端粒重复序列扩增-银染色法用于端粒酶活性测定的研究

目的 :建立端粒重复序列扩增 (TRAP) -银染色技术 ,探讨端粒酶活性检测在肿瘤诊断中的意义。 方法 :用裂解液提取组织细胞中的端粒酶模板 ,在特异引物作用下进行 PCR扩增 ,所得产物用氯仿∶异戊醇 (2 4∶ 1)处理浓缩 ,作聚丙稀酰胺凝胶垂直板电泳 ,经硝酸银染色分析端粒酶活性。 结果 :TRAP-银染色法能准确特异地检测小鼠骨髓瘤细胞 (SP2 / 0 )的端粒酶活性 ,灵敏度可达 1× 10 2个细胞。端粒酶阳性率在 2 3例各种恶性肿瘤组织中为 86 .9% (2 0 / 2 3) ,而在 19例炎性包块与良性增生组织为 5 .3% (1/ 19) ,5例正常组织中未发现有端粒酶活性。 结论 :TRAP-银染色法简便快速、具有较好的测定敏感度与重复性 ,对临床恶性肿瘤疾病的诊断具有良好的应用前景。

银染端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性及其临床应用

目的 建立银染端粒重复序列扩增法(TRAP)测定肿瘤细胞的端粒酶活性.方法:将银染与TRAP相结合,测定了人肿瘤细胞株及穿刺细胞标本的端粒酶活性.结果:人肿瘤细胞株端粒酶活性为阳性,35例病理诊断为恶性肿瘤的穿刺标本中,33例端粒酶活性阳性,12例良性病变均为阴性.结论:银染TRAP法是特异,敏感及快速的端粒酶活性的检测方法,提示该方法可成为恶性肿瘤的诊断指标之一.

TRAP-银染色法用于肝癌组织端粒酶活性测定的研究

目的探讨端粒酶活性检测在肝癌诊断中的意义。方法用裂解液提取组织细胞中的端粒酶模板,在特异的引物作用下进行PCR扩增,所得产物作聚丙稀酰胺凝胶垂直板电泳,经硝酸银染色分析端粒酶活性。结果肝癌组织中的端粒酶阳性率为85.7%,明显高于慢性肝炎组2.6%、肝硬化组16.7%和对照组4.2%,P<0.01。慢性肝炎组、肝硬化组、对照组之间无显著性差异(P<0.05)。结论端粒酶活性检测对临床恶性肝脏肿瘤疾病的诊断具有良好的应用前景。

银染-TRAP法检测胸腹水脱落细胞端粒酶活性的研究

目的:探讨检测胸腹水脱落细胞端粒酶活性对于鉴别良恶性肿瘤的临床意义.方法:用Kim法处理48例胸腹水细胞后,利用改进的银染—TRAP(端粒重复序列扩增)法测其端粒酶活性.结果:24例临床及细胞涂片检查证实恶性胸腹水细胞端粒酶活性全部阳性;12例临床证实恶性而细胞检查未找到癌细胞的胸腹水细胞端粒酶活性阳性7例,阴性5例;12例良性胸腹水细胞端粒酶活性全部阴性.结论:端粒酶的激活与恶性胸腹水的发生发展密切相关,并有可能成为一种鉴别良恶性胸腹水快速、灵敏的临床诊断指标.

19个X-STR荧光复合扩增体系的法医学应用评估

目的评估含有19个X染色体-短串联重复序列(X-STR)的复合扩增体系在法医学中的应用效果。方法参照DNA分析方法科学工作组(SWGDAM)的验证指南,评估了含有19个X-STR的复合扩增体系的种属特异性、灵敏度、抗抑制剂、精确性、可重复性、一致性、在混合样本与陈旧样本中的检测效果及Stutter峰和群体多态性。结果 DNA模板量在0.25~1.00ng时,各基因座分型结果清晰准确,均衡性好、特异性强,混合、陈旧样本均能获得正确的分型结果;检测中国南方汉族共196份无关个体血样,19个X-STR遗传标记共检出151个等位基因,基因频率为0.0037~0.8439,其中多态性信息量最为丰富的基因座是DXS10135(多肽性信息含量=0.9173),个体识别能力在男、女性群体中分别为0.9124、0.9894;累积个体识别能力在男性群体中大于0.999 999 999 874,在女性群体中大于0.999 999 999 999;在三联体案件中的累积平均排除概率大于0.999 999 999 298,在二联体中的累积平均排除概率大于0.999 999 500 495。结论含有19个X-STR的复合扩增体系分型准确、稳定,满足法医学实践的要求,获得的基因频率等参数可为X-STR检验提供数据支撑。

INF-γ和TGF-β_1对视网膜色素上皮细胞端粒酶活性的影响

目的 探讨不同浓度的干扰素 γ(interferon γ ,INF γ)和转化生长因子 β1(trans forminggrowthfactor β1,TGF β1)对人视网膜色素上皮 (RPE)细胞端粒酶活性的影响。方法 使用不同浓度的INF γ和TGF β1处理RPE细胞 2 4h后 ,采用端粒重复序列扩增法定性、定量检测上述细胞因子作用下的RPE细胞端粒酶活性。结果 随着上述细胞因子浓度的增加 ,RPE细胞端粒酶活性逐渐降低 ,且呈剂量依赖性 ,2种细胞因子具有协同作用。结论 INF γ和TGF β1对RPE细胞端粒酶活性具有抑制作用 ,细胞因子有可能成为治疗增生性玻璃体视网膜病变的新靶点。

端粒酶活性测定在膀胱癌诊断中的作用

目的 :评估端粒酶活性测定对膀胱癌诊断的临床意义。 方法 :采用端粒重复序列扩增 银染色法 ,对 5 4例膀胱癌组织及尿沉渣进行端粒酶活性测定 ,并与对照组及尿脱落细胞病理学检查进行比较。 结果 :组织端粒酶活性的阳性率达 89% ;尿沉渣的阳性率达 81% ,而尿脱落细胞学检查的阳性率为 46 %。尿端粒酶活性明显高于尿脱落细胞病理学检查 ,尤其在肿瘤早期差异更为显著。 结论 :组织端粒酶活性测定的临床意义尚有待进一步研究 ;而尿沉渣端粒酶活性测定阳性率高、特异性好 ,且各级膀胱癌之间无明显差异 ,可以替代尿脱落细胞病理学检查 。

端粒酶活性检测在细针吸取细胞学诊断中的意义

目的 检测体表肿物细针吸取细胞标本中端粒酶的活性 ,探讨其在体表肿瘤细胞学诊断中的临床意义。方法 采用端粒重复序列扩增 (TRAP) 银染色技术检测 47例体表肿块细针吸取标本中的端粒酶活性。结果 2 3例细针吸取恶性肿瘤标本中 ,端粒酶阳性率为 86 .9%( 2 0 / 2 3) ,而在 19例炎性病变及良性增生组织中阳性率为 5 .3%( 1/ 19) ,5例正常组织中未发现有端粒酶活性表达。结论 体表肿瘤细针吸取标本端粒酶检测可提高单纯细胞学诊断的准确性、敏感性和特异性 ,为细胞学诊断体表肿瘤提供可靠依据。

三氧化二砷对人类肝癌细胞株端粒酶活性的影响

目的观察中药砒霜的主要成分——三氧化二砷(As2O3)对人类肝癌细胞株的端粒酶活性的影响,深入探讨As2O3注射液的抗肝癌作用机制。方法采用端粒重复序列扩增法(TRAP)结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)银染法,检测不同浓度和作用时间的As2O3对人类肝癌细胞株SMMC-7721和QGY-7703以及对人类正常肝细胞株L-02端粒酶活性的影响。结果人类正常肝细胞株L-02端粒酶活性为阴性,人肝癌细胞株SMMC-7721和QGY-7703端粒酶活性为阳性。不同浓度的As2O3作用24小时时对肝癌细胞株端粒酶活性未见明显抑制,而浓度20μg/ml和40μg/ml的As2O3作用48小时时可完全抑制其端粒酶活性,浓度为8、10、20和40μg/ml的As2O3作用72小时时可完全抑制其端粒酶活性。结论As2O3能够显著地选择性抑制人类肝癌细胞株端粒酶活性,且这种抑制作用呈现出典型的剂量相关性和时间依赖性。这可能是As2O3抗肿瘤作用的重要机制之一;同时提示As2O3注射液可能是一种优良的和具有临床实用价值的端粒酶抑制剂。

上皮性卵巢肿瘤端粒酶活性及其各亚单位基因表达的研究

目的:探讨端粒酶及其亚单位(hTERT、TP1、hTR)在卵巢癌发生和发展中的作用,研究端粒酶活性与各亚单位表达的相关性。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)技术检测66例卵巢上皮性肿瘤及10例正常卵巢组织端粒酶不同亚单位基因的表达情况,应用端粒重复序列扩增技术(telomeraserepeatamplificationprotocol,TRAP)检测其中45例卵巢上皮性肿瘤及9例正常卵巢组织端粒酶活性。结果:1)恶性、交界性卵巢肿瘤组织中端粒酶阳性检出率分别为83.33%(25/30)、71.43%(5/7),两组间无显著性差异(P>0.05),而良性上皮性卵巢肿瘤及正常卵巢上皮中未检测到端粒酶活性,与前两组之间均有显著差异(P<0.001);2)RT-PCR定性检测发现hTR和TP1mRNA在检测的各组组织中均有表达,而hTERTmRNA主要在上皮性卵巢癌和交界性卵巢肿瘤中表达,二者间hTERTmRNA表达的差别无统计学意义(P>0.05),而与良性及正常组织hTERT表达有显著差异(P<0.001);3)端粒酶活性与hTERT亚单位表达明显相关(P<0.001),而与hTR和TP1亚单位表达无明显相关性(P>0.05)。结论:端粒酶与卵巢癌发生发展过程密切相关;hTERT表达与端粒酶活性密切相关,并可能参与端粒酶的活性调节,hTERT的表达有望成为上皮性卵巢癌的诊断指标。

端粒酶活性在非小细胞肺癌不同组织细胞中表达的研究

目的 对比研究端粒酶活性在非小细胞肺癌癌组织、癌旁组织、血液及痰液中的表达 ,以了解其临床意义。 方法 应用聚合酶联反应 -端粒重复序列扩增法 (PCR -TRAP)检测30例肺癌手术患者癌组织、癌旁组织、血液及痰液中的端粒酶活性 ,并以25例肺部良性疾病手术患者为对照组。结果 肺癌患者肺癌组织端粒酶活性阳性率83.3% (25/30) ,癌旁组织端粒酶活性阴性 ,外周血中端粒酶活性阳性率33.3 % (10/30) ,痰液标本中端粒酶活性阳性率56.7% (17/30)。对照组正常肺组织标本和外周血中端粒酶活性均阴性 ,痰液标本中端粒酶活性阳性率24.0% (6/25) ;两组病变组织、血液和痰液中端粒酶活性阳性率的差别均有显著性意义 (均P<0.05)。 结论 (1)非小细胞肺癌患者在肺癌组织、血液及痰液中均有端粒酶活性表达 ,其活性表达强度依次为肺癌组织、痰液、血液。 (2)痰液中端粒酶活性检测对肺部良恶性疾病的鉴别具有一定的诊断意义。

人卵巢肿瘤组织中端粒酶活性表达及其临床意义

目的 :探讨卵巢肿瘤组织中的端粒酶活性表达及其临床意义。方法 :采用TRAP ELISA法检测 2 1份卵巢肿瘤组织 (其中恶性 8份、良性 13份 )及 4份正常卵巢组织标本中的端粒酶活性。结果 :卵巢恶性肿瘤组织端粒酶活性表达阳性率为 87.5 0 % ,显著高于卵巢良性肿瘤组织的 7.69% ,两者相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;正常卵巢组织阳性率为 2 5 .0 0 % ,与卵巢良性肿瘤组织相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 1例化疗后复发的卵巢浆液性乳头状腺癌 ,其端粒酶活性呈弱阳性。结论

上皮来源恶性肿瘤端粒酶活性检测研究

目的 探讨端粒酶活性检测在上皮来源恶性肿瘤诊断中的作用。方法 采用改良的银染端粒重复序列扩增方法 ,对上皮来源的 1 2 0例恶性肿瘤、6 0例良性肿瘤和 40例癌旁组织进行端粒酶活性检测。结果 1 2 0例恶性肿瘤中 ,1 1 0例检测到端粒酶活性 ,阳性率为 91 .6 % ;6 0例良性肿瘤中 ,3例检测到端粒酶活性 ,阳性率为 5% ;40例癌旁组织中 ,1 0例检测到端粒酶活性 ,阳性率为 2 5%。结论 上皮来源的恶性肿瘤发生发展与端粒酶活性密切相关 ,端粒酶是灵敏的恶性肿瘤标记物。

膀胱癌端粒酶活性测定的研究

目的:探讨端粒酶活性与膀胱癌之间的关系。方法:采用TRAP-ELISA法对膀胱癌组织和癌旁正常膀胱组织中端粒酶活性进行检测。结果:膀胱癌组织和癌旁正常膀胱组织中端粒酶活性阳性率差异有统计学意义(P<0.01);高分化组与低分化组差异有统计学意义(P<0.05);早期膀胱癌组与中晚期膀胱癌组端粒酶活性差异有统计学意义(P<0.05)。结论:膀胱癌组织中端粒酶活性较正常组织活性高,膀胱癌端粒酶活性与其恶性程度有相关性,故端粒酶活性测定可作为早期诊断膀胱癌的标志物。

^(12)C^(6+)重离子辐照对人肝细胞、肝癌细胞端粒酶活性表达的影响

为探索碳离子束辐照对细胞中端粒酶活性的变化,利用兰州近代物理研究所重离子研究装置(Heavy ion research facility in lanzhou,HIRFL)产生的碳离子(31MeV/μ12C6+),以人肝细胞HL-7702,肝癌细胞SMMC-7721为实验对象,用不同剂量1Gy、2Gy、3Gy、4Gy的重离子分别对两种细胞进行照射,用多聚酶链式反应-银染端粒重复序列扩增法(PCR-telomeric repeat amplification protocol,TRAP-PCR)银染端粒重复序列扩增法检测不同剂量下细胞端粒酶活性的变化。结果显示,人肝细胞HL-7702自身没有端粒酶活性,经1Gy辐照后也没有端粒酶活性,在2和3Gy处出现端粒酶活性,4Gy处端粒酶活性又消失。肝癌细胞SMMC-7721在1～3Gy处随着剂量的增大端粒酶活性升高,在4Gy处又开始下降;在1～3Gy处随着时间的推移端粒酶活性随着时间而加强(p<0.05)。分析得知,重离子辐射可以诱导人肝细胞产生端粒酶活性,也可以改变肝癌细胞的端粒酶活性。端粒酶参与细胞受辐照后DNA单链损伤的修复;辐照后DNA双链断裂导致端粒酶活性减弱。本实验使重离子在辐照治疗中的优势得以体现。