使用hTERT启动子联合RNAi靶向逆转乳腺癌的耐药性

目的:克隆人端粒酶逆转录酶启动子(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT),探讨对乳腺癌细胞的特异性[1],利用RNAi技术靶向沉默耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR乳腺癌耐药蛋白(Breast cancer resistance protein,BCRP)基因[2]的表达,观察BCRP的mRNA变化,BCRP蛋白的表达以及对阿霉素耐药性的变化[3]。方法:构建重组质粒(pGenesil-CMV-shRNA、pGenesil-hTERT-shRNA),分别转染端粒酶阴性及阳性细胞,检测hTERT启动子的靶向性,应用RT-PCR及Western-blot技术检测不同组的细胞的RNA、蛋白差异,MTT法分析药敏性变化[4]。结果:端粒酶阳性的细胞可见很强的荧光,明显强于端粒酶阴性的细胞[5];细胞实验RT-PCR及Western blot检测结果显示:BCRP的mRNA和蛋白的表达受抑制与对照组其差异有显著性(P<0.05);MTT比色法结果显示:对阿霉素的药物敏感性明显提高。结论:使用hTERT启动子联合RNAi成功靶向沉默BCRP基因,乳腺癌MCF-7/ADR对阿霉素的敏感性明显增加,为进一步开发肿瘤的特异性基因沉默治疗奠定实验基础。

shRNA/hTERT表达载体靶向逆转乳腺癌的耐药性

目的克隆人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子,探讨对乳腺癌细胞的特异性,构建shRNA/hTERT表达载体,探讨在动物实验中耐药性的变化。方法构建重组质粒(pGenesil-CMV-shRNA、pGenesil-hTERT-shRNA),用MCF-7/ADR乳腺癌细胞接种于50只裸鼠前肢腋下,并将45只接种成功的动物模型按随机数字表法分为3组:对照组、重组质粒pGenesil-CMV-shRNA组、重组质粒pGenesil-hTERT-shRNA组,应用RT-PCR技术检测裸鼠组织的乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)基因的mRNA及Western blot检测裸鼠组织BCRP基因的蛋白表达、测量裸鼠瘤体体积的变化。结果成功构建人乳腺癌裸鼠模型;动物实验RT-PCR及Western blot检测结果显示:pGenesil-CMV-shRNA、pGenesil-hTERT-shRNA组BCRP的mRNA和蛋白的表达均受抑制,与对照组比较,其差异均有统计学意义(P<0.05);裸鼠瘤体体积明显缩小,与对照组比较,其差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒pGene-sil-hTERT-shRNA组抑瘤率为68.5%。结论 shRNA/hTERT表达载体成功靶向沉默BCRP基因,动物实验证实对阿霉素的敏感性明显增加。