PLGA纳米载体介导的端粒酶反义核酸体外转染率及对肝肿瘤细胞的影响

目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体,促进反义核酸对肝肿瘤细胞的抑制作用。方法用绿色荧光蛋白报道基因pEGFP-N1表达质粒DNA转染细胞;观测不同转染方法的转染率,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;噻唑蓝(MTT)法测定端粒酶反义核酸对肝肿瘤细胞HepG2的抑制;过氧化物酶的抗荧光素抗体法检测肿瘤细胞凋亡指数。结果裸DNA和磷酸钙的转染效率均不高,分别为18%和24%;脂质体的转染效率为42%,纳米粒的转染效率最高,达61%;以脂质体或PLGA纳米粒为载体介导端粒酶反义核酸处理的肿瘤细胞,其端粒酶活性和生长与空白对照相比明显下降(P<0.05),两种载体之间的差异也非常显著(P<0.05);处理72h后,纳米粒介导组的肿瘤细胞凋亡率显著高于脂质体介导组,分别为23.1%和16.4%。结论PLGA纳米粒是一种非常有前途的非病毒基因治疗载体。

hTERT基因反义核酸对8910卵巢癌细胞端粒酶活性的影响

目的 研究人类端粒酶催化亚单位 (h TERT)基因的反义寡核苷酸对卵巢癌细胞的影响 .方法 采用 TRAP-EL ISA检测 8910卵巢癌细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化 .结果 h TERT基义反义核酸能有效抑制 8910细胞端粒酶活性 .结论 h TERT基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 。

PLGA纳米载体介导的端粒酶hTERT反义核酸对裸鼠肝癌移植瘤的影响

目的通过以PLGA纳米粒作为端粒酶hTERT反义核酸的载体,促进反义核酸对肝癌瘤组织的抑制。方法以HepG-2肝癌细胞和裸鼠建立肝癌移植瘤实验模型;观测瘤重和成瘤率;流式细胞仪检侧肿瘤细胞凋亡及细胞周期的特点。结果与对照组相比,治疗组肿瘤细胞凋亡数明显增加,细胞增殖受到抑制,肿瘤生长缓慢,出瘤时间推迟。结论以PLGA纳米粒作为端粒酶反义核酸的载体,能显著延缓裸鼠肝癌移植瘤的发展,产生明显的疗效。

参芪扶正注射液联合hTR反义核酸对白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的观察参芪扶正注射液联合hTR反义核酸对急性白血病小鼠骨髓细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法选取近交系8～12周龄DBA-2雄性小鼠尾静脉注射L1210淋巴细胞白血病株建立白血病小鼠模型,随机分为空白对照组及治疗组,治疗组分别给予参芪扶正注射液、参芪联合放射、参芪联合hTR反义核酸、参芪联合hTR反义核酸及放射治疗,疗程结束后活杀部分小鼠,采用端粒重复扩增(TRAP)-ELISA方法检测治疗后小鼠骨髓细胞的端粒酶活性,采用AnnexinV-FITC及PI双染,FACScan流式细胞术定量检测细胞凋亡率,观察各组小鼠骨髓细胞端粒酶活性、细胞凋亡率的变化。结果成功建立L1210/DBA-2白血病小鼠模型,检测到白血病小鼠的骨髓细胞端粒酶活性较正常小鼠明显升高,细胞凋亡率较正常小鼠下降;经参芪扶正注射液以及联合治疗后,各组小鼠骨髓细胞端粒酶活性明显下降,细胞凋亡率升高,以参芪联合hTR反义核酸及放射治疗组疗效最为显著,与其他各组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论急性白血病骨髓细胞端粒酶活性高表达可能是其治疗的靶点;参芪扶正注射液联合hTR反义核酸可通过下调端粒酶活性水平,促进白血病细胞的凋亡,对白血病小鼠放疗有一定增敏效应。

端粒酶反义核酸对乳腺癌细胞生长的抑制作用

为了探讨针对人类端粒酶RNA(hTR)基因的反义寡核苷酸 (AS ODN)对乳腺癌细胞系MCF 7的影响 ,将AS ODN作用于细胞。进行细胞计数 ,MTT比色法测细胞生长抑制率 ,PCR ELISA法测端粒酶活性 ,流式细胞仪测细胞周期与凋亡。结果表明该AS ODN能抑制MCF 7细胞生长 ,降低端粒酶活性并诱导细胞凋亡。针对hTR的AS ODN对治疗恶性肿瘤有潜在意义。

端粒酶反义核酸对BEL-7402肝癌细胞生长和活性的影响

目的 研究人类端粒酶RNA(hTR )基因的反义寡核苷酸 (AS ODN )对BEL 740 2肝癌细胞生长和活性的影响。方法 将AS ODN作用于BEL 740 2细胞 ,观察细胞生长状况 ,PCR ELISA法检测端粒酶活性 ,流式细胞仪和细胞DNA电泳观察细胞的凋亡情况。结果 AS ODN能抑制BEL 740 2细胞的生长 ,降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论 针对hTR的AS

人类端粒酶基因反义核酸对恶性肿瘤细胞端粒酶抑制的实验研究

目的 :研究人类端粒酶 (hTR)基因的反义核酸对K5 62细胞、Hep 2细胞端粒酶活性和K5 62细胞凋亡的影响。方法 :采用TRAP法检测K5 62细胞、Hep 2细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化以及采用TUNEL法观察反义核酸处理前后K5 62细胞凋亡的变化。结果 :hTR基因反义核酸能有效抑制K5 62细胞和Hep 2细胞的端粒酶活性 ,并且诱导K5 62细胞发生凋亡。结论 :hTR基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 。

人端粒酶核糖核酸反义寡核苷酸可增强顺铂诱导原代白血病细胞凋亡的作用

目的探讨人端粒酶核糖核酸(humantelomeraseribonucleicacid,hTR)反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)对顺铂诱导原代白血病细胞凋亡的影响。方法采用与hTR模板互补的硫代ASODN处理原代白血病细胞,采用端粒酶重复扩增分析聚合酶链反应酶联免疫分析法检测端粒酶活性的变化;采用苔盼蓝拒染法观察经hTRASODN处理的原代白血病细胞对顺铂的反应;采用AnnexinV与碘化丙啶双染色观察凋亡细胞形态及用流式细胞仪检测凋亡细胞率。结果经hTRASODN作用后,原代白血病细胞端粒酶活性明显下降。ASODN作用24小时,再加入顺铂作用48小时,明显抑制原代白血病细胞,并使原代白血病细胞凋亡明显增加。ASODN作用24小时后再加入5μmol/L顺铂作用72小时的原代白血病细胞凋亡率为(41±9)%,分别高于正义寡核苷酸加顺铂组[(15±5)%]及单用顺铂组[(13±3)%],差异有统计学意义(均为P<001)。结论hTRASODN可明显抑制原代白血病细胞端粒酶活性,并增强顺铂诱导原代白血病细胞的凋亡,人端粒酶有可能成为白血病基因治疗的新靶点。

以端粒酶为靶的肿瘤反义核酸治疗

端粒酶是一种新的肿瘤标志物和肿瘤治疗靶点。以端粒酶为靶的反义核酸研究进展迅速并且抑癌效果明显 ,与 2 5A (5′ phosphorylated 2′ - 5′ linkedoligoadenylate)的连接更使其具有了特异性诱导凋亡的作用。作为一项刚起步的研究 ,它也面临挑战和困难。综述了近年来不同的反义核酸抑制端粒酶活性的研究进展。

载端粒酶反义核酸PLGA纳米粒的表征及生物学效应

目的检测载端粒酶反义核酸聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒的表征及生物学效应,分析其粒径范围、载药量及生物相容性。方法以激光粒度分析仪测定纳米粒的粒径分布及平均粒径,紫外分光光度法测定反义核酸装载量,双室扩散法研究纳米粒的体外释药特性,核酸酶解法检测纳米粒对反义核酸的保护作用,MTT法研究纳米粒的细胞毒性。结果纳米粒的平均粒度为201nm;包封率为67.3%,载药量为3.66%。纳米粒体外释放开始阶段存在突释期,5d后释放量开始稳定,15d后仍有核酸释放。纳米粒中的核酸在37℃,经核酸酶消化1h后,仍然保持结构的完整、未被降解,而裸核酸在同样条件下30min即被完全降解。纳米粒对细胞的生长抑制与空白对照差异无显著性。结论制备的端粒酶反义核酸-PLGA纳米粒稳定性、生物相容性好,以PLGA纳米粒作为载体可保护反义核酸免受核酸酶的降解。但PLGA纳米粒的反义端粒酶核酸载药量偏低,需进一步改进制备方法,提高载药量。

反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的 阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性。方法 运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察胃癌细胞的活力。结果 三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达,但其活性的高低与其分化程度没有显著关系。在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制,但在同样浓度条件下,MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制。错义序列对照组则无明显变化。结论 端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性,其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性,其作用机制是通过抑制端粒酶活性,端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的。

hTR基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性和凋亡的影响

目的 :研究人类端粒酶 (hTR)基因的反义核酸对K5 6 2细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法 :采用TRAP法检测K5 6 2细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化 ,以及采用TUNEL法观察反义核酸处理前后细胞凋亡的变化。结果 :hTR基因反义核酸能有效抑制K5 6 2细胞的端粒酶活性 ,并且诱导K5 6 2细胞发生凋亡。结论 :hTR基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 ,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。

脂质体介导的hTERT基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性的影响

目的研究人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因反义核酸(anti-sense phosphorothioate oligodeoxynucletide,ASODN)对K562细胞端粒酶活性的影响。方法本研究采用脂质体介导的基因转染方法将ASODN导入K562细胞,以TRAP-ELISA法检测药物对端粒酶活性的影响,免疫荧光检测hTERT蛋白表达水平的变化。结果ASODN能显著抑制K-562细胞端粒酶活性和hTERT基因的表达,呈时间依赖性。结论以hTERT基因ASODN抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。

hTERT基因反义核酸对Hela宫颈癌细胞端粒酶活性的影响

目的 :研究人类端粒酶催化亚单位 (hTERT)基因的反义寡核苷酸对宫颈癌细胞的影响。方法 :采用TRAP -ELISA检测Hela细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果 :hTERT基因反义核酸能有效抑制Hela细胞端粒酶活性。结论 :hTERT基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 ,为肿瘤治疗提供了一个有效的新途径。

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞端粒酶活性影响及诱导凋亡作用

为了研究c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响及其诱导凋亡作用,探讨HL-60细胞端粒酶活性与c-myc基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,采用流式细胞术进行细胞凋亡检测及细胞周期分析,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA断裂情况,应用TRAP-ELISA法测定HL-60细胞端粒酶的活性。结果表明:反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞百分数由55.6%降至30%,并出现早期凋亡峰(凋亡细胞比例占25.2%);琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯形带;端粒酶活性检测发现反义寡核苷酸3,4,5μmol/L作用组OD450-690分别为1.952±0.14,1.805±0.40,1.616±0.41,与未作用组(OD450-690为2.648±0.42)比较,差异有显著性(P<0.05);反义寡核苷酸1和2μmol/L作用组及正义寡核苷酸5μmol/L作用组OD450-690分别为2.324±0.36,2.162±0.38,2.466±0.29,与未作用组比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:c-myc基因反义寡核苷酸能够通过封闭c-myc基因的表达而诱导HL-60细胞凋亡,阻止细胞由G1期进入S期,并具有下调端粒酶活性作用。

端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞损伤修复能力的影响

利用反义核酸技术将端粒酶RNA的全长cDNA反向导入乳腺癌MCF 7细胞基因组中 .通过单细胞凝胶电泳实验发现 ,其DNA受H2 O2 损伤后的修复能力下降 .但端粒酶活性抑制为何引起其DNA损伤修复能力下降的原因尚待进一步研究 .

端粒酶反义RNA对HL-60细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响

目的 探讨端粒酶反义 RNA对 HL- 60细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法 用脂质体介导法将 p BBS2 1 2 - h TR(反义端粒酶 RNA真核表达载体 )导入人髓性白血病细胞系 HL-60中 ,采用 TRAP法测定端粒酶活性 ,细胞生长动力学检测 ,FCM分析等方法观察其对 HL- 60细胞的端粒酶活性及细胞增殖影响。结果 端粒酶反义 RNA能显著抑制 HL- 60细胞的端粒酶活性 ,抑制 HL- 60细胞的增殖并诱导其凋亡。结论 以端粒酶反义 RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。

端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞恶性表型的影响

为了进一步探讨端粒酶在肿瘤发生中的作用 ,实验应用反义核酸技术研究端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞MCF 7恶性表型的影响 采用的方法包括 :基因重组、脂质体共转染法获得端粒酶反义重组病毒 ,病毒感染MCF 7后 ,检测细胞的生长曲线、细胞周期及集落形成能力 结果表明 ,与对照组细胞相比 ,反义病毒感染后的MCF 7细胞恶性表型明显降低 提示端粒酶RNA的反义cDNA的导入 。

反义端粒酶PNA对肺癌细胞株生长的体外抑制作用

目的 探讨反义端粒酶肽核酸 (PNA)片段对肺癌细胞株端粒酶活性及细胞株生长的抑制作用。方法 将人工合成的端粒酶反义PNA片段 ,应用脂质体转染法将反义端粒酶序列导入肺腺癌细胞株A5 49及小细胞癌细胞株NCI H44 6中 ,采用MTT法检测活细胞数 ,采用RT PCR ELLISA法检测端粒酶活性。结果 转染 72h后 ,A5 49、NCI H 44 6细胞株端粒酶活性 (A45 0值 )分别由 0 .5 82± 0 .0 3 9和 0 .5 71± 0 .0 43降低至 0 .2 94± 0 .0 48(P <0 .0 1)和 0 .2 76± 0 .0 5 1(P <0 .0 1) ;而两细胞株的活细胞数 (A5 80值 )分别由 0 .485± 0 .0 0 9和 0 .5 13± 0 .0 15降低至 0 .191± 0 .0 2 7(P <0 .0 1)和 0 .13 8± 0 .0 46(P <0 .0 1) ,细胞生长受到显著抑制。结论 反义端粒酶PNA片段具有抑制肺癌细胞株端粒酶活性的作用 。