血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原N端肽和Ⅳ型胶原辅助诊断原发性肝癌的临床意义分析

目的 分析血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢNP)和Ⅳ型胶原(CⅣ)辅助诊断原发性肝癌的可行性和临床价值。方法 选取82例原发性肝癌患者、33例肝硬化患者及127例健康对照者作为研究对象,分别作为原发性肝癌组、肝硬化组及健康对照组。检测并比较三组血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ水平;分析血清HA、LN、PⅢNP、CⅣ的受试者工作特征曲线(ROC曲线)及曲线下面积(AUC);分析血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ的诊断界值及诊断效能。结果 原发性肝癌组血清HA 80.32(42.18, 165.50)ng/ml、LN 42.91(31.47, 74.91)ng/ml、PⅢNP 16.15(10.93, 31.33)ng/ml和CⅣ126.00(73.16, 236.60)ng/ml均显著高于健康对照组的26.83(17.25, 40.02)、30.46(25.02, 40.95)、6.38(4.93, 7.86)、48.49(40.24, 57.57)ng/ml(P<0.05);原发性肝癌组血清HA、LN、PⅢNP水平显著低于肝硬化组(P<0.05),原发性肝癌组血清CⅣ水平与肝硬化组比较无统计学差异(P>0.05);肝硬化组血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ水平均显著高于健康对照组(P<0.05)。ROC曲线及AUC分析血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ的诊断效能显示:血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ诊断原发性肝癌的AUC分别为0.8453、0.7195、0.9310和0.8842;血清HA、LN和PⅢNP鉴别原发性肝癌和肝硬化的AUC分别为0.7749、0.6208和0.6384。根据ROC曲线计算原发性肝癌和肝硬化的诊断界值,血清HA+LN+PⅢNP+CⅣ诊断原发性肝癌的灵敏度为92.7%。结论 血清HA、LN、PⅢNP和CⅣ可用于原发性肝癌的辅助诊断,具有重要的临床价值。

Ⅳ型胶原蛋白、Ⅲ型前胶原氨基端肽与老年特发性肺纤维化病人肺功能和急性加重的相关性

目的探讨Ⅳ型胶原蛋白(ⅣC)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)与老年特发性肺纤维化(IPF)病人肺功能和IPF急性加重(AE-IPF)的相关性。方法选择2018年1月至2022年1月我院收治的89例IPF病人(IPF组)和42例门诊体检健康者(对照组)。检测血清ⅣC、PⅢNP水平以及肺功能,随访出院1个月内AE-IPF的发生情况。采用Pearson相关系数描述ⅣC、PⅢNP与肺功能的相关性,采用多因素Logistic回归分析AE-IPF的危险因素,绘制ROC曲线分析ⅣC、PⅢNP预测AE-IPF的价值。结果IPF组血清ⅣC、PⅢNP水平高于对照组(P<0.01),FEV1、FVC、FEV1/FVC、最大自主通气(MVV)均低于对照组(P<0.01)。ⅣC、PⅢNP与FEV1、FVC、FEV1/FVC、MVV均呈负相关(P<0.01)。随访期间49例发生AE-IPF,高水平ⅣC、高水平PⅢNP、感染是AE-IPF的危险因素(P<0.05)。ⅣC、PⅢNP预测AE-IPF的曲线下面积为0.718、0.768,联合ⅣC和PⅢNP诊断AE-IPF的曲线下面积为0.940,大于单独ⅣC、PⅢNP的诊断效率(Z=3.941、2.991,P均<0.05)。结论老年IPF病人血清ⅣC、PⅢNP水平显著增高,且与肺通气功能下降以及AE-IPF的发生有关,可作为预测AE-IPF的标志物。

血清Ⅲ型前胶原氨基端肽及可溶性生长刺激表达基因2蛋白在慢性稳定性心力衰竭与急性失代偿性心力衰竭患者中的临床意义

目的探讨慢性稳定性心力衰竭与急性失代偿性心力衰竭患者的血清Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)及可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)表达差异及其对患者预后的预测效能。方法选取廊坊市中医医院收治的慢性心力衰竭(CHF)患者320例,其中急性失代偿性心力衰竭患者(失代偿组)108例,慢性稳定性心力衰竭患者(稳定组)212例,比较两组血清PⅢNP、sST2等指标。随访6个月,记录患者的不良预后事件发生情况,根据随访结果分为预后良好组117例和预后不良组203例,分析血清PⅢNP、sST2对患者不良预后事件的预测效能。结果失代偿组的PⅢNP、sST2、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平均显著高于稳定组,左心室射血分数(LVEF)水平显著低于稳定组(t=14.621、8.065、23.958、10.497,P<0.05)。失代偿组及稳定组患者PⅢNP、sST2与心率、急性生理学及慢性健康状况评分系统Ⅱ评分、NYHA心功能分级、收缩压、舒张压、NT-proBNP均呈正相关,与LVEF呈负相关(P<0.05)。失代偿组预后不良率明显高于稳定组(χ^(2)=27.822,P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组患者的PⅢNP、sST2、NT-proBNP及左心室舒张末期内径水平均明显更高,LVEF水平明显更低(t=8.426、5.905、15.105、9.201、10.348,P<0.05)。ROC曲线显示PⅢNP、sST2的AUC分别为0.810、0.785,敏感度分别为78.2%和77.5%,特异度分别为80.3%和67.3%。结论慢性稳定性心力衰竭与急性失代偿性心力衰竭患者的血清PⅢNP、sST2表达差异显著,PⅢNP、sST2对CHF患者预后不良有一定的预测价值。

补阳还五汤对肺纤维化大鼠血清Ⅲ型前胶原氨端肽和Ⅳ型胶原氨端肽含量的影响

目的探讨补阳还五汤对肺纤维化大鼠的干预作用。方法将144只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、模型组、强的松组和补阳还五汤高、中、低剂量组,每组24只。除假手术组外,其余各组采用一次性气管滴注博莱霉素复制肺纤维化大鼠模型,假手术组气管内滴注等量生理盐水,造模第2日起,各给药组给予相应药物灌胃,于造模后第7、14、28日分3批处死动物,每次8只。分离血清,采用放免法检测各组大鼠血清Ⅲ型前胶原氨端肽(PCⅢ)、Ⅳ型胶原氨端肽(Ⅳ-C)的含量。结果与假手术组比较,各组大鼠血清PCⅢ、Ⅳ-C的含量逐渐升高,模型组最为明显(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠血清PCⅢ、Ⅳ-C含量均降低(P<0.01);与强的松组比较,补阳还五汤中剂量组第14、28日及补阳还五汤低剂量组第28日时,PCⅢ、Ⅳ-C含量明显降低(P<0.05)。结论补阳还五汤可以有效抑制肺组织中胶原纤维的增殖及细胞外基质的沉积,达到抗肺纤维化的作用。

去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性研究

背景:Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性主要分布在分子链的端肽区域,可在胶原蛋白提取过程中通过水解或是去除而使其失活,制备去端肽Ⅰ型胶原蛋白,降低其免疫原性。目的:评价去端肽Ⅰ型胶原蛋白的免疫原性。方法:采用酶切、盐析、透析工艺制备去端肽Ⅰ型胶原蛋白,通过考马斯亮蓝对牛血清白蛋白染色极限的分析,鉴定去端肽Ⅰ型胶原蛋白的纯度,依据YY/T 0606.25-2014中规定的方法,利用Quant-IT PicoGreendsDNA Reagent and Kits试剂盒测定去端肽Ⅰ型胶原蛋白的DNA残留量,利用ELISA试剂盒分析去端肽Ⅰ型胶原蛋白的端肽去除效果,依据YY/T 1561-2017标准检测去端肽Ⅰ型胶原蛋白的α-Gal抗原含量。结果与结论:去端肽Ⅰ型胶原蛋白的纯度可达99.8%,DNA残留量为4μg/g,C、N末端肽浓度低于试剂盒检测限,α-Gal抗原含量低于检测限。通过酶切、盐析、透析工艺制备的去端肽Ⅰ型胶原蛋白,可显著去除天然胶原蛋白的免疫原性根源,有效控制胶原蛋白临床应用的免疫原性风险。

血尿Ⅰ型胶原交联C端肽和Ⅰ型胶原交联N端肽在骨关节结核转移的研究

目的探讨骨关节结核患者血尿Ⅰ型胶原交联C端肽(CTX)和Ⅰ型胶原交联N端肽(NTX)变化水平与结核杆菌骨关节转移程度的相关性。方法选取健康体检人群、肺结核患者和骨关节结核患者各60例,测定三组人群血尿CTX、NTX的含量及血清中骨源性碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原C-末端前肽(PICP)、Ⅰ型前胶原N-末端前肽(PINP)变化水平。对比观察三组人群血尿CTX、NTX的含量,血清BALP、PICP、PINP水平,血CTX、NTX和尿CTX、NTX与抗结核治疗效果的相关性。结果骨关节结核组的血CTX、NTX和尿NTX的含量与健康对照组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),而三组间尿CTX含量差异无统计学意义(P>0.05);骨关节结核患者血清中PICP、PINP明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),三组间血清BALP差异无统计学意义(P>0.05);血CTX、NTX和尿NTX、CTX与抗结核治疗效果均呈明显正相关(P<0.05)。结论骨关节结核组患者血CTX、NTX和尿NTX含量明显高于健康对照组,在排除骨质疏松症和骨肿瘤等破坏性骨相关疾病的肺结核患者早期检测血尿CTX、NTX含量可作为预测骨关节结核转移的重要参考指标。

血清Ⅰ型前胶原羧基端肽和Ⅲ型前胶原氨基端肽预测充血性心力衰竭药物疗效的临床价值

目的探讨充血性心力衰竭(CHF)患者应用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)/血管紧张素受体抑制剂(ARB)和(或)β受体阻滞剂等药物治疗后,血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)的变化及其临床意义。方法86例CHF患者根据治疗药物的不同分三组:ACEI/ARB组,29例,倍他乐克组,24例;ACEI/ARB+倍它乐克组,33例;47例体检健康者为对照组。采用放射免疫法测定对照组、CHF患者入院时及规范治疗6w后血清PⅠCP和PⅢNP浓度。应用多普勒超声测算:左室射血分数(LVEF)、E峰和A峰及两者比值(VE/VA)、左室内径(LVID)。结果各组CHF患者及对照组之间基本临床资料(性别、年龄等)差异不显著。各组CHF患者NYHA分级和LVEF也无显著差异。CHF患者血清PⅠCP和PⅢNP均明显高于对照组(P<0.01)。3组CHF患者治疗6w后,NYHA分级和LVEF较治疗前均明显改善(P<0.01,P<0.05),血清PⅠCP和PⅢNP较治疗前也均明显降低(P<0.01)。相关分析显示,PⅠCP和PⅢNP水平与LVID呈正相关,与LVEF、VE/VA呈负相关。结论血清PⅠCP和PⅢNP水平可预测CHF患者药物治疗反应效果。

蛛网膜下腔出血后前胶原羧基端肽的变化及柔脑膜纤维化

目的研究监测实验性蛛网膜下腔出血(SAH)后脑脊液中Ⅰ型前胶原羧基端肽(PICP)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)浓度的意义。方法采用SD大鼠枕大池两次注血法建立模型,分别在第3、6、10、14、21天取脑脊液检测PICP、PⅢNP;第21天的脑组织予以冰冻切片后,行Masson染色观察柔脑膜的胶原纤维。结果实验组脑脊液中的PICP、PⅢNP较对照组明显升高(P<0.01)。第21天,柔脑膜胶原纤维较对照组增多(P<0.01)。结论检测脑脊液中PICP、PⅢNP的浓度可反映柔脑膜的纤维化程度。

心肌梗死患者血清Ⅰ型前胶原羧基端肽和Ⅲ型前胶原氨基端肽水平的变化规律

目的 观察未进行溶栓治疗或溶栓治疗未获成功的急性心肌梗死 (AMI)患者发病后 3个月内的血清I型前胶原羧基端肽 (PICP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽 (PⅢNP)水平的变化规律 ,以及与QRS记分和 6min步行试验距离之间的关系。方法 :应用放射免疫法测定 2 6例AMI患者发病后第 5 ,15 ,30 ,90天及 2 5例健康人血清PICP和PⅢNP含量。PICP和PⅢNP含量与出院时标准导联心电图QRS记分和第 90天的 6min步行试验距离进行相关分析。结果 :AMI患者第 5 ,15 ,30 ,90天血清PICP和PⅢNP含量均较健康对照组明显升高 (均P <0 0 1) ;PICP和PⅢNP含量与出院时QRS记分和 6min步行试验距离均显著相关 (均P <0 0 0 1)。结论 :未进行溶栓治疗或溶栓治疗未获成功的AMI患者血清PICP和PⅢNP含量明显增高并持续 3个月以上 ,在一定程度上反映了心肌梗死的面积和心功能状态 ,有助于预测AMI患者的预后。

扩张型心肌病双心室同步化起搏前后血清前胶原端肽的变化及临床意义

目的 探讨扩张型心肌病患者双心室同步化起搏（CRT）前后血清I型前胶原端肽（PⅠCP）和Ⅲ型前胶原端肽（PⅢNP）的变化以及CRT植入与前胶原端肽的相关性.方法 将行CRT植入的40例扩张型心肌病患者,根据随访半年的左室射血分数（LVEF）结果分为CRT应答组（20例）和CRT无应答组（20例）.分别检测比较两组患者术前及术后半年LVEF、左室舒张末期内径（LVEDd）及PⅠCP、PⅢNP的浓度.结果 与术前比较,CRT应答组患者术后半年LVEF明显升高（P＜0.05）,LVEDd及PⅠCP、PⅢNP均明显下降（均P＜0.05）;而CRT无应答组手术前后各观察指标均未发生明显变化（P ＞0.05）.结论 CRT植入能明显降低应答者PⅠCP、PⅢNP浓度,可能可以改善扩张型心肌病患者心肌纤维化程度,是此类患者药物治疗外改善预后的强有力治疗手段之一.

克山病患者血清前胶原末端肽水平及其临床意义

目的观察克山病患者血清前胶原末端肽水平的变化,探讨心肌纤维化在不同类型克山病病程中的临床意义。方法采用放射免疫分析法测定35例慢型克山病、33例潜在型克山病及31例健康对照者血清Ⅰ型前胶原氨基端肽(PⅠNP)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)水平,用超声心动图测量左室收缩与舒张功能参数。结果克山病患者血清PⅠNP和PⅢNP水平均显著高于正常对照(t值分别为5.60、6.04,P均<0.001);PⅠNP/PⅢNP比值亦高于正常(t=2.33,P<0.05)。慢型克山病患者血清PⅠNP水平明显高于潜在型克山病患者和正常对照(q值分别为8.25、11.60,P均<0.01);PⅢNP水平则高于正常对照(q=6.34,P<0.01)而低于潜在型克山病患者(q=2.72,P>0.05);PⅠNP/PⅢNP比值亦明显高于潜在型患者和正常对照(q值分别为9.22、7.81,P均<0.01)。在慢型克山病患者,心功能越差,血清PⅠNP水平及PⅠNP/PⅢNP比值越高,PⅠNP/PⅢNP比值、PⅠNP与二尖瓣血流舒张早期流速/心房收缩期流速(VE/VA)、左室射血分数(LVEF)呈负相关(r值分别为-0.4502、-0.4608,P<0.01和-0.3936、-0.3904,P<0.05)。结论克山病患者心肌组织胶原合成增加;潜在型克山病Ⅰ、Ⅲ型胶原均明显增加;慢型克山病主要为Ⅰ型胶原合成增加;血清PⅠNP水平及PⅠNP/PⅢNP比值与左心功能改变有关;血清PⅠNP、PⅢNP可作为心肌纤维化的血清学指标,在临床上为判断克山病的心肌纤维化和心功能现状提供间接依据。

内肽酶与端肽酶水解扇贝边蛋白质工艺的研究

以扇贝加工废弃物———扇贝边为原料,研究了几种内肽酶、混合内肽酶、内肽酶与端肽酶分段酶解的水解工艺。其中,采用混合内肽酶(胰蛋白酶∶枯草杆菌蛋白酶=3∶1,酶活力比)和Flavourzyme分段水解扇贝边蛋白质,水解效果最佳。正交试验结果表明,Flavourzyme二阶段酶水解的最适工艺条件为酶添加量250U/g(原料)、时间5 5h、温度55℃、pH6 5。蛋白质水解度达68 2%,所得水解液中游离氨基酸含量为78 40g/L,其中必需氨基酸总量为31 57g/L。

慢性乙型肝炎患者血清Ⅲ型前胶原、Ⅲ型胶原的前胶原氨端肽原的比较研究

比较慢性肝炎患者血清Ⅲ型前胶原（ＰＣⅢ）与Ⅲ型胶原的前胶原氨端肽原（ＰⅢＮＰ）对诊断肝纤维化的实用价值。对１１４例肝穿病理诊断的慢性肝炎轻、中、重度患者，同时进行血清ＰＣⅢ及ＰⅢＮＰ的检测，均用放射免疫法。肝穿刺标本病理组织学检查，作肝炎症活动度分级、肝纤维化程度分期及慢性肝炎病理组织学分度，探讨ＰＣⅢ及ＰⅢＮＰ与它们关系。１１４例轻、中、重度慢性肝炎患者，ＰＣⅢ与ＰⅢＮＰ之间均有明显差异（Ｐ＜０．０１）。这２项指标均与肝脏炎症活动度分级、肝纤维化程度分期及慢性肝炎的病理组织学分度有关。相关系数ＰＣⅢ为０．４４６、０．４１２和０．３４３；ＰⅢＮＰ为０．４６３、０．４０３和０．３０８。ＰＣⅢ与ＰⅢＮＰ检测对慢性肝炎肝纤维化的诊断均有意义，ＰⅢＮＰ在早期诊断肝纤维化方面比ＰＣⅢ敏感。

血清Ⅲ型前胶原氨基端肽及半乳糖凝集素3水平与老年顽固性心力衰竭患者心功能的相关性

目的探讨血清Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)及半乳糖凝集素3(Gal-3)水平与老年顽固性心力衰竭患者心功能的相关性。方法回顾性分析95例顽固性心力衰竭老年患者的临床资料,根据美国纽约心脏病学会(NYHA)心功能分级标准将心功能Ⅲ级患者59例纳入A组,将心功能Ⅳ级患者36例纳入B组,设计一般情况调查量表,详细记录2组患者一般资料(性别、年龄、合并症、体质量指数及吸烟史等)及血清PⅢNP、Gal-3水平,采用Spearman方法对血清PⅢNP及Gal-3水平与老年顽固性心力衰竭患者心功能的相关性进行分析。结果2组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组患者血清PⅢNP、Gal-3水平均低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);血清PⅢNP、Gal-3与老年顽固性心衰患者心功能分级呈正相关(r=0.429、0.424,P均<0.05)。结论血清PⅢNP及Gal-3水平与老年顽固性心力衰竭患者心功能严重程度呈正相关。

淋巴细胞和Ⅲ型前胶原氨基端肽与肺气肿合并肺纤维化的关系

目的：观察肺气肿合并肺纤维化（CPFE）淋巴细胞亚型的分布和Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）水平及纤维化程度，探讨其炎症反应、免疫状态与肺纤维化（PF）的关系。方法：对2005—03／2007—03西安交通大学第一附属医院收治的21例CPFE、25例特发性肺纤维化（IPF）19例对照进行如下检测：光镜下观察肺活检标本的病理改变；对支气管肺泡灌洗液（BALF）进行炎细胞计数和分类；流式细胞术（FCM）检测BALF中T淋巴细胞亚型；放射免疫法检测BALF和血清PⅢNP水平。结果：活检病理结果发现，IPF组纤维化率高于CPFE组（P〈0．01），但两组纤维化率与是否吸烟均不相关（P〉0．05）；BALF炎细胞分类结果显示CPFE组细胞总数和淋巴细胞比例均高于IPF组和对照组（P〈0．05，P〈0．01）；FCM检测BALF发现CPFE组CD8＋T淋巴细胞百分比高于IPF组和对照组（P〈0．05）；CPFE组和IPF组CD4＋／CD8＋比值均明显低于对照组（P〈0．01）；三组之间CD4＋的百分率无统计学差异；CPFE组与IPF组血清PⅢNP检测值均高于对照组（P〈0．01），其中CPFE组血清PⅢNP检测值显著低于IPF组（P〈0．01）。BALF与血清PⅢNP水平呈正相关（γ=0．82）。结论：CPFE的PF病变具有自身特点和发展规律，香烟烟雾刺激可能并非其直接或主要致纤维化因素；CPFE肺组织局部具有较IPF和对照明显且以CD8＋T淋巴细胞增高为主的炎性反应，抗淋巴细胞炎症和免疫调节治疗可能有助于改善病情；血清PⅢNP可用作早期发现CPFE和监测PF治疗的指标。

血清透明质酸、Ⅲ型胶原N端肽、层粘蛋白检测在肝硬化诊断中的作用

目的 了解血清透明质酸 (HA)、Ⅲ型胶原N端肽 (PⅢNP)、层粘蛋白 (LN) 3项指标在肝硬化诊断中的作用。方法 采用放射免疫测定法 ,测定 2 38例肝硬化 ,6 4例肝癌伴肝硬化 ,42例肝癌 (不伴肝硬化 )病人血清HA、PⅢNP和LN。结果 肝硬化病人随着病情进展 ,HA和PⅢNP水平明显升高并有显著差异。LN亦呈升高趋势 ,但在不同程度的肝硬化病人中相差不显著。结论 在肝病尤其是肝硬化的实验诊断中 ,以上 3项细胞外间质 (ECM )指标的应用价值不同 ,HA升高最明显、最可靠。PⅢNP与肝硬化间亦有较好的相关性。LN的血清学检测对肝硬化诊断的作用在本研究中未能得到证实 ,有待于进一步探讨。

Ⅱ型胶原羧基端端肽和脱氧吡啶啉在实验性大鼠关节软骨损伤中的生物标志作用

目的观察实验性大鼠关节软骨损伤时血清中II型胶原降解产物Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-II)和脱氧吡啶啉(DPD)水平,探讨其在软骨损伤中的分子生物标志物作用。方法利用大鼠,进行亚慢性毒性试验,通过透明软骨的组织病理和超微结构改变来确定软骨的损伤程度,用ELISA夹心法检测大鼠不同阶段血清CTX-II和DPD含量。结果T-2毒素可致大鼠关节软骨细胞变性、坏死,出现大面积无细胞区,胶原染色可见明显的"胶原显现";扫描电镜显示,关节面起伏不平,表面粗糙,胶原纤维断裂、剥脱,关节表面布满裂片状凸起,呈典型的关节"干燥"现象;ELISA检测结果表明,T-2毒素组大鼠血清CTX-II水平在3个月时较对照组明显增加,差异具有统计学意义。至6个月时,CTX-II含量虽较对照组高,但差异无统计学意义;DPD检测结果正好相反,3个月时两组无差异,6个月时T-2毒素组较对照组明显升高,差异有统计学意义。结论血清CTX-II和DPD可作为关节软骨损伤的生物标志,但两指标反映的病理阶段不同,CTX-II在关节软骨损伤早期反应敏感,可作为早期生物标志物,而DPD在软骨损伤后期更敏感,可作为病情进展的生物标志物。

人重组成釉蛋白C端肽在大肠杆菌中的表达及初步纯化

目的 :在大肠杆菌中表达人重组成釉蛋白C端肽 ,并对重组蛋白进行纯化 ,为进一步制备抗人成釉蛋白抗体和功能研究奠定基础。方法 :将编码人成釉蛋白C端肽的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pRSET -A上 ,构建表达质粒 pRSET -A -AMBN ,以大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)为宿主菌进行诱导表达 ,表达产物经镍 -次氮基三乙酸 (Ni -NTA)柱进行亲和层析纯化。结果 :工程菌在IPTG诱导 3h后 ,在SDS -PAGE上出现一条新的蛋白带 ,相对分子量 (Mr)为 5 2× 10 3 ,以可溶形式存在 ,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度大于 95 %的人重组成釉蛋白C端肽。结论 :获得Mr为 5 2× 10 3 的人重组成釉蛋白C端肽。

人成釉蛋白编码区cDNA的克隆和N端肽的融合表达

目的 :克隆人成釉蛋白 (Ameloblastin)编码区基因并原核表达其N端肽。方法 :抽提人牙胚总RNA ,用Oligo(dt)作引物逆转录合成人牙胚cDNAs,然后利用PCR方法 ,从cDNAs中扩增出人成釉蛋白编码区cDNA序列 ,将所得基因片段插入 pGEM -TEasy质粒载体 ,转化入大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,提取重组质粒DNA ,通过限制性酶切和核苷酸序列测定鉴定阳性克隆。将所克隆序列的 5’端 5 5 8bp的片段连入原核表达载体 pGEX - 4T1并在大肠杆菌中诱导表达 ,SDS -PAGE分析。 结果 :克隆片段测序结果与GenBank数据库收录的序列一致 ,经诱导表达见Mr为 4 6× 10 3 的融合蛋白。结论 :克隆到人成釉蛋白编码区cDNA 。