应用端粒重复序列扩增法检测原发性肝癌组织端粒酶活性的研究

目的:检测原发性肝癌及癌旁组织端粒酶活性并探讨端粒酶活性在原发性肝癌中的临床意义。方法:应用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测36例原发性肝癌及癌旁组织和3例正常肝组织端粒酶活性。结果:36例原发性肝癌组织有29例(80.6%)阳性。而36例癌旁组织只有4例(11.1%)阳性。3例正常肝组织均阴性。4例癌旁组织端粒酶阳性的患者均于术后半年内复发。结论:原发性肝癌癌旁组织端粒酶活性可望成为预测原发性肝癌术后复发的重要指标,对患者术后治疗方案的选择以及术后随访观察具有一定的指导意义。

检测端粒酶活性的端粒重复序列扩增法的初步建立

端粒是真核线性染色体末端结构,人端粒DNA由(TTAGGG)n重复序列组成.端粒酶是核糖核酸蛋白酶,具有RNA依赖的DNA合成酶活性,可重新合成端粒的重复序列.最近研究证实端粒及端粒酶与细胞衰老及肿瘤相关,是近年来生物学研究的热点.检测端粒酶活性是研究端粒酶的基本方法,同时具有潜在的临床诊断价值.本文拟应用最新的端粒重复序列扩增法(Telomeric Repeat AmplificationProtocal,TRAP),检测肝癌细胞端粒酶活性.

银染端粒重复序列扩增法检测端粒酶活性及其临床应用

目的 建立银染端粒重复序列扩增法(TRAP)测定肿瘤细胞的端粒酶活性.方法:将银染与TRAP相结合,测定了人肿瘤细胞株及穿刺细胞标本的端粒酶活性.结果:人肿瘤细胞株端粒酶活性为阳性,35例病理诊断为恶性肿瘤的穿刺标本中,33例端粒酶活性阳性,12例良性病变均为阴性.结论:银染TRAP法是特异,敏感及快速的端粒酶活性的检测方法,提示该方法可成为恶性肿瘤的诊断指标之一.

银染端粒重复序列扩增法检测肺癌端粒酶活性

目的 评价端粒酶能否作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物。方法 采用改良的银染端粒重复序列扩增法 (TRAP)检测 34例人肺癌手术标本 (包括癌组织、相应癌旁组织与正常组织标本各 34份 ,2 8个相应淋巴结 )的端粒酶活性。另有肺囊肿、肺炎性假瘤各 3例作为对照。结果 88.3% (30 / 34 )的肺癌癌组织端粒酶阳性 ,正常组织全部阴性。结论 端粒酶可以作为肺癌诊断的一个肿瘤标志物 ,改良的银染TRAP法成本低、污染少 。

银染端粒重复序列扩增法检测肝癌模拟肝穿组织端粒酶活性的研究

目的:探讨细针穿刺肝活检组织行端粒酶活性检测用于肝细胞癌(HCC)诊断的可行性。方法:HCC共28例,每例HCC肿瘤切除后立即行肝肿瘤模拟细针穿刺。应用非放射性同位素银染的端粒重复序列扩增法(TRAP),分别对28例模拟肝穿组织和28例肿瘤切取组织行端粒酶活性检测。结果:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织的端粒酶检测结果完全一致,阳性率均为82%(23/28)。结论:模拟肝穿组织与肿瘤切取组织在HCC端粒酶活性检测方面具有同等的效果。该结果提示,B超引导下经皮肝穿刺活检行端粒酶活性检测在HCC的诊断、治疗效果评价和预后的判断方面具有一定的应用前景。

端粒重复序列扩增法结合微孔板杂交法定量检测端粒酶活性

目的探讨定量检测端粒酶活性的非放射性检测方法。方法将端粒重复序列扩增测定法（ＴＲＡＰ）与微孔板杂交 相结合建立了非放射性检测方法，对３例正常肝组织和４例肝癌患者治疗前后的肝癌组织、瘤旁组织、肝癌凋亡组织 进行检测。结果肝癌组织具有比较高的端粒酶活性，而正常肝组织和瘤旁组织无此酶活性，肝癌凋亡组织端粒酶活性 显著降低。结论 该定量分析方法简单、灵敏、特异性强，可以比较准确地反映组织的端粒酶活性状态。

银染端粒重复扩增法的建立及初步应用

目的 建立检测端粒酶活性的银染端粒重复扩增法。方法 以银染替代放射性核素分析结果 ,加入内标防止假阴性结果出现而建立银染端粒重复扩增技术 ,并运用此法检测 36例乳腺癌组织和 2 4例乳腺良性病变组织标本端粒酶活性 ,同时与溴乙锭染色的端粒重复扩增法进行比较。结果 36例乳腺癌组织中 33例阳性 (91.7% ) ,2 4例乳腺良性病变组织无 1例阳性。与溴乙锭染色端粒重复扩增技术相比 ,银染端粒重复扩增技术可见到更多更清晰的带形。结论 实验结果表明本法与放射性同位素显影的端粒重复扩增技术相比是 1种更为简便、安全、可靠的端粒酶活性检测方法。

端粒重复序列扩增法检测胃癌组织中端粒酶活性研究

目的 :研究胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织中的端粒酶活性 ,探讨其作为胃癌肿瘤标记物的可能性。方法 :采用TRAP-ELISA法检测了 5 1例胃癌组织、癌旁及远端正常胃组织的端粒酶活性表达。结果 :5 1例胃癌组织中端粒酶阳性表达 48例( 94.1%) ,癌旁组织为 17例 ( 3 3 .3 %) ,远端正常胃组织未检测出端粒酶活性。结论 :端粒酶是特异性较强的恶性肿瘤基因标志 ,有可能成为胃癌早期诊断和治疗的理想标记物。

端粒重复扩增-微孔板杂交法检测妇科肿瘤端粒酶活性的研究

目的 :探讨妇科几种常见恶性肿瘤与端粒酶活性的关系。方法 :采用端粒重复扩增 (TRAP)扩增端粒酶产物 ,通过生物素 -亲和素将扩增产物结合于微孔板 ,并与荧光素 (FITC)标记的特异性探针杂交 ,经酶标抗荧光素抗体结合而显色。结果 :妇科恶性肿瘤端粒酶活性检出 2 5例 (89.3% ) ,而肿瘤边缘组织检出 14例 (5 0 .0 % ) ,正常对照组织检出 10例 (35 .7% )。恶性肿瘤端粒酶活性显著高于肿瘤远端组织和正常对照组织 (P<0 .0 5 )。结论 :端粒酶激活可能在妇科恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。 TRAP-微孔板杂交法是检测端粒酶活性灵敏而特异的一种方法。

Bcl-2及端粒酶在非小细胞肺癌组织中的表达

目的研究Bcl-2及端粒酶异常在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及相互关系并探讨其与NSCLC临床病理特征的关系。方法用改良的端粒重复扩增法(telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP)方法(TRAP-PCR-ELISA)检测NSCLC组织端粒酶表达,用免疫组织化学法检测NSCLC组织Bcl-2蛋白表达。结果在84例NSCLC中,Bcl-2蛋白阳性表达率为44.5%。无淋巴结转移者Bcl-2表达明显高于有淋巴结转移者(P<0.05);Ⅰ、Ⅱ期Bcl-2表达阳性率高于Ⅲ期(P<0.05)。端粒酶活性阳性率为86.7%,端粒酶活性与肿瘤大小、淋巴结有无转移显著相关(P<0.01和P<0.05))。此外,不同组织学分级、不同TNM分期端粒酶活性阳性率差异有显著性。端粒酶活性与Bcl-2表达无相关性(P>0.05)。结论对NSCLC组织中Bcl-2及端粒酶同时进行检测,对临床早期诊断及判断预后有重要意义。

Bcl-2,p53表达及端粒酶活性三者在非小细胞肺癌发生中的相关性

目的 :研究Bcl 2 ,p5 3及端粒酶异常在非小细胞肺癌 (nonsmallcelllungcancer,NSCLC)中的表达及相互关系并探讨其与NSCLC临床病理特征的关系 .方法 :用改良的端粒重复扩增法 (telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP) .方法 :(TRAP PCR ELISA)检测NSCLC组织端粒酶表达 ,用免疫组织化学法检测NSCLC组织Bcl 2和 p5 3蛋白表达 .结果 :在 6 2例NSCLC中 ,Bcl 2及p5 3蛋白阳性表达率分别为4 5 .2 %和 5 3.2 % .无淋巴结转移者Bcl 2表达明显高于有淋巴结转移者 (5 9.4 %vs2 4 .0 % ,P <0 .0 5 ) ;Ⅱ +Ⅲ期Bcl 2表达阳性率为 2 0 % ,明显低于Ⅰ期 (P <0 .0 5 ) .p5 3表达与肿瘤的类型、大小及 pTNM分期显著相关 (P <0 .0 5 ) .Bcl 2与p5 3表达活性无明显相关性 (P >0 .0 5 ) .端粒酶活性阳性率为 89.6 % ,端粒酶活性与肿瘤大小 (P <0 .0 1 ) ;淋巴结有无转移 (P <0 .0 5 )显著相关 .不同pTNM分期端粒酶活性阳性率差异有显著性 (P <0 .0 5 ) .端粒酶活性与Bcl 2表达无相关性(P >0 .0 5 ) ,而端粒酶活性与p5 3蛋白表达有显著相关性 ,在p5 3阳性组织中端粒酶活性较高 (P <0 .0 1 ) .结论 :p5 3,Bcl 2及端粒酶异常参与了NSCLC的发生、发展 。

银染-TRAP法检测胸腹水脱落细胞端粒酶活性的研究

目的:探讨检测胸腹水脱落细胞端粒酶活性对于鉴别良恶性肿瘤的临床意义.方法:用Kim法处理48例胸腹水细胞后,利用改进的银染—TRAP(端粒重复序列扩增)法测其端粒酶活性.结果:24例临床及细胞涂片检查证实恶性胸腹水细胞端粒酶活性全部阳性;12例临床证实恶性而细胞检查未找到癌细胞的胸腹水细胞端粒酶活性阳性7例,阴性5例;12例良性胸腹水细胞端粒酶活性全部阴性.结论:端粒酶的激活与恶性胸腹水的发生发展密切相关,并有可能成为一种鉴别良恶性胸腹水快速、灵敏的临床诊断指标.

检测人结肠癌组织端粒酶活性的TRAP方法研究

对检测人结肠癌组织端粒酶活性的端粒酶重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）进行了研究．当Ｍｇ２＋浓度为１８ｍｍｏｌ／Ｌ、退火温度为５５℃时，能得到可靠的检测结果．影响检测结果可靠性的另两个因素是抽提物的反应用量和阳性片段的污染．

^(12)C^(6+)重离子辐照对人肝细胞、肝癌细胞端粒酶活性表达的影响

为探索碳离子束辐照对细胞中端粒酶活性的变化,利用兰州近代物理研究所重离子研究装置(Heavy ion research facility in lanzhou,HIRFL)产生的碳离子(31MeV/μ12C6+),以人肝细胞HL-7702,肝癌细胞SMMC-7721为实验对象,用不同剂量1Gy、2Gy、3Gy、4Gy的重离子分别对两种细胞进行照射,用多聚酶链式反应-银染端粒重复序列扩增法(PCR-telomeric repeat amplification protocol,TRAP-PCR)银染端粒重复序列扩增法检测不同剂量下细胞端粒酶活性的变化。结果显示,人肝细胞HL-7702自身没有端粒酶活性,经1Gy辐照后也没有端粒酶活性,在2和3Gy处出现端粒酶活性,4Gy处端粒酶活性又消失。肝癌细胞SMMC-7721在1～3Gy处随着剂量的增大端粒酶活性升高,在4Gy处又开始下降;在1～3Gy处随着时间的推移端粒酶活性随着时间而加强(p<0.05)。分析得知,重离子辐射可以诱导人肝细胞产生端粒酶活性,也可以改变肝癌细胞的端粒酶活性。端粒酶参与细胞受辐照后DNA单链损伤的修复;辐照后DNA双链断裂导致端粒酶活性减弱。本实验使重离子在辐照治疗中的优势得以体现。

二氢杨梅素对MDA-MB-231人乳腺癌细胞端粒酶活性的影响

目的以两种不同的方法检测二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对端粒酶活性的影响,探讨DMY以端粒酶为药物靶点的抗肿瘤机制的可能性。方法利用端粒重复序列扩增法(Telomeric repeat amplication protocol,TRAP)检测人乳腺癌MDA-MB-231细胞经不同浓度DMY处理后端粒酶活性的变化;实时荧光定量PCR法检测人乳腺癌MDA-MB-231细胞经不同浓度DMY处理后人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的mRNA的表达差异。结果 MDA-MB-231细胞端粒酶呈阳性;DMY作用MDA-MB-231细胞48 h后,端粒酶活性明显下降,hTERT mRNA表达量显著降低,呈现明显浓度依赖关系。结论对肿瘤细胞端粒酶活性的抑制可能是DMY抗肿瘤作用机制之一。

微孔板杂交法检测端粒酶活性

目的 利用微孔板反向杂交法对端粒酶重复序列扩增法加以改进 ,建立一种快速、简便、量化的端粒酶活性检测方法。方法 将端粒重复序列扩增法 (TRAP)与微孔板杂交法相结合 ,并采用蜡珠包埋活性酶及引物的方法 ,使TRAP反应单管一次完成。结果 与TRAP法相比 ,该方法检测鼠骨髓瘤细胞株的敏感性为 10个细胞 ,检测肝癌标本为阳性 ,经RNase处理及加热处理的细胞和标本及正常细胞均呈阴性。结论 应用该方法可简便、快速检测端粒酶活性 ,1日内完成并可单人份操作 ,对临床试剂的建立具有一定的参考价值。

端粒酶活性表达及p53异常在非小细胞肺癌中表达及临床意义

目的：研究端粒酶活性及 p53异常在非小细胞肺癌 (nonsmall cell lung cancer, NSCLC)中的表达及其相互关系。方法：用端粒重复扩增（ telomeric repeat amplification protocol, TRAP）法检测 NSCLC组织、癌旁非癌肺组织、肺良性病变组织端粒酶活性，用 Western blot印迹法检测 NSCLC组织 p53蛋白表达。结果：端粒酶活性表达率为： NSCLC 93.02％ (80/86)，癌旁非癌肺组织 9.33％ (7/75)，肺良性病变组织 27.27％ (3/11)， NSCLC组织端粒酶活性表达率显著高于癌旁非癌肺组织及肺良性病变，端粒酶活性表达率在不同组织类型、细胞分化、肿瘤大小、病理分期间差别不显著； NSCLC p53异常为 51.42％（ 36／ 70）， p53异常在Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期之间，Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级之间差异有统计学意义；端粒酶活性表达与 p53异常无显著关联（ P >0.05）；结论： NSCLC标记物中，端粒酶活性表达较 p53敏感， p53对 NSCLC分期分级有帮助，端粒酶活性表达与 p53异常在 NSCLC发生发展中可能是两个独立的因素。

人端粒酶RNA的cDNA探针制备及其对胃粘膜细胞端粒酶RNA表达的检测

目的 建立人端粒酶RNA表达的检测方法。方法 制备人端粒酶RNA ,(humantelomeraseRNA ,hTR)的cDNA探针 ,分别应用RNA斑点杂交与端粒重复序列扩增法 (TRAP)分析检测不同胃粘膜的端粒酶RNA的表达与端粒酶活性。结果 人端粒酶RNA的cDNA探针制备成功。 18例活检胃癌组织及 4 5例手术胃癌组织RNA斑点杂交检测的阳性率均为 10 0 % ,相应TRAP分析的阳性率分别为 88 89%、 86 6 7% ,低于RNA斑点杂交 (P <0 0 5 )。同时RNA斑点杂交结果提示在非癌胃组织中随着肠化程度增高人端粒酶RNA表达也增强。结论 RNA斑点杂交检测人端粒酶RNA ,具有高度的敏感性和特异性 。

端粒酶活性在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨端粒酶活性在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其作为NSCLC肿瘤标记物和治疗靶点的可能性。方法：采用端粒重复扩增法（TRAP）研究了74例NSCLC组织及周围非癌组织、10例肺良性病变组织端粒酶活性表达。结果：74例NSCLC组织69例（93．24％）有端粒酶活性表达，74例周围非癌组织有9例（12．16％）表达阳性，10例良性病变中2例（20．00％）表达阳性，而相应的病变旁正常组织无端粒酶活性表达，端粒酶活性表达率与肿瘤组织类型、分化程度、肿瘤大小、病理分期无明显相关性。结论：端粒酶活性较普遍存在于NSCLC中，有可能成为NSCLC诊断和判断疗效的标记物和治疗新靶点。