富马毒素B1诱发小鼠肝、肾细胞端粒酶活性的变化

目的 探讨富马毒素B1(FB1)对小鼠肝、肾细胞端粒酶活性的影响。方法 将 6 0只BALB/C小鼠平均分为 4组 ,3组饮用含FB1(1mg ml)水 ,通过TRAP PCR ELISA方法检测不同时间小鼠肝、肾细胞端粒酶活性 ,并对端粒酶活性升高明显小鼠测定其细胞DNA含量。结果 不同时间内摄入FB1的小鼠肝细胞端粒酶活性均被激活 ,其酶活性随摄入FB1时间延长而明显增强。小鼠肾细胞端粒酶活性在实验第 90天明显提高。端粒酶活性明显升高小鼠肝、肾细胞DNA含量均有增加。结论 FB1可诱导小鼠肝。

补肾调和肝脾法对慢性再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞端粒酶活性的影响

[目的]观察补肾调和肝脾法治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)的临床疗效,从外周血单个核细胞端粒酶活性的角度探讨其作用机制。[方法]将92例CAA患者,采用随机数字表法随机分为治疗组和对照组,每组46例,对照组给予西药常规治疗,治疗组在对照组常规西药治疗基础上,加补肾调和肝脾中药,每日1剂,每剂分2次服,疗程均为6个月。评价临床疗效,并分别于治疗前后采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测外周血单个核细胞端粒酶表达水平。[结果]两组临床疗效比较有统计学意义(P<0.05),治疗组优于对照组。治疗组和对照组在治疗前后外周血象白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)、血小板计数(PLT)和TERT mRNA表达水平均具有统计学意义(P<0.05),治疗组在改善外周血象HGB、PLT和降低TERT mRNA表达水平均优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),但治疗组在改善外周血象WBC方面与对照组相比差异不具有统计学意义(P>0.05)。[结论]补肾调和肝脾法能够有效提高CAA患者的临床疗效,其作用机制可能与降低外周血单个核细胞端粒酶活性,参与造血干细胞的生成分化有关。

健脾理气方药物血清对肝癌细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的观察健脾理气方药物血清对肝癌细胞 SMMC-7721端粒酶活性的影响以及诱导肿瘤细胞凋亡的作用,探讨其抗肿瘤治疗的作用机制。方法采用端粒重复序列扩增(TRAP)结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,利用健脾理气方中药灌服新西兰兔后制备含药血清,观察健脾理气方药物血清对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721端粒酶活性的影响,同时利用流式细胞仪检测和荧光显微镜观察对细胞凋亡的影响。结果健脾理气药物血清在 d4开始对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用,电泳条带光密度明显降低;并能诱导肿瘤细胞的凋亡,凋亡的比例随作用时间的延长而升高,流式细胞术检测d2,d4,d6的凋亡比例分别为0.81%,5.16%,8.45%。结论对肿瘤细胞端粒酶活性的抑制和诱导肿瘤细胞凋亡是键脾理气中药抗肿瘤治疗作用机制的一部分。

无血清悬浮培养肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达

背景：有研究表明端粒酶活性抑制剂不仅能抑制或杀死肾癌细胞,而且对决定肾癌发生发展的干细胞也有作用。目的：观察无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133及端粒酶活性的表达情况,并与含血清培养的肾癌细胞作比较。设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-06/2009-02在江苏大学完成。材料：手术切除肾癌周围新鲜的正常肾组织标本由江苏大学附属医院提供,肾癌干细胞株OS-RC-2由上海中科院细胞库提供。方法：取处于对数生长期的肾癌干细胞OS-RC-2,胰酶消化后离心弃上清,悬浮于含EGF、bFGF的DMEM/F12无血清培养基中,调整细胞浓度为2×10^8L-1进行接种,在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中悬浮培养。以含血清培养的肾癌细胞及正常肾组织细胞作为对照。主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞仪检测肾癌干细胞CD133及CD34的表达,采用TRAP实时定量检测肾癌干细胞端粒酶活性。结果：肾癌干细胞接种于无血清培养基后,细胞呈圆形悬浮于培养液中;2d后有细胞球生成,每个细胞球含3~8个细胞,折光性较强;7d后细胞球明显增多,体积增大,为规则的圆形或卵圆形。无血清悬浮培养的肾癌干细胞球CD133＋CD34-率明显高于含血清培养的肾癌细胞CD133＋CD34-率,正常肾组织细胞未测出有CD133及CD34的表达,3者间比较差异有显著性意义（F=328.25,P〈0.05）。肾癌干细胞球和肾癌细胞端粒酶活性均高于正常肾组织细胞（F=278.74,P〈0.05）,而前2者间端粒酶活性无明显差异。结论：与含血清培养的肾癌细胞相比,无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志CD133呈明显高表达,二者端粒酶活性均高于正常肾组织。

AZT对肝癌细胞端粒酶活性及相关蛋白表达的影响

背景与目的:端粒酶抑制剂抑制端粒酶活性的机制十分复杂,可能涉及多个蛋白的共同作用。本研究通过3′-叠氮脱氧胸苷(3′-azido-deoxythymidine,AZT)作用于人肝癌细胞SMMC-7721,比较AZT作用后癌细胞端粒酶活性及相关蛋白的变化,探讨AZT抑制端粒酶活性的可能机制。方法:利用噻唑蓝[3(4,5-demethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium-bromide,MTT]实验确定AZT作用的最佳作用时间和浓度;实时荧光定量端粒重复序列扩增法(real-timefluorescentquantitativeTRAPassay,FQ-TRAP法)检测AZT作用后,SMMC-7721细胞端粒酶活性变化;用缺口末端标记技术(terminaldeoxyribonucleotidyltransferse(TdT)-mediatedbiotin-16-dUTPnick-endlabelling,TUNEL)法和流式细胞术检测AZT作用后,SMMC-7721细胞凋亡情况;单细胞激光拉曼光谱技术和蛋白质芯片-飞行时间质谱仪,检测AZT作用后特异蛋白质的变化。结果:AZT抑制癌细胞生长的最佳作用时间为48h,最佳作用浓度为20mmol/L;FQ-TRAP法检测发现,AZT作用后肝癌细胞端粒酶活性与对照组相比受到明显抑制(P=0.0001);TUNEL法观察到AZT诱导肝癌细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测AZT诱导肝癌细胞凋亡率为13.5%;单细胞激光拉曼光谱技术观察到,AZT作用后有7个与蛋白代谢相关的特征峰变化;蛋白质芯片-飞行时间质谱仪检测发现,AZT作用后有24个蛋白分子在癌细胞中高表达,8个蛋白分子在癌细胞中低表达,32个差异蛋白均属于小分子蛋白。结论:AZT可抑制SMMC-7721细胞端粒酶活性,诱导凋亡与相关特异小分子蛋白有关。

剔毒护肝方及其拆方对人肝癌细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的 :探讨剔毒护肝方及其组成药物黄芪、莪术、叶下珠对人肝癌细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法 :剔毒护肝方 (1g/ml) ,黄芪 (0 3 g/ml) ,莪术 (0 3g/ml) ,叶下珠 (0 4g/ml) ,分别制成水煎剂 ,按大鼠体重 10mg/kg ,灌喂正常大鼠 ,2次 /d ,连续 3天 ,于第 4天 ,1次给予全日剂量后 1小时采血 ,制备药物血清。以正常鼠血清为阴性对照 ,将药物血清温育Bel 740 2人肝癌细胞。噻唑蓝 (MTT)比色法测定细胞增殖 ,多聚酶链反应 酶联免疫吸附法 (PCR ELISA法 )检测细胞端粒酶活性。结果 :剔毒护肝方和莪术均可抑制Bel 740 2细胞的增殖 (P <0 0 1) ,黄芪、叶下珠不能抑制Bel 740 2细胞的增殖 (P >0 0 5 )。剔毒护肝方和莪术还可抑制Bel 740 2细胞端粒酶活性 (P <0 0 1)。结论 :剔毒护肝方和莪术均可抑制Bel 740 2细胞的增殖 ,其部分机制可能在于抑制Bel 740 2细胞端粒酶活性。剔毒护肝方对Bel 740 2细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用主要是来自于方中莪术的药理作用。

参桃软肝丸对H_(22)肝癌荷瘤小鼠端粒酶活性及CD4^+CD25^+调节性T细胞比例的影响

目的:研究参桃软肝丸对H22肝癌荷瘤小鼠端粒酶及CD4+CD25+调节性T细胞比例的影响。方法:建立H22肝癌小鼠荷瘤模型,将32只小鼠随机分为生理盐水组(A)、参桃软肝丸正常剂量组(B)、参桃软肝丸高剂量组(C)、5Fu组(D),予相应药物干预10 d,观察小鼠的一般状态、体重、瘤重及抑瘤率、端粒酶活性及肿瘤组织中CD4+CD25+TREG细胞比例。结果:参桃软肝丸能改善小鼠一般状态;B、C、D组荷瘤小鼠体重与A组比较,差异有统计学意义(P<0.05);B、C组瘤重与A组比较,差异有统计学意义(P<0.05),D组瘤重与A组比较,差异有统计学意义(P<0.01),抑瘤率参桃软肝高剂量组与5Fu组有接近的抑瘤率,抑瘤率达38.1%。不同浓度的参桃软肝丸组肿瘤组织中端粒酶活性较生理盐水组明显降低(P<0.05),C组CD4+CD25+TREG细胞比例较A组明显降低(P<0.05)。结论:参桃软肝丸能改善小鼠一般状态,增加小鼠体重,减少瘤重,有较好的抑瘤率,其可能的作用机制与抑制端粒酶活性及降低CD4+CD25+调节性T细胞比例相关。

富马毒素B1诱导的小鼠肝细胞凋亡及端粒酶活性改变

目的 了解富马毒素 B1 ( FB1 )诱导小鼠肝细胞凋亡与端粒酶活性改变之间的关系。方法 给实验BALB/c小鼠喂饲含 1 mg/ml FB1饮用水 ,分别在不同时间取小鼠肝组织 ,用 TUNEL方法观察小鼠肝细胞凋亡发生情况 ,同时用 RT-PCR-ELISA法检测肝细胞端粒酶活性。结果 在摄入 FB1时间不同的各个实验组小鼠肝组织中均检测到端粒酶活性并观察到肝细胞凋亡明显增加。端粒酶活性随摄入 FB1时间增长而明显升高 ;但肝细胞凋亡与端粒酶活性变化有时相差异 ,表现为凋亡细胞指数先明显升高 ,然后逐渐减少的特点。结论FB1诱导小鼠肝细胞凋亡和其致癌作用是同时存在的 ,但表现为初期以细胞凋亡为主要损害形式 。

端粒酶活性与肾细胞癌发生发展的关系

目的 :研究端粒酶与肾细胞癌发生发展的关系。方法 :应用TRAP (telomericrepeatamplificationprotocol)方法 ,对 2 0例肾细胞癌病人术后标本中的肾病组织及癌旁正常肾组织进行研究。结果 :2 0例肾癌组织中有 1 4例癌组织 ( 70 0 % )端粒酶表达阳性 ,2 0例癌旁正常组织无一例组织端粒酶表达阳性。 2 0例肾癌样本中 ,9例T1期中有 4例 ( 44 4% )端粒酶表达阳性 ;1 1例T2、T3期中 1 0例 ( 90 9% )端粒酶表达阳性。 2 0例肾癌样本中Ⅰ、Ⅱ级共 1 0例 ,其中 4例 ( 40 0 % )端粒酶表达阳性 ;Ⅲ、Ⅳ级有 1 0例 ,都表达为端粒酶阳性( 1 0 0 % )。肾细胞癌组织端粒酶活性的阳性率明显高于癌旁正常组织 ,且端粒酶的活性与肾细胞癌的病理分级与临床分期具有正相关关系。结论 :端粒酶的活性与肾细胞癌的恶性程度及浸润能力具有相关关系 。

肝硬化并肝细胞癌的端粒酶活性和氧化应激研究

为阐明端粒酶活性和氧化应激在肝细胞癌 (HCC)合并肝硬化及肝硬化患者组织中的表达、相互关系及意义 ,采用 TRAP- EL L ISA方法测定了 2 1例 HCC合并肝硬化 (下称 HCC组 )和 2 3例肝硬化 (下称肝硬化组 )患者组织中的端粒酶活性 ,并用生化法测定其组织中的丙二醛 (MDA)、谷胱甘肽 - S转移酶 (GST)和总抗氧化能力 (T- AOC)。结果显示 ,HCC组端粒酶阳性 18例 ,阴性 3例 ;肝硬化组阳性 3例 ,阴性 2 0例 ,两者差别有显著意义 (P<0 .0 0 1) ;MDA、GST和 T- AOC在两组中的表达均有显著差异 (P均 <0 .0 0 1) ;端粒酶活性和 MDA含量呈正相关 (P<0 .0 5 )。认为从肝硬化到肝癌的过程与机体抗氧化系统功能失调密切相关 ;端粒酶激活是 HCC癌变的早期事件 ;氧化应激对端粒酶激活可能起重要作用。

搏癌丸对人肝癌Hep-G2细胞端粒酶活性的影响

目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌细胞Hep-G2端粒酶活性的影响。方法:采用药物血清和细胞药理学方法,观察10％搏癌丸药物血清作用Hep-G2细胞48h后对端粒酶活性的影响。结果:人肝癌细胞Hep-G2细胞经10%搏癌丸药物血清培养48h后,其端粒酶活性被显著抑制(抑制率为66.6%),与无药血清对照组比较,有显著性差异,P<0.05。结论:搏癌丸能显著抑制端粒酶活性。

芦荟大黄素对人肝癌HepG2细胞端粒酶活性的影响及机制探讨

目的观察芦荟大黄素(AE)对人肝癌Hep G2细胞端粒酶活性的影响,并探讨其可能的分子机制。方法取对数生长期的Hep G2细胞,分别以终浓度为0、10、30、50μmol/L的AE作用24 h;收集Hep G2细胞,采用端粒重复序列扩增技术(TRAP)测定Hep G2细胞端粒酶活性,分别以Western blotting、PCR法检测Hep G2细胞中的h TERT、c-myc蛋白和基因表达水平。结果以终浓度为0、10、30、50μmol/L的AE作用Hep G2细胞24 h,其端粒酶活性分别为0.707±0.001、0.546±0.008、0.338±0.001、0.214±0.009;随着AE浓度升高,Hep G2细胞的端粒酶活性下降,且30、50μmol/L与0μmol/L AE作用的Hep G2细胞端粒酶活性差异有统计学意义(P均<0.05)。随着AE浓度升高,Hep G2细胞h TERT、c-myc mRNA和蛋白表达水平均下降;其中,h TERT、c-myc mRNA和蛋白在50μmol/L,h TERT mRNA在30μmol/L,与0μmol/L差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 AE可通过下调cmyc和h TERT表达从而抑制Hep G2细胞端粒酶活性。

肝癌细胞中端粒酶逆转录酶与c-myc表达的关系

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)中端粒酶逆转录酶(hTERT)与c-myc蛋白表达情况及其相关性。方法采用免疫组化SP法检测52例HCC癌组织及相应癌旁组织中hTERT与c-myc蛋白表达,并用TRAP-ELISA法检测上述组织中的端粒酶活性。结果HCC组织中hTERT与c-myc蛋白阳性率分别为86.5%(45/52)和78.8%(41/52),它们与相应癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01);HCC癌组织中端粒酶活性阳性率为80.8%(42/52),明显高于相应癌旁组织(15.4%,8/52);HCC癌组织中端粒酶活性、hTERT及c-myc蛋白阳性表达率两两均呈显著正相关(r=0.761,P<0.001;r=0.654,P<0.001;r=0.486,P<0.001)。结论HCC癌组织中hTERT与c-myc蛋白过度表达,两者相互作用而共同参与肝癌端粒酶活性的调控。

肝细胞生长素在体外对大鼠肾小球系膜细胞生物活性的影响

目的 观察低分子肝细胞生长素(HPN)对炎症因子刺激下的大鼠肾小球系膜细胞增殖及产生TGFβ的影响。方法 用3H-TdR掺入法检测肾小球系膜细胞(GMC)增殖变化,用ELISA法检测肾小球系膜细胞培养上清中TGFβ的水平。结果 在无IL-β存在时,浓度为400u/孔的低分子肝细胞生长素对常规培养的系膜细胞增殖有明显抑制作用(P<0.01),而对TGFβ的产生无影响;但它对IL-1β刺激下的大鼠系膜细胞增殖和TGFβ产生均有明显抑制作用(均P<0.01)。低分子肝细胞生长素在100u/孔浓度时无上述作用。结论 高剂量HPN可抑制体外培养的大鼠系膜细胞增殖,降低IL-1β刺激系膜细胞产生TGFβ。低分子肝细胞生长素无种属特异性和组织特异性。

补肾中药对老年大鼠肝细胞核内活性基因的影响

目的:观察老年、老年加补肾中药及青年组大鼠细胞核内活性基因的变化,探求补肾中药延缓衰老的分子生物学机理。方法:以脱氧核糖核酶Ⅰ(DNabe Ⅰ)为探针,脱氧核糖核酸Ⅱ(DNaseⅡ)为参照,分别切割老年、青年、老年加补肾药大剂量组、老年加补肾药小剂量组大鼠肝细胞核内染色质,研究4组大鼠肝细胞核活性基因的变化。酶切后进行琼脂糖电泳,并将胶板置于紫外灯下观察、摄影。结果:观察到在不同的时间内,对 DNaseⅠ的消化敏感性依次为青年组大于补肾组(大剂量组与小剂量组无显著差异),补肾组大于老年组,而4组对 DNaseⅡ敏感性无差异。结论:老年大鼠肝细胞核内染色质对 DNaseⅠ的敏感性下降。补肾中药延缓衰老的分子生物学基础可能与减缓细胞核内活性基因丢失有关。

端粒酶亚单位与肝细胞肝癌的关系

端粒酶是肿瘤的特异性标志之一,端粒酶活性的检测是诊断肿瘤的有用方法。随着端粒酶亚单位的相继克隆成功,人端粒酶RNA成分(hTR)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)及端粒酶相关蛋白(hTEP)等亚单位基因表达的改变及调控是诊断及治疗肝细胞肝癌的有效方法。