毒产生.U251和U87细胞感染Ad-Tp-E1A-Gp-NIS后均具备了较明显的摄125I能力,约为对照组的93.4倍和107.1倍[（60 679.42±635.61）cpm/100 mg比（656.67±9.25） cpm/100 mg,（69 593.10±1842.89）cpm/100 mg比（660.63±16.01）cpm/100 mg,均P＜0.05].MRC-5细胞感染后与对照组比较则未见明显的125I摄取[（649.67± 13.66）cpm/100 mg比（649.67± 13.66） cpm/100 mg,P＞0.05].结论 构建的条件复制腺病毒Ad-Tp-E1A-Gp-NIS具有良好的条件复制能力,并可以摄125I介导放射性碘治疗.

TCAB1与肿瘤及其放射敏感性关系的研究进展

端粒酶（telomerase）是一种合成端粒序列的核糖核蛋白复合物,主要由端粒酶逆转录酶（the telomerase reverse transcriptase,TERT）、端粒酶RNA（the telomerase RNA component,TERC）及与酶活性和组装相关的一些蛋白质组成。端粒酶能使端粒的长度和结构得以稳定,从而保护染色体。

siRNA干扰TCAB1对人主动脉平滑肌增殖的影响及机制

目的:探究TCAB1沉默对人主动脉平滑肌细胞(HASMC)增殖的影响及可能机制。方法:采用RNAi技术设计并合成靶向沉默TCAB1基因表达的三对特异性si RNA序列(si TCAB1-331、si TCAB1-619、si TCAB-749)和一对阴性对照序列(NC),使用lipo2000将si TCAB1、NC转染HASMC,分为3个组:干扰组(si TCAB1)、空白对照组(BC)、阴性对照组(NC),转染24小时倒置荧光显微镜观察细胞转染情况;通过RT-qPCR和Western blot从3个干扰靶点中筛选效果最好的干扰靶点。进一步转染si TCAB1-749后,MTS检测HASMC 24、48、72 h的增殖能力,48小时用RT-qPCR和Western blot检测CyclinD1表达量变化,流式细胞术检测HASMC的细胞周期变化。结果:RT-qPCR和WB结果显示si TCAB1-749为最好的干扰靶点;转染24、48、72 h后,si TCAB1-749组增殖水平明显低于NC组、BC组(P<0.05)。流式结果显示:si TCAB1-749组处于G1期细胞比率有所增加,处于S期细胞比率减少(P<0.05),且si TCAB1-749组细胞周期蛋白cyclinD1表达也下降(P<0.05)。结论:沉默TCAB1能抑制HASMC的增殖,其机制可能与阻碍细胞周期蛋白cyclinD1有关。